紫外可见分光光度计的使用课件

紫外可见分光光度计主要内容1、工作原理及仪器组成2、分光光度计的使用

波长扫描

定量测定3、注意事项互补色原理植物叶子呈现绿色是因为植物中存在一种吸收蓝紫光和红光的载体——叶绿素颜色的产生完全吸收完全透过吸收黄色光光谱示意表观现象示意复合光利用一定频率的紫外--可见光照射分析物，它将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。

溶液对光的作用示意图物质对光的选择性吸收－溶液对光的作用

0.575光源单色器吸收池检测器显示仪器组成-单光束分光光度计双光束分光光度计比值光源单色器吸收池检测器显示光束分裂器组成：光源、单色器、样品池、检测器1．光源：①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用寿命长，价格低。

钨灯——可见光区320～2500nm

氢灯或氘灯——紫外光区195－375nmU3010（碘钨灯、氘灯）波长范围190-900nm

3.吸收池玻璃——由于吸收紫外UV光，仅适用于可见光区；

石英——适用于紫外和可见光区4．检测器：将光信号转变为电信号的装置光电管光电倍增管二极管阵列检测器5．记录装置：讯号处理和显示系统Slit1不存在，Mirror取代了光栅grating1Grating2variable-pitchaberration-correcteddiffractiongrating旋转镜将光分成两束，分别通过参比池和样品池，然后聚集在PMT开始程序启动按方法设定按钮扫描范围读数方式扫描速度按样品名输入按钮或将空白样品分别放入参比池和样品池进行用户基线校正按按钮将样品放入样品池开始测量按按钮开始测量打印数据按按钮打开数据处理界面数据检索峰值检出图谱平滑、求导二分光光度计的使用-波长扫描启动UVSolution软件

打开仪器主机电源。用鼠标点击Windows开始菜单中的[HitachiApplications]选项中的[UVSolutions2.0]选项。或者直接在桌面上双击UVSolution图标。

2运行UVSolution软件。软件将自动配置计算机的串行口（RS232Port）见图3仪器主机开始初始化。见图4仪器主机初始化完毕，进入工作状态。5测量参数设置1在[Edit]菜单中选择[Method…]选项，或按按钮。出现下列窗口。

Instrument仪器参数设置页面Datamode读数显示方式，选择Abs吸光度，波长扫描的起止范围一般为190-800，狭缝值一般为2Light一般选择“Auto”Report报告结果页面

样品名设置，备注信息及文件名输入基线校正用户基线校正方法：可将scanspeed设小一些；进行样品扫描时，可设大一些。将空白样品分别放入样品室的参比光路和样品光路。按按钮系统基线校正方法。使用空气作为参比和样品。按按钮出对话框见图，选择System后按[OK]按钮，进行系统基线校正。测量有两种方法可以开始测量：使用菜单方式选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量使用按钮方式：按按钮开始测量如果要终止扫描按按钮。开始程序启动按方法设定按钮按样品名输入按钮或将空白样品分别放入参比池和样品池将样品放入样品池开始测量按按钮开始测量打印数据按按钮打开数据处理界面进行用户基线校正按按钮定量测量设置波长输入标样二分光光度计的使用-光度法测量参数设置

在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口.具体操作程序Method:general:

Measurement测量方式选择Photometry（光度计测量）

Quantitation定量参数设置页面：

在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择“1storder”，“2storder”，“3storder”，也可以不校准。在concertration中键入标准浓度单位。3.Instrument4

standards标准参数设置

键入标系的样品浓度及名称5吸光度自动校零在开始测试前，需要进行吸光度校零。在样品室参比和样品光路中分别放入空白样品。按按钮进行吸光度校零。

6在wavelength中设定扫描的最大吸收波长，

7放入标样，选中第一个标样，点measure依次测定完成后自动给出标准曲线。

8选择SAMPLE进行样品测定，全部测定完后点击END，此时自动生成一个文件，打开此文件，另存为所需的文件名。

9关机时，先退出UVsolution，再关电脑，最后关光度计上的power。三注意事项1.开机预热15分钟左右。2.测定时应注意：参照池和吸收池应是一对经校正好的匹配的吸收池，材料和规格一致。使用前后应将洗手池洗净，测量时不能用手接触窗口。已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能加热，以免引起光程长度上的改变。3.测量条件的选择：选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收,为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波长的入射光。控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.2~0.7读数范围内时,测量的准确度较高.选择参比溶液：参比溶液是用来调节仪器工作零点的。若样品溶液，试剂，显色剂无色可用蒸馏水作参比溶液；反之应采用不加显色剂的样品液作参比溶液。4.用完后先关程序，再关仪器开关，关电源，关闭计算机。5.正确登记，将仪器及实验台擦干净。思考题分光光度计由哪几部分组成