实验三培养基的配制与灭菌

实验三培养基的配制与灭菌第一页，共十页，2022年，8月28日凝固剂一般是琼脂(洋菜)，也有用硅胶与明胶。一般来说，培养基包括有水份、碳源、氮源、无机盐类以及生长因素等五大类营养成份。此外还得有适宜的pH值，一定的渗透压（即浓度）以及氧化还原电位等。三、实验材料：三角瓶、试管、烧杯、分装器、玻棒、天平、药匙、pH试纸，搪瓷杯、量筒、纱布、棉花、橡皮筋、牛皮纸、角匙、称量纸、各种生化试剂等。第二页，共十页，2022年，8月28日1、葡萄糖发酵培养基蛋白胨10gNaCl5g葡萄糖10g水1000mL1.6%溴甲酚紫水

将蛋白胨、NaCl、葡萄糖加入水中，加热调pH至，加入1.6%溴甲酚紫水溶液。分装试管内倒置一杜氏小管，塞上硅胶塞，灭菌。2、乳糖发酵培养基蛋白胨20g乳糖10g水1000mL1.6%溴甲酚紫水溶液

将蛋白胨、乳糖加入水中，加热调pH至，加入1.6%溴甲酚紫水溶液。分装试管内倒置一杜氏小管，塞上硅胶塞，灭菌。3、M.R.与V.P.试验培养基蛋白胨5g葡萄糖5gK2HPO45g水1000mL

分装试管，塞上硅胶塞，灭菌。第三页，共十页，2022年，8月28日4、明胶培养基牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g明胶150g水

分装试管，塞上硅胶塞，灭菌。5、硝酸盐培养基蛋白胨10gNaNO31g水1000mLpH7.6

分装试管，塞上硅胶塞，灭菌。6、产生H2S试验的培养基牛肉膏3g酵母浸膏3g蛋白胨10gFeSO40.2gNaCl5g硫代硫酸钠0.3g琼脂12g水1000mLpH7.4

分装试管，塞上硅胶塞，灭菌。第四页，共十页，2022年，8月28日7、吲哚试验培养基牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5g水1000mLpH7.2

分装试管，塞上硅胶塞，灭菌。8、柠檬酸盐培养基柠檬酸钠5gNaCl5gMgSO42gK2HPO41g(NH4)2HPO41g琼脂20g1%溴百里酚兰液8mL水1000mLpH6.8

调pH后，加入1%溴百里酚兰液，分装试管，塞上硅胶塞，灭菌。9、淀粉培养基牛肉膏3g蛋白胨5gNaCl5g可溶性淀粉2g琼脂15g水1000mLpH7.2

分装三角瓶，塞上硅胶塞，灭菌。第五页，共十页，2022年，8月28日四、方法步骤1、培养基的配制：称药溶解调pH加指示剂分装塞棉花装入竹篓高压蒸汽灭菌2、高压蒸汽灭菌具体操作步骤：1.加入足够量的水于灭菌锅中(至水位线)。2.摆入上述包装好的待灭菌培养基，但不能摆得太挤，以免影响蒸汽通过和灭菌效果。3.加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气(若为手提式应对角螺旋均匀旋紧)。第六页，共十页，2022年，8月28日4.打开排气阀，通入热源，自开始产生蒸汽至蒸汽猛烈的喷出而无空气时关紧放气阀。5.升温升压：继续加热，至压力计读数达0.1Mpa(121.5°)后保持30分钟。6.到时间后停止加热，待压力下降至常压后，慢慢打开排汽口，然后打开锅盖，取出灭菌物。注意在压力未降至0时，切勿打开锅盖，否则突然降压，会招致玻璃器皿破损或培养基沸腾，沾湿棉塞冲出管外7.取出灭菌物后，若试管应在琼脂未凝固之时将试管摆成斜面。应用此法灭菌是否彻底的一个关键是在压力上升之前必须将锅内的冷空气完全驱尽，否则压力表指