药物热源检查技术

药物的生物检测技术——热原检查主讲人:XXX热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。药物中的“热原”通常是指细菌性热原，是微生物产生的代谢产物。一般来说内毒素是热原,但热原不全是内毒素。除另有规定外，静脉用注射剂按各品种项下的规定，照细菌内毒素检査法（通则1143)或热原检査法(通则1142)检查，应符合规定。热原的家兔检查法由于家兔对热原的反应与人基本相似，家兔法为各国药典规定的检查热原的法定方法。此法是将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。检查结果的准确性和一致性取决于试验动物的状况、试验室条件和操作的规范性。供试用的家兔应健康合格，体重1.7kg以上（用于生物制品检査用的家兔体重为1.7〜3.0kg)，雌兔应无孕。预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。试验所用家兔应在检查供试品前7b内预测体温，进行挑选。供试用家兔每批供试品初试用3只，复试5只。在检查前1~2日，家兔应处于同一温度环境中，实验室应为17~25℃，与饲养室温度相差不大于3℃，并防止动物躁动和避免噪声干扰。家兔在实验前至少一小时开始停止给食，并置于宽松装置中，直至实验完毕。测温装置精密度应为±0.1℃。试验前的准备测温探头或肛温计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，时间不得少于一分半钟，每隔30分钟测量一次，一般测两次，两次体温之差不超过0.2℃，以平均值作为该兔正常体温。当日使用的家兔，正常体温应在38.0~39.6℃，且同组各兔间正常体温之差不得超过1℃。试验用的注射器、针头及一切和供试品接触的器皿，应置烘箱中250℃加热30min，或180℃加热2h，也可用其他适宜方法除去热原。试验前的准备测家兔正常体温后15min内，由耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至38℃的供试品溶液，然后每隔30min测体温1次，连续测6次。每只家兔正常体温与注射供试品溶液后6次测量体温中最高的体温之差，即为该兔的升高温度。如3只家兔中有1只体温升高0.6℃或以上，或3只家兔体温升高均低于0.6℃但升高总和达1.4℃或以上，则另取5只家兔复试，方法同上。检查法结果判定1.判为符合规定：在初试3只家兔中，体温升高均低于0.6℃并且升高总和低于1.3℃。在复试5只家兔中，体温升高0.6℃或以上的家兔不超过一只，并且初试与复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或以下。2.有下列情况者，复试一次：3只家兔1只体温升高0.6℃或以上3只家兔升温均低于0.6℃但升温总和达1.3℃或以上。结果判定3.有下列情况者，判为不符合规定：在初试3只家兔中，体温升高0.6℃或以上的超过一只复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或以上的家兔超过一只在初试与复试合并的8只家兔中体温升高总和超过3.5℃4.出现负值的规定如下：当家兔升温为负值时，均以0℃计。注意事项尽量使用热原测温仪测温，因为其感温探头在整个测温过程中都置于家兔肛门内，所测体温较正确，同时也避免了漏检现象。热原耐热性好，但在180℃3~4h，或200℃60min，或250℃30~45min可彻底破坏热原。因此耐热物品如玻璃制品、注射器等均可用此法破坏热原。热原实验室内外应保持安静，避免日光直射。捉拿家兔时，应一只手抓住颈部，一只手托其臀部，避免其挣扎。整个过程中要避免家兔骚动以保持体