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文档简介

白桦叶片愈伤组织诱导培养综合实验设计2010级生物科学1班小组成员：余快、郝亚原、丁岩岩、郑晓芳黄丽洋、程姗姗指导教师：杨玲时间：2012年6月6日白桦叶片愈伤组织诱导培养一、研究目的和意义利用叶片作为白桦组培的外植体进行愈伤组织诱导，进一步掌握组织培养的相关技能。同时通本次综合实验，掌握植物组织培养实验设计方法，为白桦的组织培养和优良资源扩繁奠定基础。二、实验材料来源和处理选取东北林业大学林场内白桦成年树木上生长健康、无病害、充分展开的白桦叶片，采摘后拿到室内用清水冲洗干净，在洗洁精水中浸泡5min，其间不停搅拌，再在流水下冲洗40min,用纱布将水分吸干，灭菌处理。灭菌方法：75%乙醇溶液10s+10%HO10min，无菌水冲洗4次。22三、所需实验仪器、设备、耗材和药品1、仪器和耗材剪刀、解剖刀、三角瓶100ml（4个）、烧杯250ml（4个）、玻璃棒、接种器械、接种盘、用于初代培养的无菌培养基500ml（50瓶）。2、实验试剂MS基本培养基母液（大量元素10倍、微量元素100倍、铁盐100倍，有机物100倍）、IAAlmg/L、6-BAlmg/L、Imol/LNaOH、lmol/LHCl、琼脂、蔗糖；75%乙醇、10%HO、无菌蒸馏水。22四、实验步骤1、培养基成分以MS为基本培养基，附加3%蔗糖，0.6%的琼脂,pH值调至6.5（灭菌前）,根据经验选择6-BA，NAA2种激素，按均匀设计方案添加到培养基中。6-BA浓度(mg・L-1)NAA浓度（mg・L-1）00.51.01.52.00(1)(6)(11)(16)(21)0.1(2)(7)(12)(17)(22)0.5(3)(8)(13)(18)(23)1.0(4)(9)(14)(19)(24)1.5(5)(10)(15)(20)(25)培养基经过121度灭菌20分钟后放置在室温下冷却，然后用于材料接种。每瓶内200ml培养基。2、材料接种方法将消毒后的叶片在超净工作台上切割成0.5cm*0.5cm的方块，平行接种到培养基表面，每瓶接种5个叶片，每浓度两瓶。3、培养条件培养过程中温度保持在24~26°C,每天连续光照12h,光照强度2200~2500lx。4、观察记录培养15天后观察记录愈伤组织诱导情况和生长状态描述。愈伤组织诱导率（%）=产生愈伤组织的外植体数量*100/接种的外植体总数五、可能出现的问题和对策1、外植体灭菌不彻底解决方法：重新准备

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