海水鱼类和其他动物的免疫概念专家讲座

第一节海水鱼类及其它动物免疫概念一、水产动物免疫及其主要功效1.水产动物免疫1）免疫（ImmunisImmune,Immunity）：指生物机体识别本身和异己物质，对本身物质形整天然免疫耐受，对异己物质产生去除作用一个生理反应.

简单说，免疫是机体对病原产生抵抗力，使其免受感染过程。正常：免疫对机体有利，可产生抗感染、抗肿瘤等维持机体生理平衡和稳定免疫保护反应；异常：免疫可对机体造成伤害，如超敏反应、本身免疫疾病和肿瘤等。2）水产动物免疫学（Immunology）：指研究水产养殖动物免疫系统组织结构与生理功效一门新兴学科。Chapter3.

免疫学原理在疾病诊疗和防治中应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第1页2.抗原与抗体概念1)抗原：

凡是能够刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之结合引发特异性免疫反应物质，称为抗原。2)抗体：机体免疫活性细胞受抗原刺激后，在体液中出现由浆细胞产生一类能与对应抗原发生特异性结合球蛋白。简单说，抗体是一个免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)Chapter2.

免疫学原理在疾病诊疗和防治中应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第2页3.免疫反应功效1)免疫防御：为机体去除异己物质一个免疫保护功效。

正常：抗感染（毁灭病原生物、中和毒素）

异常：

（过高）变态反应(超敏反应)；（过低）免疫缺点症变态反应：一些抗原或半抗原再次进入致敏机体，在体内引发特异性体液或细胞免疫反应，由此造成组织损伤或生理功效紊乱。免疫缺点症：指机体免疫系统因为先天性发育不良或后天遭受损伤所致免疫功效降低或缺乏系统综合症。Chapter2.

免疫学原理在疾病诊疗和防治中应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第3页2)免疫稳定：机体免疫系统维持内环境相对稳定一个生理功效。

正常：消除体内衰老和被破坏细胞

异常：（过高）本身免疫病本身免疫病：本身抗体或本身致敏淋巴细胞攻击本身靶抗原细胞和组织，使其产生病理性改变或功效障碍。3)免疫监督：机体免疫系统识别、去除体内突变、畸形细胞和病毒感染细胞一个生理保护作用。

正常：

识别和消除突变细胞

异常：

（过低）易生恶性肿瘤、病毒连续感染。免疫：水产动物免疫基本概念海水鱼类和其他动物的免疫概念第4页二、免疫系统组成

中枢免疫器官：骨髓、胸腺、法氏囊（禽类）

免疫器官

外周免疫器官：淋巴结、脾、黏膜相关淋巴组织

造血干细胞

淋巴细胞：T淋巴细胞、B淋巴细胞、第三淋巴细胞群

[自然杀伤细胞(NK细胞)、淋巴因子激活杀伤细胞(LAK细胞)]免疫

免疫细胞抗原提呈细胞：单核吞噬细胞、树突细胞、并指细胞、系统

朗罕细胞、B细胞

其它免疫细胞：中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、红细胞

抗体免疫分子补体

细胞因子：淋巴因子和单核因子海水鱼类和其他动物的免疫概念第5页（一）免疫器官1、中枢免疫器官1）骨髓(Bonemarrow)样组织：鱼类无淋巴造血骨髓，但在软骨鱼眶区和颅下区存在淋巴组织或骨髓样组织，可形成血细胞，含有与高等脊椎动物骨髓相同结构与功效。真骨鱼肾脏也属骨髓样组织，是主要淋巴器官，具造血功效。它分为头肾（前肾）和中肾（后肾、体肾）二部分。其中头肾失去排泄功效而成为免疫器官和造血组织，为鱼类中第二个发育免疫器官，免疫细胞发源地(产生B细胞和红细胞等，相当于哺乳类骨髓)；另外，受抗原刺激后，头肾增生并存在抗体产生细胞，说明其为鱼类主要抗体产生器官(相当于哺乳类淋巴结)。2）胸腺(Thymus)：真骨鱼类胸腺位于？，它无皮质与髓质分界限，胸腺由结缔组织被膜围绕，实质由上皮细胞网组成，在上皮细胞网中分布由淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞和成熟浆细胞等。鱼类胸腺是T细胞分化成熟为具免疫活性T细胞场所，T细胞移至外周免疫器官后，可接收抗原刺激增殖分化产生免疫效能。鱼类胸腺结构与功效伴随季节和年纪改变而改变。免疫：水产动物免疫基本概念海水鱼类和其他动物的免疫概念第6页2、外周免疫器官外周淋巴器官为捕捉抗原、加工处理抗原和呈递抗原结构基础。1）脾(Spleen)：为人体最大淋巴器官，含有造血、贮血和过滤作用，也是成熟T、B细胞移居和接收抗原刺激后产生免疫应答主要场所。

A.人类1)脾结构和细胞组成：

a.脾表面由结缔组织包裹，被膜向实质内延伸成若干小梁，脾实质由红髓和白髓组成，二者交界处为边缘区（又称为移行区）。b.白髓：由小动脉周围淋巴鞘和鞘内淋巴泡两部分组成。小动脉淋巴鞘主要含T细胞，当抗原引发细胞免疫应答时，此区显著增大。淋巴滤泡主要由B细胞组成，接收抗原刺激后可出现生发中心，内含增殖分化B细胞。c.红髓：分布在白髓周围，由脾索和脾窦组成。脾索主要是B细胞集居区，也有巨噬细胞和树突状细胞。脾窦又称血窦，有大量巨噬细胞和血细胞。d.边缘区：红髓和白髓交界处为边缘区，内含T细胞、B细胞和巨噬细胞。免疫：水产动物免疫基本概念海水鱼类和其他动物的免疫概念第7页海水鱼类和其他动物的免疫概念第8页

2)脾功效：

a.在胚胎期为造血干细胞增殖分化场所，含有造血功效；b.是血液滤过器，能够去除血中病原微生物和本身衰老损伤血细胞。c.为T、B细胞移居和接收抗原刺激后发生免疫应答、产生免疫效应等主要场所。脾中淋巴细胞60%为B淋巴细胞。B.鱼类脾结构与功效

a.有颌类才有真正脾，软骨鱼类脾较大，分化为红髓和白髓，为造血器官；硬骨鱼类无显著红髓和白髓分化，但同时有造血和免疫功效。b.与头肾相比，脾在体液免疫反应中处于相对次要地位，其受抗原刺激后增殖反应以弥散方式发生在整个器官上。c.硬骨鱼类受免疫接种后，其脾、肾和肝等器官黑色素巨噬细胞增多，并与淋巴细胞和抗体生成细胞聚集在一起形成黑色素巨噬细胞中心，它作用有：参加体液免疫和炎症反应；对异物进行贮存、破坏和脱毒；记忆细胞原发中心；保护组织免受自由基损伤。免疫：水产动物免疫基本概念海水鱼类和其他动物的免疫概念第9页2）粘膜淋巴组织(MucosaAssociatedLymphaticTissue,MALT)：

a.鱼类皮肤、鳃和消化道等器官上皮组织中存在淋巴细胞、巨噬细胞和各类粒细胞等都属于MALT。当机体受到抗原刺激后，巨噬细胞可反抗原进行处理和呈递，抗体分泌细胞(Antibodysecretingcell,ASC)会分泌抗体，与粘液中溶菌酶和补体等非特异性保护组织一道组成抵抗病原感染防线。b.鱼类MALT相对于其系统免疫系统有一定自主性，在其免疫接种方法选择和改进中有实际意义：口服免疫后，头肾、血液和肠都出现ASC，但鳃中和皮肤粘液中无；肛门插管接种抗原后可诱导肠、皮肤粘液和胆汁中产生特异性抗体，但血清中无；腹腔免疫4周后，头肾、血液和鳃中抗体分泌同时到达峰值，而肠只有到第7周才有显著反应；颗粒抗原浸泡免疫时，皮肤摄取能力远大于鳃，所以，口腔和腹腔免疫可显著刺激系统免疫应答，浸泡和肛门免疫更适宜于诱导粘膜免疫反应。c.教材中肠道淋巴组织也属于MALT范围。免疫：水产动物免疫基本概念海水鱼类和其他动物的免疫概念第10页（二）免疫细胞免疫细胞：泛指全部参加免疫应答或与免疫应答相关细胞及其前体细胞，包含：淋巴细胞、单核吞噬细胞及其它抗原提呈细胞、粒细胞、红细胞和肥大细胞等。

鱼类免疫细胞主要存在于免疫器官、组织以及血液和淋巴液中。1。T淋巴细胞：它由一群功效不一样异质性淋巴细胞组成，在胸腺内分化成熟，为胸腺依赖性淋巴细胞(Thymusdependentlymphocyte)简称。成熟T细胞随血流分布于外周免疫器官，并经过血液与组织间淋巴细胞再循周游走于全身，执行其免疫功效。其在外周血中所占淋巴细胞总数65~80%。2。B淋巴细胞：在骨髓（骨髓样组织）中分化成熟，称骨髓依赖淋巴细胞。成熟B细胞随血流分布于外周淋巴组织，主要功效为产生抗体，执行体液免疫。外周血中占淋巴细胞总数10~15%。免疫：水产动物免疫基本概念海水鱼类和其他动物的免疫概念第11页3.NK细胞它为发觉较晚一群淋巴细胞，最主要功效为非特异性杀伤靶细胞，对各种肿瘤细胞和病毒感染细胞具较强杀伤作用。约占5~10%。4.单核吞噬细胞它包含血液中单核细胞（Monocyte,MC）和组织中巨噬细胞。它不但在非特异性免疫中发挥主要作用，在特异性免疫中也是不可缺乏细胞，有吞噬杀伤、抗原递呈和合成份泌细胞因子等作用。5.其它免疫细胞除上述免疫细胞外，血液中许多细胞均直接或间接参加免疫应答过程，如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和血小板等。免疫：水产动物免疫基本概念海水鱼类和其他动物的免疫概念第12页（三）免疫因子免疫因子：

由机体细胞产生，与免疫应答相关、分泌到体液中或存在于细胞膜表面分子统称为免疫因子。

组成：它主要包含抗体、补体系统各成份、细胞因子及免疫细胞膜分子等。细胞因子(Cytokines)：由免疫细胞和一些非免疫细胞（如纤维母细胞、内皮细胞等）合成和分泌，含有调整各种细胞生理功效可溶性小分子蛋白质。细胞因子种类繁多，含有各种生物学活性，在免疫系统调控中作用重大。免疫：水产动物免疫基本概念海水鱼类和其他动物的免疫概念第13页三、免疫主要类型1.天然免疫定义：

指机体先天含有正常生理防御功效，对各种不一样病原微生物与异物都有排斥和屏障作用，也称非特异性免疫。如：皮肤和粘液、粘液中溶菌酶、吞噬细胞等2.取得性免疫定义：指机体对某一个或一类微生物或其产物所产生特异性抵抗力，它是后天，是生物体在生长发育过程中因为自然感染或预防接种后产生。也称特异性免疫。

1)自动免疫：因感染病原或注射抗原（疫苗）而取得免疫

抗原：凡能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之结合引发特异性免疫反应物质。

2)被动免疫：从母体取得抗体或因人工注射抗体而取得免疫

免疫：水产动物免疫基本概念海水鱼类和其他动物的免疫概念第14页3)自动免疫和被动免疫区分：a.发生作用时间：

自动免疫：慢（1-4周）；被动免疫：快（马上）b.效果：

自动免疫：可刺激机体连续产生抗体，再次接收抗原刺激将表现出再次反应或反应增强

被动免疫：体内抗体数量不会增多，再次接触抗原也不出现增强反应c.维持时间：

自动免疫：长（六个月至终生）；被动免疫：短（2-3周）d.用途：

自动免疫：预防感染；

被动免疫：应急治疗

免疫：水产动物免疫基本概念海水鱼类和其他动物的免疫概念第15页四、水产动物免疫特点1.水产动物病原与人类疾病关系不大，不易引发重视；2.水产动物免疫机制依赖于外界环境改变较为显著；3.水产动物抗体与人等高等生物已知抗体不一样，其疾病免疫学防治方法尚在探索中；4.水产动物是变温动物，其免疫学研究必须在同一条件下进行五、水产动物免疫在病害防治中意义1.经过人工免疫或对病后有免疫力个体筛选，培育免疫新品种(SPR)；2.经过人工免疫，可有效预防流行病发生；3.免疫防治可有效防止药品残留及化学药品对水体污染；4.免疫防治可防止长久使用抗生素等而产生耐药性；5.疫苗防治可维持较长药效时间。免疫：水产动物免疫基本概念海水鱼类和其他动物的免疫概念第16页第二节水产养殖动物非特异性免疫鱼虾贝类非特异性免疫因子外部屏障：皮肤和粘膜屏障作用内部屏障：血脑屏障(血胎屏障)非特异性免疫细胞：吞噬细胞（粒细胞等）细胞和体液作用体液：补体、溶菌酶等Chapter2.免疫原理及应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第17页一、鱼虾贝类非特异性免疫1.外部屏障

1)作用：a.机械阻挡和排除作用b.具非特异性抗菌物质：溶菌酶、皮脂腺产乳酸等c.正常菌群拮抗作用

2)种类

A.粘液:a.屏障保护作用(可限制病原菌运动，阻止其侵入)b.含有溶菌和杀菌多糖类和蛋白类，如溶菌酶等

B.甲壳、皮肤和鳞片等：机械屏障作用2.体内屏障

血脑屏障：由脑膜、脉络丛和脑血管等组成。为大脑与躯干屏障

作用：预防病原和其它异物进入大脑

免疫：非特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第18页3.非特异性免疫细胞

1)吞噬细胞：包含粒细胞、巨噬细胞和单核细胞

作用：

受病原和宿主产生趋化因子作用靠近并吞噬

或杀伤病原

2)非特异性细胞毒细胞：主要存在于肾脏和腹腔，血中少。

作用：与哺乳动物NK细胞类似，能够杀伤病毒感染

靶细胞，从而含有抗感染作用

免疫：非特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第19页4.非特异性体液因子

1)补体：

A.起源与成份：存在于血清中，由各种非特异性血清蛋白

组成，它对热敏感，45℃20min失活

B.作用：a.在抗原抗体反应中经过补体第二激活通路补充

抗体作用；

b.激活后补体能溶解细胞膜，杀灭病毒；

c.激活后补体可促进吞噬细胞吞噬和释放组

胺等各种功效，帮助杀灭病原.

免疫：非特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第20页2)干扰素：

A.定义：是一类在同种细胞上含有抗病毒活性蛋白质.

(其活性发挥受细胞基因组调整和控制，包括RNA和DNA合成)

B.起源与成份：主要为由巨噬细胞和淋巴细胞分泌蛋白质；

机体产生干扰素数量产生受温度影响显著。如：

硬头鳟感染病毒后，10℃下，4d产生；15℃下，2d产生

C.作用：

干扰素为主要抗病毒感染因子

a.抗病毒增殖活性；b.免疫调整活性；c.细胞分裂抑制活性；d.抑制肿瘤生长活性；e.改变细胞生物学特征等。

免疫：非特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第21页3)溶菌酶

A.起源与成份：存在于粘液、血清和巨噬细胞中，是一个

水解酶（低分子碱性多肽）

B.作用：

可直接溶解杀死G+菌等病原微生物4)C反应性蛋白

A.起源与成份：为存在于鲽科鱼类中一个蛋白质

B.作用：

a.作为调理素可增加吞噬细胞吞噬量

b.能使真菌、细菌乃至寄生虫中糖类和磷酸酯

产生沉淀，从而杀灭病原体。5)备解素：为-球蛋白，可在补体帮助下杀死许多细菌、原

虫甚至一些病毒等免疫：非特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第22页二、影响非特异性免疫原因1.环境原因

1)DO：

缺氧可引发水生动物抗病力下降

据此，有时可采取冲水、换水和充气等方法缓解病情

2)水质：水体有毒物质可妨碍机体正常机能，免疫力下降

3)水温：适宜温度改变可抑制疾病暴发2.营养原因

1)营养不足，体质下降，机体抗菌力降低2)营养不足，机体细胞代谢下降，病毒感染率降低3.个体差异和年纪影响免疫：非特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第23页第三节特异性免疫一、抗原（Antigen,Ag）1.抗原概念

1)抗原：是一个能够刺激机体免疫系统使之发生特异性免疫应答，并能与对应免疫应答产物或效应体细胞在体外或体内发生特异性结合物质。2)抗原两种性能：

a.免疫原性：指抗原分子能刺激机免疫细胞，并使之活化、增殖、分化，最终产生效应分子（抗体）或细胞体（致敏T细胞）性能。

b.免疫反应性：指抗原分子能与对应免疫应答产物在体外或体内发生特异性结合产生免疫反应性能。

免疫原性和免疫反应性统称为抗原性。Chapter2.免疫原理及应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第24页3)抗原主要种类：

a.完全抗原（completeantigen）：

现有免疫原性又有免疫反应性抗原称为完全抗原。

大多异种蛋白质、细菌、病毒、细菌外毒素和动物免疫血清等都为完全抗原

b.不完全抗原(incompleteantigen)：

那些本身没有免疫原性而只有免疫反应性物质,又称半抗原（hapten）半抗原大多为小分子物质，如大多数多糖、脂类、一些药品和简单化合物等、

半抗原单独作用无免疫原性，当与大分子蛋白质载体结合形成半抗原—载体复合物使，便可取得免疫原性。该复合物不但可刺激机体产生针对半抗原抗体，也可刺激机体产生针对蛋白质载体抗体。

4)特殊抗原：

a.变应原(allergen)：能刺激机体产生病理性免疫应答(超敏反应)抗原。b.耐受原(tolerangen)：能诱导机体对其表现无免疫应答(免疫耐受)抗原。免疫类型：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第25页2.抗原特征

1)特异性：含有与对应抗体发生特异性反应能力；

2)异物性：正常情况下，能引发机体产生免疫应答抗原都是异种或异体物质，机体本身物质或细胞不能刺激机体产生免疫应答；而且，亲缘关系越远、组织结构间差异越大，抗原性越强。

3)大分子胶体性：抗原分子量较大(1万Da以上)，分子量小于4000Da物质普通不具抗原性。同一类物质，其抗原性随分子量增大而增强

4)结构复杂性：抗原要有一定化学组成和复杂结构

抗原性：芳香类Pr.>非芳香类Pr>多糖>核酸>类脂

5)完整性：抗原必须保持完整化学活性基团才能含有抗原性，不然，将不能刺激机体产生抗体免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第26页3.决定抗原免疫原性原因

某物质是否含有免疫原性，能否作为免疫原诱导机体产生免疫应答，与其本身性质、机体对该物质反应性及免疫方式等直接相关。

1)分子大小：凡含有免疫原性物质均为大分子有机物质（无机物不能作为免疫原，分子量低于4000物质通常也无免疫原性）；

为何大分子物质免疫原性较强呢？

a.分子量越大，其表面携带抗原决定簇越多，因而对淋巴细胞刺激也越强；

b.大分子胶体物质，化学结构稳定，在体内不易被破坏和去除，存留时间较长，使淋巴细胞得到较持久刺激，有利于免疫应答发生。

2)化学结构与组成：大分子物质并不都有良好免疫原性，还与组成与结构相关如：明胶分子量虽达10万，但其组分为直链a.a.，易被分解破坏，免疫原性弱;

若明胶分子上连接少许酪氨酸或谷氨酸等芳香族a.a.，免疫原性显著增强;以芳香族a.a.为主Pr.，其免疫原性要显著高于非芳香族a.a.为主Pr.免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第27页3)异物性：

免疫系统能识别自己和异己物质，对本身物质免疫耐受；对异己物质免疫应答

。免疫原性与抗原和宿主种系关系远近相关，种系关系越远，免疫原性越强。

含有异物性物质包含以下三类：

a.异种物质：如细菌、病毒、异种血清、植物蛋白等；

b.同种异体物质：如人类红细胞表面血型抗原（A、B、O、Rh）等；c.改变和隐蔽本身物质：主要包含在外伤、感染、辐射或药品作用下，组织结构发生改变“本身”物质和释放入血本身抗原，如甲状腺蛋白，等。4)免疫路径：相同抗原因免疫路径不一样，产生免疫效果也不一样多数抗原须经非消化道(皮下、肌肉、体表或血液等)路径才能产生良好免疫效果；有些抗原(如须刺激肠粘膜相关淋巴组织抗原)，只有口服免疫才有良好效果。5)机体应答性：抗原物质能否产生免疫原性还与机体免疫应答能力相关。如：纯化多糖对人和小鼠有良好免疫原性，而对豚鼠则不能引发免疫应答。

另外，抗原免疫原性还与抗原剂量、佐剂、机体年纪与生理状态等原因相关。免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第28页4.抗原特异性与交叉反应

抗原特异性既表现在免疫原性上，也表现在免疫反应性上。

表现在免疫原性：指某一抗原分子只能诱导对应淋巴细胞发生专一应答；

表现在免疫反应性：指某一抗原分子只能与对应抗体或淋巴细胞发生专一结合。

抗原特异性是由抗原分子表面抗原决定簇决定。1)抗原决定簇（antigenicdeterminant）：指位于抗原分子表面、决定抗原特异性特定化学基团，它是决定抗原反应性展现高度特异性物质基础。又称表位（epitope）

详细说，抗原决定簇就是与对应淋巴细胞上抗原受体结合部位，而且，只有二者结合才能激活淋巴细胞并引发免疫反应

免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第29页2)抗原决定簇种类与组成

a.种类：一个抗原表面能够有一个或各种不一样抗原决定簇；

功效性(抗原)决定簇：指位于抗原分子表面易被对应淋巴细胞识别、开启免疫应答，同时能与对应抗体或致敏T细胞特异性结合发生免疫反应决定簇。

隐蔽性(抗原)决定簇：位于抗原分子内部，不能被淋巴细胞识别，无法触发免疫应答抗原决定簇。它若经理化原因处理或经抗原提呈细胞加工后，也可将隐藏与抗原分子内部决定簇暴露，称为功效性决定簇而发挥免疫作用。b.抗原结合价：一个抗原分子上能与对应抗体分子结合抗原决定簇总数

单价抗原：有些半抗原只能和抗体分子中一个抗原结合部位结合，为单价抗原

多价抗原：多数抗原有多个相同和不一样抗原决定簇，能和多个抗体分子结合。c.组成：不一样类型抗原决定簇组成不一样，普通有5-7个单体组成

如：Pr类抗原：其抗原决定簇有5个左右氨基酸多糖类抗原：其抗原决定簇有6个左右单糖核酸类抗原：其抗原决定簇有6-8个左右核苷酸残基

免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第30页3)抗原决定簇反抗原特异性影响

抗原决定簇化学组成、排列及空间结构决定着抗原特异性。天然抗原结构复杂，同种抗原有各种不一样抗原决定簇，不一样抗原也含有不一样抗原决定簇，因而各具特异性。4)共同抗原与交叉反应共同抗原：指含有相同抗原决定簇抗原。其中：

类属抗原：存在于同一个属或近缘种属中共同抗原称类属抗原；

异嗜性抗原：存在于不一样种属生物间共同抗原称异嗜性抗原。交叉反应：由共同抗原决定簇刺激机体产生抗体可和两种抗原结合发生反应。

交叉反应有时也在两种抗原决定簇构型相同时发生。免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第31页免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第32页5.抗原分类

依据分类方法不一样，能够将抗原分为不一样类型。A.依据抗原起源及与机体亲缘关系分类(1)异种抗原：指来自另一物种抗原物质。如各种微生物及其代谢产物、(2)同种异体抗原：指来自同种而基因型不一样个体抗原物质，如人血型抗原；(3)本身抗原：指能引发本身免疫应答本身组织成份，如改变和隐蔽本身物质。B.依据抗原激活B细胞是否依赖T细胞辅助来分类(1)胸腺依赖性抗原（thymusdependantantigen,TD-Ag）：

TD抗原：含T细胞抗原决定簇、需T细胞帮助才能激活B细胞产生Ab抗原。

如：病毒、细菌、细胞及各种蛋白质等抗原都属TD抗原(2)胸腺非依赖性抗原（thymusindependantantigen,TI-Ag）：TI抗原：只含B细胞抗原决定簇、不需T细胞帮助可直接激活B细胞产生Ab抗原

如：革兰氏阴性菌LPS、荚膜多糖等。

C.抗原其它分类方法：如依性能分完全抗原和半抗原，依组分分蛋白质抗原、脂蛋白抗原、糖蛋白抗原、多糖抗原和核蛋白抗原等，依取得方式分天然、人工和合成抗原等。免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第33页6.细菌抗原

细菌是主要病原体，其成份十分复杂，每种结构及其代谢产物都有不一样抗原成份，每种细菌都是一个由各种抗原组成复合体。

细菌抗原种类：

a.表面抗原：包含荚膜抗原和微荚膜抗原；

b.菌体抗原：指位于细菌细胞壁、细胞膜和细胞质上抗原；

c.鞭毛抗原：存在于鞭毛上抗原；

d.菌毛抗原：存在于菌毛上抗原；

e.外毒素和类毒素：毒素是Pr，具很强免疫原性，可刺激机体产生抗毒素

外毒素：为细菌产生一类蛋白质，具强抗原性

类毒素：为外毒素经0.3-0.4%甲醛脱毒而成，具强抗原性外毒素和类毒素均能刺激机体产生抗毒素

免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第34页7.佐剂（adjuvant）

1)定义：指与抗原同时或预先注入机体后，能够非特异性地增强机体反抗原免疫应答能力物质。

2)种类：

a.无机佐剂：主要为含铝化合物，如：铵明矾、氢氧化铝、磷酸铝等

b.有机佐剂：主要为微生物及其代谢产物，如分枝杆菌(结核杆菌)、LPS等

c.合成佐剂：一些合成物质，如PolyI:C、PolyA:U等

d.油剂：如矿物油（石蜡油）、植物油、花生油乳化佐剂、弗氏佐剂等

3)弗氏佐剂：由矿物油(石蜡油)、乳化剂(羊毛脂或吐温80)和杀死分支杆菌(如结核杆菌)等组成佐剂。a.完全氟氏佐剂：以上三种成份俱全佐剂b.不完全氟氏佐剂：不含分支杆菌氟氏佐剂，其对机体刺激作用较弱免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第35页4)作用：

a.增加抗原免疫原性（增加抗原表面积）；b.增强抗体反抗原免疫应答能力；c.改变抗体产生类型；d.引发或增强IV型超敏反应。5)作用机制：（作用机制还未完全了解，主要可能有以下原因）主要是促进淋巴细胞增殖、分化，改变抗原物理形状，使抗原在体内维持较长时间，易于巨噬细胞摄取、处理并提呈给淋巴细胞，从而提升抗原免疫原性，增强机体反抗原应答能力。6)使用方法：预先使用或与抗原同时使用免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第36页二、免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)1.免疫球蛋白与抗体基本概念(1)免疫球蛋白：指含有抗体活性或化学结构与抗体相同球蛋白。

Ig过去称为球蛋白，主要存在于血液和其它分泌液中。(2)膜表面免疫球蛋白(Surfacemembraneimmunoglobulin,SmIg)：B细胞膜上可作为抗原识别受体免疫球蛋白。(3)抗体(Antibody,Ab)：机体免疫细胞被抗原激活后，由分化成熟终末B细（浆细胞）所合成与分泌一类能与对应抗原特异性结合含有免疫功效球蛋白。

抗体是主要免疫分子，主要存在于血液、体液和粘膜分泌液中。

细胞免疫：由免疫细胞介导免疫反应。

体液免疫：由抗体介导免疫反应。

抗体=免疫球蛋白？Why?免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第37页抗体都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不都是抗体。

如：骨髓瘤蛋白化学结构与Ab相同(属Ig)，但无抗体活性，无免疫功效；

SmIg化学结构与Ab相同，能与Ag特异性结合，但它不是激活B细胞产生。

免疫球蛋白是化学结构上概念，但抗体是生物学功效上概念。2.作为抗体必须具备条件：

1)只有脊椎动物浆细胞才能产生；2)必须有抗原刺激；3)能与对应抗原产生特异性结合；4)其化学本质是一个具免疫功效球蛋白。免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第38页3.Ig化学结构

H链V区

Ig分子是由一个或多个单体组成；L链V区

如：IgG、IgD和IgE均为单体分子

L链C区每个Ig单体呈Y形对称结构。H链C区每个单体是由二硫键连接四条肽链组成；四条肽链包含2条重链(H链)和2条轻链(L链)；Ig单体结构

重链：约由450个或570个氨基酸组成，它包含5类：、、、、。Ig因重链种类不一样分为5类：IgG(链)，IgA(链)，IgM(链)，IgD(链)，IgE(链)

轻链：约由214个氨基酸组成，以二硫键与重链相连。它有2类：型和型每条肽链包含可变区(V区)和稳定区(C区)。重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)都是抗原特异性结合部位。在结构上与抗原结构互补(因而又称互补决定区)免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第39页海水鱼类和其他动物的免疫概念第40页4.不一样动物中Ig类型

依据CH上同种型决定簇不一样，将Ig分为5种：IgA、IgG、IgM、IgD和IgE.其中，IgG、IgA和IgM又依CH氨基酸组成和H链间二硫键数目标差异，分成若干亚类：

IgG1、IgG2、IgG3、IgG4；IgA1、IgA2；IgM1和IgM2。1)哺乳类：a.人、鼠：IgG,IgA,IgM,IgD,IgE;b.兔：IgG,IgA,IgM;c.其它：IgG,IgA,IgM,IgE;

2)鸟类：IgG,IgA,IgM;

3)两栖类：IgG,IgM;

4)鱼类：IgM;5)无脊椎动物：无Ig免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第41页5.各种Ig特征与功效1)IgG：

a.起源与性质：主要由脾和淋巴结浆细胞合成，常以单体形式存在于血清和其它血清中。它在人体含量最高(3/4)、半衰期最长(23d)、易透过毛细血管，因而可广泛分布到组织和其它体液中。分子量15万Da.

b.作用：(1)抗感染作用，抗毒素及大多抗菌和抗病毒抗体均属IgG；IgG还是唯一能经过胎盘Ig，是新生儿抗感染主要原因。(2)不少本身抗体和引发II、III型变态反应抗体也属IgG;(3)IgG与补体结合后可经过传统路径激活补体；(4)IgG能与巨噬细胞、中性粒细胞和NK细胞表面对应受体结合，从而发挥调理吞噬和ADCC效应。免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第42页2)IgM：

a.起源与性质：

(1)主要由脾浆细胞合成，它是由5个IgM单体借一个J链和若干个二硫键连接而成五聚体，是5类Ig中分子量最大(95万Da)，故称巨球蛋白。(2)它不能透过血管壁，主要分布于血液中，占血清Ig总量10%左右；(3)为个体发育中合成最早Ig，在胎儿晚期已能合成，但它不能经过胎盘；(4)是人体免疫后最早出现抗体；(5)IgM是当前鱼类中唯一确认抗体类型。

b.作用：

其作用与IgG类似，含有杀菌、溶菌、调理吞噬及凝集作用等，不过，因为IgM抗原结合效价最高，是高效能抗菌抗体，它上述作用均比IgG强。免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第43页单体海水鱼类和其他动物的免疫概念第44页3)IgA：

(1)分为血清型IgA和分泌型IgA(SIgA)两种类型。前者85%为单体，少数为含J链二聚体，主要由肠系膜淋巴组织浆细胞产生；后者为二聚体(双体)。(2)人体含量仅次于IgG(占10-15%)，分子量为18-20万Da。(3)是少数在消化道中不被消化Pr之一；(4)婴儿出生4-6个月后才能合成，但可从母乳中取得SIgA(5)SIgA主要分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道粘膜表面以及唾液、泪液、初乳和与粘膜相关分泌液中，是局部粘膜防御感染主要原因；(6)血清型IgA含有中和毒素、调理吞噬作用。免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第45页4)IgD：(1)以单体形式存在于血清中，含量低，仅占人体血清Ig总量1%。(2)结构与IgG类似，不能经过胎盘，也不能激活补体。(3)血清中IgD功效尚不清楚，但B细胞表面IgD(SIgD)是成熟B细胞主要标志，它是B细胞抗原识别受体，在接收抗原刺激后对B细胞活化、增生和分化其调整作用；

5)IgE：

(1)以单体形式存在于血清中，是系统进化最晚出现Ig，也是含量最低Ig，仅占血清Ig总量0.001%.(2)在过敏性疾病和一些寄生虫感染病人血清中其含量显著增高；(3)产生部位与SIgA相同，主要由呼吸道（如鼻咽、扁桃体、支气管)和胃肠道粘膜固有层浆细胞产生。免疫：特异性免疫海水鱼类和其他动物的免疫概念第46页海水鱼类和其他动物的免疫概念第47页第四节免疫学方法及其应用一、基本概念1.血清学反应：抗原与对应抗体在体外发生特异性结合反应;2.免疫学反应：抗原与对应抗体在体内发生特异性结合反应;3.抗原抗体反应：抗原与对应抗体在体外或体内发生特异性结合反应；4.免疫诊疗学：用体液免疫和细胞免疫方法来诊疗相关疾病科学。

二、血清学反应特点

1.特异性与交叉性：a.特异性：一个抗原普通只能与其对应抗体结合；

b.交叉性：当不一样抗原含有相同抗原决定簇时，其结合又含有交叉性2.表面性与可逆性：a.表面性：抗原与抗体分子结合是分子表面结合；

b.可逆性：抗原抗体结合后，在一定条件下仍可分开，且其性质不变。可逆性是免疫吸附层析法提取免疫纯抗原或抗体理论基础。Chapter2.免疫原理及应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第48页3.定比性：抗原与抗体需按一定百分比结合

普通情况下，抗原表面抗原决定簇是多价，而抗体上抗原受体通常是单价或二价，二者只有以一定百分比结合才能出现可见血清学反应。4.阶段性:

抗原抗体反应含有显著阶段性1)抗原抗体特异性结合阶段：时间短（数秒），不可见2)抗原与抗体反应可见阶段：慢（数分至数天），有凝集、沉淀等5.高度敏感性：可用于检测极微量抗原与抗体。如：

血清中和试验可用于检测含量低至10-3

g/ml鱼类病毒；ELISA(酶联免疫吸附试验)可检测含量为10-3

g/ml细菌性病原6.条件依赖性：抗原抗体间出现可见反应要提供最适条件，如：

pH值(普通为6-8)；温度(37-45℃)；适当电解质(如生理盐水)；震荡(增加抗原抗体相互接触机会)等。免疫：免疫学方法及其应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第49页三、主要抗原抗体反应（一）凝集反应（Agglutination）1.定义：颗粒性抗原(如完整红细胞或细菌)与对应抗体结合，在一定条件下，经过一定时间形成肉眼可见凝集物，称为凝集反应。用于凝集反应抗原称为凝集原；用于凝集反应抗体称凝集素2.种类:

(1)直接凝集反应(directagglutination)：颗粒性抗原直接与对应抗体结合所出现凝集现象。玻片法：属定性试验，惯用于细菌和ABO血型判定试管法：属定量试验，用已知Ag测定血清中对应Ab及其数量。在该试验中，将出现显著凝集反应血清最高稀释度称为该抗体效价或滴度。免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第50页

(2)间接凝集反应(indirectorpassiveagglutination)：将可溶性抗原先吸附于一个与免疫无关载体颗粒表面，再与对应抗体作用，在适当电解质存在时，出现载体颗粒被动凝集现象。惯用载体有些人O型红细胞、乳胶颗粒、活性炭等，并因载体不一样而分别称为间接血凝试验、间接乳凝试验和间接炭凝试验。免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第51页（二）沉淀反应(precipitation)1.定义：可溶性抗原(如血清蛋白、多糖和细菌抽提液等)与其对应抗体在适当条件下出现肉眼可见沉淀物现象。

用于沉淀反应抗原称为沉淀原；用于沉淀反应抗体称沉淀素

沉淀反应包含环状沉淀反应、絮状沉淀反应以及由此派生出来琼脂扩散免疫试验等。其中，前二者敏感性不高，已少用，派生方法现仍广泛应用。2.沉淀反应种类与应用：

1)经典方法：

a.环状沉淀反应：在小试管中加入抗血清+迟缓加入待测抗原(数分钟)结果：阳性—白色沉淀环；阴性—无

b.絮状沉淀反应：将已知抗体与待测抗原混匀于试管或凹玻片结果：

阳性—絮状沉淀；阴性—无免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第52页2)当代方法：

a.单免疫扩散(singleimmunodiffusion)：将适当浓度已知抗体预先混在1~1.5%琼脂内制成凝胶板，再以适当距离在板上打孔，孔中加入待测抗原，当抗原向周围扩散时，与板上抗体相遇，并在最适当百分比处形成白色沉淀环。因沉淀环直径与抗原浓度成正比，所以，若先用已知浓度抗原制作标准曲线，便可依沉淀环直径测定待测抗原浓度。结果：阳性—白色沉淀环；阴性—无

b.双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)：预先制备琼脂板，依据需要在琼脂板上打孔，再将抗原、抗体分别加入不一样孔内，使二者相互扩散，若抗原抗体相对应，则二者在适当百分比处形成白色沉淀线。若反应中有两种或两种以上抗原抗体系统，在琼脂中即可出现两条或两条以上沉淀线。该方法可用来分析和判定复杂抗原成份，或测定抗原、抗体提取物纯度。缺点是所需时间较长和灵敏度不高。免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第53页c.对流免疫电泳(Counterimmunoelectrophoresis,CIE)：为在双向琼脂扩散基础上进行电泳方法。将琼脂板置于电泳槽内，在负极端孔内加抗原，正极端孔内加抗体，然后通电。抗原在pH8.6缓冲液中带负电荷，故向正极移动；抗体为大分子球蛋白，移动慢，并受琼脂电渗影响由正极向负极移动，在二者相遇适当百分比处出现白色沉淀线。因该法使抗原抗体相向而行，提升了敏感性，缺点是多组抗原抗体存在时沉淀线易重合在一起，缺乏分辨力。免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第54页（三）补体结合试验1.定义：有补体参加，以绵羊红细胞和溶血素作指示系统抗原抗体反应2.组成：有2个系统共5种成份

1)检测系统：包含已知抗原(或抗体)和待测抗体(或抗原)

2)指示系统：包含绵羊红细胞和溶血素(绵羊红细胞特异性抗体)3)补体：取自豚鼠新鲜血清3.补体结合反应基本原理

1)补体可与任何抗原抗体复合物相结合；2)指示系统遇补体后就出现显著溶血反应免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第55页4.操作过程和结果1)

阳性反应：+补体抗原(体)+待测抗体(原)抗原抗体复合物抗原抗体和补体复合物+指示系统(绵羊红细胞和溶血素复合物)结果：（所以时无游离补体与指示系统结合）不发生溶血2)阴性反应：+补体抗原(体)+待测抗体(原)抗原+抗体抗原+抗体+补体(游离)+指示系统(绵羊红细胞和溶血素复合物)

发生溶血绵羊红细胞、溶血素及补体复合物免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第56页（四）中和反应定义：特异性抗体与对应抗原结合后，能抑制抗原各种生物学活性（如：毒性、酶活性和病毒感染性等）反应。免疫：免疫学方法及其应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第57页四、当代免疫标识技术（immunolabellingtechnique）

定义：将抗原或抗体用荧光素、酶、放射性同位素或电子致密物质等加以标识，以提升抗原抗体反应以及抗原或抗体检测灵敏度一类新技术。免疫标识技术敏感性高、特异性强、应用范围广(抗原或抗体定量、定性、定位)（一）免疫荧光技术（immunofluorecencetechnique）1.定义：用荧光物标识抗体来检测细胞或组织中对应抗原或抗体技术，又称荧光抗体技术。2.荧光物种类：异硫氰酸荧光素、罗丹明荧光素、二氯三嗪基氨基荧光素等3.种类：包含直接法、间接法和补体法免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第58页例：直接法：将待测标本固定于玻片表面，滴加已知荧光抗体后再以缓冲液冲洗，干燥后于荧光显微镜下观察。

(1)过程：

+待测抗原

荧光素+抗体荧光抗体(一段时间后冲洗)荧光镜检测结果：

(2)结果：阳性—可见带荧光抗原抗体复合物；

阴性—无荧光(因为带荧光抗体不能与抗原结合，被冲洗掉)

(3)用途：用以检测病毒感染细胞、细菌和沉积于组织中免疫复合物等。

(4)特点：简单、特异性高；敏感性低、同时检测各种抗原时较复杂。免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第59页(二)免疫酶技术(immunoenzymatictechnique)or酶免疫测定1.定义：用酶标识抗体或抗原来检测抗原或抗体方法.应用范围极广。2.显示方法：用酶特殊底物来处理反应后标本，经过酶催化底物显色反应来测定抗原或抗体存在。以酶标依作定量或定性分析。3.标识酶：辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶；它们与抗原或抗体结合后活性不受影响。4.底物：邻苯二胺和对硝基苯磷酸酯。5.特点：敏感性高、特异性强，既可定性又可定量。6.惯用方法：当前应用最多为酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmusorbentassay,ELISA)：是利用抗原或抗体能非特异性吸附于聚苯乙烯等固相载体表面特征，使抗原-抗体反应在固相载体表面进行一个免疫酶技术。它当前包含直接法、间接法、双抗体夹心法、双夹心法、抗原竞争法、抑制性测定法和桥联法等各种。免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第60页例1.

直接法：用于检测抗原或抗体（尤其是总抗体浓度）a.用于检测抗原时：以不一样稀释毒待测样品(Ag)包被酶标板反应板，孵育后洗涤封闭酶标板，孵育后洗涤加入酶标抗体，孵育后洗涤加入底物，测定酶促反应强度。b.用于检测抗体（待测样品中总抗体）时：以不一样稀释毒待测样品(Ab)包被酶标板反应板，孵育后洗涤封闭酶标板，孵育后洗涤加入酶标抗抗体，孵育后洗涤加入底物，测定酶促反应强度。

免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第61页例2.双抗体夹心法：主要用于测定大分子抗原过程：以纯化特异性抗体或含抗体血清包被酶标反应板，孵育后洗涤封闭液封闭酶标板，孵育后洗涤加入待测样品，孵育后洗涤加入酶标抗体，孵育后洗涤加入酶底物，测定酶促反应强度。加待测抗原

加酶标抗体

已知抗体吸附抗原抗体复合物酶联抗体抗原抗体复合物免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第62页（三）放射免疫测定技术(Radioimmunoassay,RIA)

1.

定义：用放射性同位素标识来检测抗原抗体反应高灵敏度技术。2.

原理与方法：其基本原理为：待测抗原和标识抗原对有限量抗体存在竞争性结合：Ag*+Ab↔Ag*-Ab；Ag

+Ab↔Ag-Ab

(1)抗原用同位素(如131I、3H等)标识后仍能与对应抗体特异性结合；(2)将两类抗原与抗体混合后，两类抗原均能与抗体结合，当Ag*和Ab数量恒定，且Ag*与Ag之和大于Ab上结合点数目时，Ag*与Ag存在竞争抑制：Ag数量增加，Ab-Ab生成量增加，Ag*-Ab数量就降低，游离Ag*就增多。

(3)用层析等方法将Ag*-Ab和Ag-Ab复合物(B)与游离Ag*和Ag(F)分离，测定B和F放射活性。计算B/F值，绘制B/F和Ag量关系曲线图。(4)预先用一系列已知浓度未标识抗原和一定量标识抗原及抗体混合，以相同方法绘制B/F和Ag量关系标准竞争抑制曲线图。(5)试验时，在一样条件下，依据待测Ag放射性结合率，依标准曲线查出Ag量。免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第63页（四）荧光和化学发光免疫技术

A.荧光免疫技术1.

定义：用荧光素（如异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明和四甲基异硫氰酸罗丹明）标识来检测抗原抗体反应免疫分析技术。2.

种类：包含荧光免疫组织化学(如荧光抗体)技术和荧光免疫测定。B.发光免疫分析定义：利用物质发光特征(如辐射光波长、发光光子数)与产生辐射物质分子结构常数、构型、数量等亲密相关，经过受激分子发射光谱，发光衰减常数、发光方向等来判断该分子属性；经过发光强度来判断物质量免疫分析技术。免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第64页（五）免疫电镜技术1.

定义：在保持抗体免疫性前提下，用高电子密度标识物（如铁蛋白、金等），或用经细胞化学方法处理使电子密度增高标识物（如辣根过氧化物酶等酶类）标识抗体后，将标识抗体与对应抗原结合，然后用电子显微镜观察技术。又称电子显微镜免疫细胞化学技术。

2.

种类：

(1)非包埋法免疫染色：该法是以超薄冷冻切片免疫染色。因该法不经脱水和包埋等步骤，抗原保护很好，且有利于免疫试剂在组织中渗透；但在技术上困难较多，需配制专用设备。

(2)包埋前免疫染色：组织固定厚切片免疫染色包埋超薄切片投射电镜观察。(3)包埋后免疫染色：组织固定包埋超薄切片免疫染色EM观察。免疫应用：免疫学方法海水鱼类和其他动物的免疫概念第65页免疫应用：免疫学方法第五节免疫学原理在鱼虾病害防治中应用一、用于疾病诊疗

（免疫诊疗方法有二类）1.用已知抗原诊疗病原：用已知抗原与从患病动物中提取抗体进行血清学反应，以确定病原种类。该法只能用于病体已产生抗体诊疗。2.用已知抗体诊疗病原：将已知抗体与从病体中分离病原进行血清学反应，以确定病原种类，该法适于全部被诊疗动物。诊疗方法特点抗体检测量应用范围血清中和试验灵敏度高，费时≥10-3g/ml病毒病沉淀反应方便可靠，灵敏度低≥20细菌病补体结合试验灵敏度高，存在干扰≥10-1细菌病凝集反应快速准确，应用局限≥310-2部分细菌病免疫荧光快速方便，需特殊仪器≥20细菌病放射免疫测定快速灵敏，需特殊仪器≥10-3病毒病ELISA快速灵敏，应用前景好≥10-3细菌病海水鱼类和其他动物的免疫概念第66页二、用于疾病治疗利用被动免疫，即给患病动物接种抗体进行应急治疗。过程：先将抗原（疫苗）注入同种或其它种动物机体，1-4周后从接种动物血液等部位提取抗体（或制备卵黄抗体），并将提取抗体接种到患病动物中进行疾病治疗。三、用于疾病预防水产动物免疫最主要应用方向为研制疫苗进行疾病预防在水产养殖动物中，因为只有鱼类、两栖类和爬行类等脊椎动物才能在接种抗原后产生抗体，当前所以也认为只有这些动物才能用免疫学方法进行疾病预防。免疫：免疫学原理应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第67页（一）鱼用疫苗种类

A.依据疫苗取得方法来分：

1.死疫苗(灭活疫苗)：热灭活、化学灭活、紫外线灭活、超声灭活等优点：安全性好，制造简单；缺点：免疫剂量大，免疫持久性差。

2.活疫苗：包含弱毒疫苗和异种疫苗优点：弱毒疫苗—免疫原性好，免疫剂量少，连续时间长异种疫苗—安全性好，免疫时间长。缺点：弱毒疫苗—安全性差异种疫苗—取得比较困难

3.化学疫苗：以化学方法提取病菌有效成份(如LPS)制成优点：免疫剂量小，免疫原性强，作用稳定；缺点：制造较复杂，成本稍高。免疫：免疫学原理应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第68页

4.亚单位疫苗：病原微生物中能使机体产生免疫保护力成份只占病原体小部分，将这些成份分离出来制成疫苗为亚单位疫苗。优点：可除去有害成份，降低异常反应，提升免疫效果；缺点：制造过程复杂、成本高。5.基因工程疫苗：将病原主要免疫原性蛋白密码基因DNA转移、重组后取得优点：易于规模生产，成本低；缺点：研究周期长，免疫原成份单一，产生抗体量小。6.合成疫苗：将含有保护性免疫力人工合成肽与适当载体结合后，再加入佐剂制成疫苗称为合成疫苗优点：作用效果好，易于规模生产；缺点：研究难度大。免疫：免疫学原理应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第69页B.依据疫苗性质和组成成份来分：

1.单价疫苗：由单一病菌培养制备疫苗

2.多价疫苗：由同一个病菌不一样型或不一样株培养制备疫苗

3.联苗(混合疫苗)：由一个以上病菌或其代谢产物制备疫苗如：二联疫苗、三联疫苗……C.依据抗原类别来分：

1.病毒疫苗：如草鱼出血病疫苗

2.细菌疫苗：如石斑鱼创伤弧菌疫苗

3.寄生虫疫苗：如小瓜虫疫苗免疫：免疫学原理应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第70页（二）鱼用疫苗接种方法

1.注射法：将疫苗直接注射到肌肉、腹腔或心脏免疫接种方法。

优点：免疫效果好；缺点：操作困难，易损伤接种鱼类，幼鱼无法使用。

2.口服法：将疫苗经过投喂方法接种到鱼类机体优点：操作简单；缺点：免疫效果不稳定（因消化液对疫苗消化分解）

3.浸泡法：将鱼类浸泡于疫苗溶液中以到达免疫接种目标优点：操作简单；缺点：免疫效果不稳定（因浸泡进入机体疫苗数量有限）免疫：免疫学原理应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第71页

4.喷雾法：将疫苗以高压喷射到接种生物体表以进行免疫方法。

优点：操作简单；缺点：免疫效果差。

5.其它方法：如超声免疫法等，该法是在浸泡法基础上外加超声作用而实施接种方法，当前尚在探索中。（三）几个常见鱼类疫苗制备方法

1.病毒性疫苗（组织苗）制备方法

匀浆,3000rpm,30min上清液+(800单位青霉素+800单位链霉素)/ml病鱼组织+生理盐水

沉淀

加1‰福尔马林，32℃72h安全检测冷冻保留组织苗效力检测免疫：免疫学原理应用海水鱼类和其他动物的免疫概念第72页2.细菌灭活疫苗制备方法

扩大培养5000rpm,30min,PBS配制

病原