细菌性疾病监测标本采集常见问题及技术要求

山东省2012-2015

年流脑健康

人群带菌率调查结果1当前1页，总共22页。合格样本采集的前期工作明确采样目的：通过实验室检测手段，对不明原因的病人或者人群进行确诊和溯源。以达到早发现、早诊断、早治疗、早隔离的目的。采前需知：样本种类？采集时间？信息？采集方法？样本量？保存？送样？做好准备工作：落实参加人员（培训）、样本采集所需器材物品、防护措施、样本的运送方式及工具。认真落实并实施：职责划分与落实、沟通协调（省市间、市县间、流调人员与检验人员间），结果反馈。

2当前2页，总共22页。样本采集的要求

及时性？病源样本、脑脊液样本、血清样本合理性？双份血（病例的急性期与恢复期血清；免疫成功率血清）信息的清晰与完整性？归属关系，采样日期，检测样本编号与样本来源者一致性问题采样部位的准确性？样本量足够？脑脊液、血清密闭性：防治泄漏避免污染：废弃物的处理3当前3页，总共22页。采前准备（一）人员的培训：人员相对固定（尤其是实验室人员）；采样器材的准备；采样基本信息登记表；个人防护措施：隔离衣、口罩、手套、鞋套等样品的运输和保存措施；4当前4页，总共22页。采前准备（二）鼻咽拭子：平板、无菌咽拭子、压舌板；血样本：平板（增菌液）、一次性注射器、采血管、止血带、无菌棉签；脑脊液：平板、无菌保存管；信息记录：油性笔、签字笔、采样单；样品保存措施：冰排、冷藏箱、热水袋等（视样本种类选择）；其他：试管架、剪刀、酒精/碘酒、胶布、酒精灯、防护用品、垃圾袋等。5当前5页，总共22页。样本的采集样本的采集样本的处理常见问题及要求6当前6页，总共22页。流脑CSF样本

如果为疑似脑膜炎病例,脑脊液是分离和鉴别病原菌的最佳样本。采集过程应无菌操作，至少1～3mL。可用0.1～0.5mL直接接种巧克力或双抗巧克力平板，其余应立即送至微生物学实验室进行样本处理与保存。适宜检测的样本为脑脊液（CSF）、血液、皮肤黏膜瘀点或瘀斑组织液及鼻咽拭子。7当前7页，总共22页。流脑血液样本无菌操作抽取发热患者全血5～10mL，取0.1～0.5ml直接接种巧克力或双抗巧克力平板，1mL用来作血清学检测，其余采集后应立即注入30ml增菌用的葡萄糖肉汤增菌液内。患者应采集发病早期和恢复期双份全血各约1mL，检测血清中特异性抗体滴度。。瘀点或瘀斑选取患者皮肤上的新鲜瘀点或瘀斑，生理盐水消毒后用针头挑破，挤出组织液，用消毒的玻片直接蘸取组织液涂片，革兰氏染色镜检。也可用无菌棉签沾取组织液接种含双抗的葡萄糖肉汤管中，送至微生物学实验室进行检测。8当前8页，总共22页。流脑鼻咽拭子样本的采集：对病人密切接触者和健康人群进行带菌检验时采集鼻咽拭子。

采样时令受检者张开口，用无菌棉拭子探入口腔内悬雍垂后面的鼻咽部位，涂抹该部位粘膜分泌物，直接接种双抗巧克力平板，也可将咽拭子放入液体双抗增菌管内，一送至微生物学实验室进行检测。

注：鼻咽拭子相比口咽拭子可以产生较高的阳性结果，因此咽拭子采集部位很重要9当前9页，总共22页。咽拭子采集10当前10页，总共22页。流脑注意事项

脑膜炎奈瑟菌对温度较为敏感，温度过高或过低均可导致菌株死亡。采集样本后，应尽量做到旁床接种，若无可能则应在最短时间内送至实验室进行接种培养。

接种过的培养基可在室温（20℃～25℃）放置4～6小时，运送温度不低于18℃不高于37℃。切记不能低温运送。用于进行血清抗体及分子生物学检测的CSF和血液样本应冷藏条件下送检。

11当前11页，总共22页。百日咳

适宜检测的样本为脑脊液（CSF）、鼻咽拭子

鼻咽抽吸物、血液。咳碟法

用咳碟法采集样品时，应在病人咳嗽时，将包－姜(Bordet－Gengou）或炭琼脂培养基平板打开放在病人口前10cm处，使病人对准平板表面咳嗽数次，直接收集病人咳出的飞沫。然后盖好平皿盖送检。平板暴露时间以15s为宜。12当前12页，总共22页。百日咳鼻咽拭子及其保存液：聚丙烯纤维头的塑料拭子

由于百日咳多发于儿童，所以采样时，病儿的头部斜依于母亲的胸怀，母亲以双手固定病儿的头部，医师以右手执棉拭子，左手按病人的头顶部，使顶端稍向下弯的棉拭子自前鼻孔进入，沿下鼻道的底部向缓缓深入，由于鼻道呈弧形，不可用力过猛，以免发生外伤出血。待棉拭子顶端到达鼻咽腔后壁时，将棉拭子稍留片刻，以待反射性咳嗽，然后轻轻旋转一周，缓缓取出棉拭子接种平板后放入保存液中。13当前13页，总共22页。

百日咳×14当前14页，总共22页。培养平板底部贴标签，现场划线法接种至碳琼脂培养基上，接种后鼻拭子放回带有转运培养基的拭子管中。注意：将接触鼻咽后壁的拭子顶端划线，而非拭子头侧面划线。百日咳24小时内，≥20℃运输鼻咽拭子本登记表5%CO2,37℃培养7-14天Genebox接种后的鼻拭子随同培养基平板冷藏运送至实验室，-20℃以下低温冻存待送检。15当前15页，总共22页。百日咳病人血清样本

无菌操作抽取患者早期和恢复期双份全血各约1mL放入无菌血清管中，旋紧盖子，做好标记，尽快送检。检测血清中特异性抗体滴度。

16当前16页，总共22页。

百日咳－样本采集的最佳时期（周）1717当前17页，总共22页。白

喉

适宜检测的样本为血液、咽拭子、假膜。病人咽拭子样本：用无菌长柄棉拭子从疑似患者咽喉假膜边缘蘸取样本或同时采取鼻咽拭子接种血平板或亚蹄酸钾血平板送检。带菌者或疑似病人咽拭子样本：由于未见到假膜，故应采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物接种亚蹄酸钾血平板送检。病人血清样本：无菌操作抽取患者早期和恢复期双份全血各约1mL放入无菌血清管中，旋紧盖子，做好标记，尽快送检待检。18当前18页，总共22页。19当前19页，总共22页。白喉注意事项：在鼻咽拭子样本采集前12小时内，患者口腔不可用防腐剂（如漱口剂等）或用其涂抹病灶局部，采样时应避免触及口腔粘膜与唾液。由于白喉杆菌在棉拭子上生存时间不长，易于死亡，故样本采集后需立即接种。不能立即接种，应将样本侵于无菌生理盐水或15％甘油生理盐水中保存，尽快送检。

20当前20页，总共22页。样本的保存与运送（一）疑似菌株

保存：将分离出的疑似菌株菌落保存在无菌牛奶冻存管中，旋紧盖子并用封口膜封口，贴好标签，-20℃以下保存，并尽快送检。

运送：将填写完整的采样单及菌株初筛实验记录，与冷冻条件下的菌种保存管一起送检。在未落实菌株送检成功信息前，应保存菌株，以防菌株遗失。21当前21页，