MS8UPLC仪器操作课件

UPLC仪器操作指南ACQUITYUPLCTM仪器简介二元高压梯度系统(BSM)

4种溶剂可选(实际运行中只用两种)

每台泵均为Alliance专利设计每台泵最大流速2ml/min(通常工作流速:0.2-0.6ml/min)自动进样器(针内针设计)(SM)

常规2×48位样品盘使用2ml进样瓶高采样速率的TUV或PDA及ELSD检测器

采样速率最高可达80点／秒仪器须在软件控制下运行(Empower或Masslynx)开机程序制备新鲜流动相打开计算机及网络集线器电源,进入Windows操作系统打开泵和进样器电源,待通过自检后打开MassLynx软件打开控制台界面(在InletMethod界面AcquityAdditionalStatus右侧)进行仪器的Startup功能(若是与以前相同的流动相且仪器停用时间并不长,只需做refresh功能)设定0.1ml/min流速平衡色谱柱及系统(有液体流出)打开TUV(PDA)检测器电源ACQUITY

UPLCTM开机操作打开计算机电源,进入Windows操作系统打开Hub(网络集线器)电源打开ACQUITYUPLCBSM和SM电源先不要开TUV或PDA电源光学检测器的电源需待流动池内充满液体后再打开待各仪器设备通过自检后(绿灯长亮),打开MassLynx软件打开液相状态/控制/方法编辑画面点击ACQUITYUPLC控制按钮点击此按钮SM样品管理器控制面板实际柱温柱温设定样品管理器实际温度样品管理器温度设定控制台图标TUV检测器控制面板紫外吸光度紫外吸收波长检测器灯的状态打开或关闭紫外灯PDA检测器控制面板检测器灯的状态打开或关闭紫外灯ACQUITY控制台窗口ACQUITY

Console

二元溶剂管理器ACQUITY

Console

样品管理器ACQUITY

Console

色谱柱诊断–eCord™ACQUITY

Console

TUV检测器ACQUITY

Console

PDA检测器ACQUITY

Console

诊断–图型显示ACQUITY

Console

诊断–维修计数器ACQUITY

Console

诊断–维修计数器

PrimeSealwash的步骤将Sealwash出口端从废液盘上摘下,连接到注射器上选择

Control>PrimeSealwash,点击之PrimeSealwash的步骤点击后,可以听到Sealwash阀的开关声.此时:慢慢抽注射器,直到有液体流出,然后将出口管再接回到废液盘上或者取下吸滤头,用吸满清洗液的注射器,从入口端注入清洗液,直至出口管有液体流出点击可停止Prime过程选择A1(或A2)、B1(或B2)，时间设定为3分钟，按start按钮BSM湿灌注的步骤SM样品管理器的准备做过BSM的wetprime之后，要准备样品管理器，准备样品管理器包括如下步骤(新安装仪器时)：灌注(PrimingSyringe)注射器检查确认密封

(Characterizingtheseal)检查确认进样针和定量环体积

(Characterizingtheneedleandsampleloopvolumes)加载(Loading)样品盘SM样品管理器的准备灌注SM注射器和进样针灌注进样针和样品注射器的目的是:准备样品管理器冲洗里面的进样针、外部的刺穿针，和进样口部分排除管路中的气泡注：在灌注过程中，用溶剂充满进样针，在改变溶剂，或者排除管路中的气泡时，需进行灌注进样针和样品注射器提示:确保用于灌注的溶剂有合适的组成,它应该是高纯的,并且几种溶剂是互溶的所有的试剂瓶都要使用滤头,并确保溶剂体积足够用于做灌注,例如,作5次灌注,每种溶剂要用去大约20mL要求:在检定密封之前必须先完成对样品管理器的灌注

灌注SM注射器和进样针操作从左边的目录中，选择SampleManager,单击

Control>Primesyringes

出现PrimeSyringes对话框选择“Samplesyringeandwashsyringes”

在Numberofcycles中输入要作灌注的次数

(默认值为

1)(建议:如果更换溶剂，建议做5－7次灌注)单击

OK.当系统状态是“Idle(待机),”

就表示灌注做完了提示:每做一次灌注大约需要2－4分钟灌注SM注射器操作冲洗进样针步骤在控制台的SampleManager窗口,单击Control>WashNeedle

出现WashNeedle对话框输入需要的强洗针液的体积.默认为:

0.0μL

提示:同时使用强洗针液和弱洗针液会增加时间和溶剂的消耗,因为系统在下一次进样之前必须将强洗针液完全除去在弱洗针框中输入弱洗针液的体积,

默认值:200.0μL

建议值:200到500μL

单击OK.开始洗针过程当洗针过程完成时,回到“Idle”状态洗针未完成时中断,可以点击Control中的ResetSM冲洗进样针(WashNeedle)冲洗进样针是一项可选程序，它是让强洗针液和/或弱洗针液通过进样针和进样口部分清洗进样针可以去掉进样针、刺穿针和进样口的外部和内部的残留可以通过进行冲洗针的操作来探知通过废液管的流路是否通畅,以及确证洗针系统是否被灌注并运行正常

要求:不要使用缓冲盐作为洗针液.

提示:灌注系统已包含冲洗进样针,所以只要做了灌注系统,就可以省略此步操作

冲洗进样针(WashNeedle)特别提示:

不能让强洗针液接触样品弱洗针液要与流动相一致,或与初始梯度相同如果稀释样品，弱洗针液应与稀释样品的溶剂相同用于洗针的有机溶剂种类应与色谱使用的有机溶剂一致

经验规则:

在洗针过程中应确保强洗针液完全被弱洗针液所取代洗针程序会先用强洗针液洗针,再用一定体积弱洗针液去洗针(其默认体积是200μL),可以增加弱洗针液的体积,但不能减少.一般需要3倍于强洗针液体积选择清洗进样针的溶剂弱洗针液和强洗针液的选择取决于样品和所使用的流动相,

确保流动相和缓冲液是互溶的要想得到好的柱效，弱洗针液必须等同于初始梯度的流动相等度时和流动相比例相同不推荐缓冲盐作为弱洗针液

推荐的弱洗针液和强洗针液如下表:色谱条件弱洗针溶剂强洗针溶剂反相/缓冲盐溶液100%H2O或

0到

25%甲醇或乙腈50%到100%甲醇或乙腈柱温箱(加热器)柱加热器(ColumnHeater,C/H)置于S/M的顶部同时也是SampleManager的顶盖当使用MassSpec时,柱加热器可以从原来的位置外转180度这种设计是为了使S/M和C/H以及C/H和检测器(或质谱)之间的连接管路更短,以尽量地减小扩散体积色谱柱前预热稳定器预热稳定器会减小对环境温度波动的敏感度,并减小/最小化谱带展宽新的衬垫(和浅盘)使之较易于安装/移动预热稳定器P/N–205000291柱预热稳定器组件包色谱柱前在线过滤器用于ACQUITYUPLC™色谱柱的In-LineFilter(在线过滤器)部件号P/N–205000343色谱柱出口管整体式配件,手指拧紧即可截取0.0025〃长的一段PEEK管尽可能短的管路以尽量减小扩散它在启动包(startupkit)中,不是普通部件启动TUV(PDA)检测器确保检测池中充满溶剂并且没有气泡.如果检测池中有气泡,检测器就不能很好的初始化,并有可能损坏检测池打开检测器电源.检测器会发出嘀嘀嘀三声响，并进行一系列自检.电源和氘灯的指示灯都会不停地闪烁。初始化大概需要2分钟。灯预热大概需要3分钟当指示灯常绿不闪烁时,通过监测控制台来测量和观察信号。要得到好的数据，需要30分钟的时间平衡检测器和稳定基线预设维护提示快速选择系统维护限制,可以从System中选择MaintenanceCounter.预设维护提示设置样