人教动物细胞工程上课

人教动物细胞工程上课第1页/共23页动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体技术核移植技术动物细胞工程常用技术(基础技术)第2页/共23页概念过程原理动物细胞培养组织离体,分散细胞、培养基、细胞生长和增殖细胞增殖条件应用第3页/共23页植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的植物体细胞株、细胞系快速繁殖、培育无病毒植株等获得细胞或细胞产物蔗糖、植物激素葡萄糖、动物血清固体培养基液体培养基细胞的全能性细胞增殖第4页/共23页概念过程原理动物体细胞核移植细胞核、去核卵母细胞、动物个体应用细胞核的全能性第5页/共23页电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎卵母细胞采集、培养MⅡ期卵母细胞供体牛供体细胞注入去核卵母细胞代孕母牛克隆牛体细胞培养去核卵母细胞去核胚胎移植第6页/共23页第7页/共23页动物组织块细胞悬液原代培养传代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理幼龄动物的器官组织；动物胚胎动物细胞培养细胞贴壁接触抑制原代培养传代培养细胞株细胞系第8页/共23页

动物细胞培养

植物组织培养是在无菌的条件下，置于固体培养基上进行，培养基中要加入有机、无机营养物质和植物激素等第9页/共23页培养条件1.无菌、无毒环境2.全面的营养物质3.适宜的温度和PH4.气体环境(抗生素;定期更换培养液)(合成培养基;血清)36.5±0.5℃;

7.2----7.4O2和CO2（95%空气和5%CO2）第10页/共23页动物细胞培养的应用1.大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）2.获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮3.培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性4.为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据第11页/共23页植物细胞杂交与动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理使用的酶诱导方法主要用途细胞膜的流动性细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶胰蛋白酶物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒获得杂种植株制备单克隆抗体第12页/共23页制备单克隆抗体1、常规抗体获得的方法及其特点2、单克隆抗体制备的原理◆利用

产生特异性抗体的功能。◆利用

无限增殖的特性。◆利用

技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞。◆利用

技术大量培养杂交瘤细胞。B淋巴细胞骨髓瘤细胞动物细胞融合动物细胞培养3、单克隆抗体的制备4、单克隆抗体的应用第13页/共23页骨髓瘤细胞免疫小鼠单克隆抗体筛选克隆、筛选体内培养体外培养B淋巴细胞（选择培养基）（抗体检测）细胞融合杂交细胞第14页/共23页

单克隆抗体制备过程第15页/共23页与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。应用主要有：1、临床诊断2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。单克隆抗体的应用第16页/共23页

下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是__________3、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______5、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC练一练第17页/共23页A、B细胞为动物细胞,请据图回答问题:A细胞B细胞C细胞D细胞(1)若A细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞,那么D细胞称为

细胞,D细胞具有两个亲本细胞的特征,一方面因具有骨髓瘤细胞的

性质,通过

方式产生大量细胞,我们称之为

过程;另一方面能分泌大量的抗体,我们把该过程分泌的抗体称

.杂交瘤连续分裂有丝分裂单克隆单克隆抗体练一练第18页/共23页(2)D细胞中产生的抗体其化学本质是

,合成该物质的场所是

,它是由

控制合成的,合成过程包括

和

两个重要步骤.球蛋白核糖体基因转录翻译(3)D细胞中产生的抗体具有

作用,与血清抗体相比其优越之处在于

强

高.免疫特异性灵敏度第19页/共23页(4)若A为人细胞,B为鼠细胞,用同位素标记A细胞膜上的蛋白质,B不标记,在C细胞时,检测结果发现整个细胞一半有放射性另一半没有.在D细胞时,检测结果发现整个细胞都有放射性,请解释原因

.构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动第20页/共23页获得细胞细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物组培和动物细胞培养的比较第21页/共23页动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸