乙酰胆碱酯酶抑制剂课件

HPLC-UV-ESI-MS-TLC联用筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂答辩人：朱桃玉指导老师：马志玲副教授目录前言实验结果与讨论结语与展望第一部分前言选题意义研究现状实验策略创新之处1.2经典研究方法先导药物

合成

分离提纯

测定生物活性

主要合成产物副产物易提纯体系难提纯体系

经典方法的局限性：

1)只适合易提纯体系；2)只注重主要合成产物的信息

？？1.3实验策略合成混合物二维TLC分离检测混合物条件优化最佳展开剂的确定最小检测量的确定测定抑制活力HPLC定量分离定量条件优化pH的影响离子对试剂的影响三乙胺的影响LC-MS定性借助氢谱结论1.4创新之处合成产物的混合体系不经提纯直接进行筛选，特别适合难提纯体系对合成过程中的副产物进行筛选，从而获得更多有用信息实现了各种色谱方法的联用发展了多维薄层色谱法分离同分异构体，同时在薄层板上检测其生物活性2.1研究体系主要合成路线氢谱图质谱图红外图谱2.2仪器TLCaluminiumsheetsSilicagel60F254(merck公司）可调式移液器（Thermolabsystems,0.5～10μL）1100型高效液相色谱仪（Aligent公司），配有二级管阵列检测器，化学工作站（AgilentChemStationforLC3D）液相－质谱联用仪（ThermoFinigan公司），配有ESI离子源，化学工作站2.3主要试剂乙酰胆碱酯酶抑制剂混合物（合成产物）乙酰胆碱酯酶（Sigma公司）氯化乙酰胆碱（Sigma公司）5，5－二巯基双－2－硝基苯甲酸（Sigma公司）展开剂体系第一维：三氯甲烷：甲醇＝9：1；0.4mL0.1mol/L的三乙胺甲醇溶液；0.3mL0.1mol/L的HCl甲醇溶液；1.0mL10mmol/L的十二烷基硫酸钠甲醇溶液。流动相走过的距离为5.3cm；第二维：三氯甲烷：甲醇＝9：1，流动相走过的距离为8.0cm两维之间的干燥时间：5min2.41二维薄层色谱法分离混合物2.42二维薄层色谱法测定抑制活力取2.5μL样品溶液点板，在二维展开剂体系展开。逐次喷上氯化乙酰胆碱溶液、DTNB溶液，待硅胶板干燥后喷上新鲜的酶液。5分钟后观察现象。分别配制2～0.05mmol/L

的样品溶液，依照上述方法，测定该方法的最小检测量实验结果结论：用薄层色谱法可以鉴别出具有抑制能力的化合物。同时，可以粗略地测出各种化合物的抑制能力的大小。混合物经二维TLC的分离结果最小检测量的测定结果1：2mmol/L2:1mmol/L3:0.5mmol/L4:0.2mmol/L5:0.1mmol/L6:0.05mmol/L离子对试剂的影响

改变十二烷基苯磺酸钠溶液的浓度，按照同一梯度进行测定。观察其浓度对于分离的影响。结论：加入了离子对试剂后，各组分由于分子的空间结构不同，从而在固定相上的保留不同，进而得以分离。我们采用的十二烷基苯磺酸钠的浓度为30mmol/L未加入三乙胺100：2100：4100：6结论：从上图可以看出三乙胺的加入可以改善峰型的拖尾。当1％甲酸－三乙胺＝100：4时，各种化合物已经基本达到分离；当继续增加三乙胺的量，分离又逐渐变差。本实验采用的1％甲酸－三乙胺的比例为100：4。三乙胺的影响色谱条件色谱柱：HypersilODS2C184.6mm×50mm5um检测波长：426nm流速：1ml/min进样量：20μL流动相：甲醇；1％甲酸－三乙胺＝100：4；30mmol/L十二烷基苯磺酸钠采用以下淋洗梯度进行分离测定实验结果混合物经HPLC的分离结果HPLC三维色谱图混合物中各种物质的相对含量①②③④⑤2.33液相－质谱确定分子结构色谱条件：色谱柱：HypersilBDSC182.1mm×50mm3um

毛细管温度：350℃喷射电压：3500V辅气：鞘气进样量：20μL流动相：甲醇、1％甲酸

梯度条件

t/minA%B％059561090127030251000其中，A为甲醇；B为1％甲酸结论①②其中，①、②、③、⑤分别为保留时间9.275、11.775、13.080、20.066所