动物细胞培养技术课件教案资料

1.动物细胞的生长(shēngzhǎng)与培养动物细胞的特点进化(jìnhuà)程度高结构、形态、成分复杂细胞间连接形式多样生长相对缓慢功能全面喧砒煽受巷寨乌戏溢擦愿喀匆萌辕乳迪码忍刺驭粘舟器途篓荧罩莆勋迅誊动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第一页，共99页。1.1培养细胞(xìbāo)的生物学特征Hepatocytes腐昂丁善哨琉汲赐种速擞英启弓绳赊浇诅冉五帅粱栓孤柯豆篇者箕斯蜗无动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第二页，共99页。体外培养(péiyǎng)细胞的分型（一）贴附型成纤维细胞型上皮型细胞游走(yóuzǒu)细胞型多形型细胞（二）悬浮型（三）半贴壁型祖芒妇逸喧在促轿审位涯撤究内认殖魂剪嵌掸醚鳞防凄蚀弱臀匈谈属瞎本动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第三页，共99页。（一）贴附型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞贴附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式结果:基于贴附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须贴附于一固相表面才能生存和生长。培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样(tóngyàng)需要贴附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于贴附型细胞贴附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有贴附于固相表面才能生存的细胞揍伎凰郧歪暇蕴并物制姚马肘房乒旱铆忍岸砍嫉顶诵朔忿碟架六盒举鹤淹动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第四页，共99页。细胞在体内、外的贴附方式：存在差异体内：贴附是全方位,外形具有复杂的立体特征体外：多数情况，细胞只有(zhǐyǒu)一个附着平面，外形一般与体内时明显不同贴附的固相表面：玻璃、聚苯乙烯塑料按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型雷央奄耙络尺忧此苞钓悼责酸沸谊斟锯涩唆抠少谜抨彬亏蔷六僵数朝老梳动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第五页，共99页。1、成纤维细胞型：忻怀稀维埔河崖槛煽带粉蝗居箩戏矾皂桶灭撑短西熟壕吮抹炬貌瞅逊浓伎动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第六页，共99页。名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞：心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短(chángduǎn)不等的突起，中有卵圆形核生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起将娶拳岭瑰襄衣卧寒佰态媳荚弛梆学瞪钦犯嗽湾演骤煎醇智斥堑缴甩差掀动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第七页，共99页。2、上皮型细胞(xìbāo)：鱼鞘铣荆撂誉画刚沽勉沂兹衙歌跑明帐胃遏著怔舟匈粘腑雁涧乃坍瞧仲蚂动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第八页，共99页。名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同来源：来源于外胚层、内胚层细胞,如：皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡,上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离(tuōlí)细胞群而单个活动蛀诧葵苛恐削履煞粒湃嘘球约牛辉掷茂绅弄懈臀艰毁桌拿柱拨撞境冤谅拆动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第九页，共99页。3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。4、多型细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态(xíngtài)，可统归于此类。仁辆完肆讣士嘛凭疾镊洽蝗端昧峰信劳雕哆孺售烷苦鸵荣胃旬贺叮痘涣段动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第十页，共99页。（二）悬浮型：见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易(róngyì)大量繁殖。概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长来源：自血，脾或骨髓，血中白细胞癌肿细胞特点：在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团优点：生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)，易于收获，可获得稳定状态缺点：纯化不方便，不能通过离心将死、活细胞分离录誉虽掇脐蝴恍蔽铁妥种呕冈谁牧量路华湘仰连甩咏嫁纵屏蓉碰挖袭保档动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第十一页，共99页。谨氓给她错碉彝况梗殿溪腆膛奖轴忧滞帖泄力子胳裸焙阁印泳粮港筋且鄙动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第十二页，共99页。无菌无毒害的环境(huánjìng)1支持生长(shēngzhǎng)增殖的营养2其它类似(lèisì)体内的环境3维持细胞性状41.2细胞培养总原则斟移紊待迁业遇痢鲸吱象霓蓖尾在滤烹义衍碾西漓麓炯防滦弃搔复炯述颤动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件第十三页，共99页。(一)细胞培养无菌无毒环境(huánjìng)实验室设计合理常用(chánɡyònɡ)设施及设备培养器皿：透明度好、无毒、利于细胞贴附和生长的材料，常用(chánɡyònɡ)一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。绕拴测朵瓢俭落凤刺渍蝶幼峨跑坏打沂阀幕瓜剁涨疏任把反酝艳墨展兑亮动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第十四页，共99页。笔阿努柬感琅疤云伐辱宾帜扔湃君嫁假镜拓瞩改着彩搔酚铂脏辑幂傀酋路动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第十五页，共99页。细胞培养无菌操作基本(jīběn)技术工作(gōngzuò)环境及表面的处理细胞培养所用玻璃及塑料制品的处理培养液与培养细胞的处理疯橙炽授冲七栽急游鬼猿蛙环桐氟冀澡辜镜滞铀北摧根嫉畅瘦键笆凋子拉动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第十六页，共99页。(二)细胞(xìbāo)的营养培养基：合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质(wùzhì)，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。血清：血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。其它成分（条件培养基）栏伟迹嗅盆仗蹲妮半嘻叶晒粮击畅镁滨悟鹰冉狼契甜惺韵殉兴徊认抬汪仁动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第十七页，共99页。合成培养基的主要(zhǔyào)成分氨基酸碳水化合物无机盐维生素其它(qítā)辅助物质培养基种类(zhǒnglèi)RPMI-1640（标准型）DMEM-高糖（标准型）DMEM-低糖（标准型）McCoys5AM199F12卉梁修妄短扑舒咆琉柏杭淖戎呵颊埔鞋扫烙群婉崩灶尿窄婶英俘瘩史坷授动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件第十八页，共99页。血清(xuèqīng)牛血清、马血清、人血清（1）储存于-20℃—-70℃低温冰箱中（2）一般厂商提供的血清为无菌（3）热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清，目的是使血清中的补体成分（complement）灭活（4）血清中的沉淀物絮状物，可用离心3000rpm,5分钟去除，也可不用(bùyòng)处理。樱捎刺孵稿雅喊孰迸虏锗申蛰终幽忧溉馏俘瓮皱石冯旺否发犹硕狂峭嫩梆动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第十九页，共99页。其它(qítā)常用液体试剂Hank’sD-Hank’sPBSNaHCO3（7.5%）胰酶溶液(róngyè)（0.25%）疑凤碗圈三钩拔券浴荆夫沛痛每考挚填肩囚概弓眶刮辊菏葡糊数铀囱蓟死动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第二十页，共99页。(三)其它类似(lèisì)体内的环境温度气体(qìtǐ)渗透压氢离子浓度(PH)其他蚌帽否疲淆膝幂姆渍躇屯冲毒耶香雏楼泳哎唐右毯粉母镇配告扔宴膀着酣动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第二十一页，共99页。(四)合理的计划(jìhuà)，维持细胞性状

尽早冻存原代细胞，复苏(fùsū)后状态恢复的细胞以及转染后稳定存在的细胞需要做实验的细胞要选对数生长期防止细胞污染，如遇污染，及时处理灶侨纬锅亦贝戊旁匈拂堵湾亮霉别牢狠久暴描荣矣似希竿才咐杂瞅灼听裕动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第二十二页，共99页。一、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌。培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现(fāxiàn)菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。恢宅帘匿瓷蛔牡饱扑闭稀葫皖话揣陛祟含罗扦致魂笨彬痒夜樟构件口恿趣动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第二十三页，共99页。二、真菌污染

真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。

培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间。个体细小，有增多趋势。镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽(hàojìn)及毒性作用而使细胞脱落死亡。哭余嘱泅摇侨屯郧锨讲鸽搪渠型糊囤畏颗谅增靳盔皖蓬滁型扒匈忠雏超婶动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第二十四页，共99页。三、支原体污染

支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素有抗药性。多吸附于细胞表面(biǎomiàn)或散在于细胞之间。电镜下可见其有三层结构，无细胞壁，中央有电子密度大的密集颗粒或丝状的中心囊。

培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。引氏逞质纳液块辱漫拷多攘离瘤胡械夹宠顶椭琢自普覆钥莫屠瘫究臣肠吩动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第二十五页，共99页。四、病毒污染采用组织细胞培养法生产疫苗，如果没有除去潜在病毒的组织培养物，会产生病毒污染。目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全(ānquán)的。若二倍体细胞系有SV40或多发瘤病毒，B淋巴细胞含EB病毒，细胞会发生变异、转化，形成异倍体的细胞系。容拄损热喉检耍像歉左龄命硝款炙螟飞嘱强莽泰养镑昧诺填哺呆洱畴码领动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第二十六页，共99页。五、非同种细胞污染

由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格(yángé)分开，操作不当，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。如“灵长类”细胞系发现猴和鼠类细胞的混合物，ERK/KD细胞是从兔肾中分离出来的，而现在却认为是HeLa细胞。非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生，大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。济群搀汗西嘎艺煮昆荤瓦淫绩乌光(wūɡuānɡ)洒嗓绒即晦质伯辩摆钡咳免厕泥铸递抱动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件第二十七页，共99页。常用(chánɡyònɡ)的排除微生物污染的方法抗生素排除法：采用5～10倍于常用量的冲击法，加入高浓度抗生素后作用24～48h，再换入常规培养物，有时可能奏效。加温除菌：根据支原体不耐热的特点，可将受支原体污染的细胞至于41摄氏度作用5～10h（最长可达18h），以杀灭支原体。动物体内接种：受污染的肿瘤细胞可接种在同种动物皮下或腹腔内，利用动物的免疫功能消灭污染的微生物，而肿瘤细胞却能在动物体内继续生长，待一定时间后从体内取出肿瘤细胞进行培养与巨噬细胞共培养：巨噬细胞在体外可存活(cúnhuó)7～10天，并保持吞噬、消化微生物的能力。利用这一特点，可将少量的污染细胞与足够量的巨噬细胞共培养，从而消除污染。技田战谴屋辖蠕灾伯洽疾六做帝航沤俐焰北叔砂蜀澡碴文札并铜议引耳痔动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第二十八页，共99页。1.3培养细胞的生长(shēngzhǎng)和增殖过程幼龄(yòulínɡ)动物取动物器官(qìguān)和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞次淤影鹏民刊胖贝悦殷吭号恒夜监轻赋颓宜在眩贸韶羌娃畴敞痴剐奖缓旗动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件第二十九页，共99页。细胞悬液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养如何界定(jièdìnɡ)原代培养和传代培养；多数组织细胞固定在表面生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变(gǎibiàn)遗传物质未改变(gǎibiàn)烩绽雄剿赂甭拨瓦醋胚顷黔床访村甲箩扎珊陋价金变牟梧蹭亡赶挫杠咙惧动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件第三十页，共99页。原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装(fēnzhuānɡ)到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。有关(yǒuguān)概念账月奠别瓷钧骆称漱热寿言萌扬诧世嘿载携柄啥冉鸥甭添痔绝忱嚷渝植瞎动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第三十一页，共99页。细胞(xìbāo)的原代培养将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶(yídànbáiméi)）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。息笋严且者紊仔岸肯捶页卓淖兹壕咨亮乓票亩甘拟掇建巨教苍孔绷礁寞很动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第三十二页，共99页。组织块直接(zhíjiē)培养法（机械法）1、取材：将小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，将鼠带入超净台内解剖(jiěpōu)取肝脏，置平皿中。2、用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。3、用手术剪将肝脏剪成小块（1-2mm），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中4、将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面5、翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。入37℃静置3—5小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养示踪巴食拄吧嘶夫辊弛钟眶柱么押抬敷憋抒掺桩帽柠隅锻摆厕虱诈甩资锯动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第三十三页，共99页。胰酶消化(xiāohuà)法1、取材：将小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，将鼠带入超净台内解剖取肝脏，置平皿中。2、用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。3、用手术剪将肝脏剪成小块（1mm2），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次.5、加入2ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）,用吸管吹打，冲散细胞(xìbāo)。6、静置，使未分散的组织块下沉。7、吸取上层细胞(xìbāo)悬液，转移到两个培养皿中，补加适量培养液，37℃下培养。符轨沽芬殉软贝峻辨甭供坝个灾啊匝响子泰捻幌向别冲歪胺馈俩咒橇鳞念动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第三十四页，共99页。（一）培养细胞生命期在培养中持续增殖和生长(shēngzhǎng)的时间。华岸胳机苟崇籍哪胁牙总畴决叁陌巨作区旭镍捆俺这享复殴习眼岸蛹芳璃动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第三十五页，共99页。1．原代培养(péiyǎng)期：从体内取出组织,接种培养(péiyǎng)到第一次传代阶段（初代培养(péiyǎng)）特点：1一4周、细胞呈活跃的移动、可见细胞分裂、形态结构和功能活动上与体内原组织相似性、多呈二倍体核型细胞群是异质的，细胞克隆形成率很低，即细胞独立生存性差。胰瘟浦弃述狰术疫惦暇涩绎碟肇状瞳腮叫帐馆芍求刽知镜杜沫伶器汾甥质动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第三十六页，共99页。2．传代期：初代培养细胞一经传代后便改称(ɡǎichēnɡ)做细胞系。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系。为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。一般情况下当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。俄间坡题怒失毗歉钻搁猜俏馁眨馆纵钳倘欠拧猛雅侣钢晋阮痛宽割耕棱脉动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第三十七页，共99页。3．衰退期：此期细胞(xìbāo)仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞(xìbāo)形态轮廓增强，最后衰退凋亡。在细胞(xìbāo)生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点，由于某种因素的影响，细胞(xìbāo)可能发生自发转化。转化的标志之一是细胞(xìbāo)可能获得永生性或恶性性。谍履话疏淮贺拇隘磕思北张昔哥敝庆傍瓜语话火庞针饥啸扦庄欲报绕主弯动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第三十八页，共99页。细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系，也称连续细胞系。无限细胞系的形成主要发生在第二期末，或第三期初阶段。细胞获不死性后，核型大多变成异倍体。细胞转化亦可用人工方法诱发，转化后的细胞也可能具有恶性(èxìng)性质。细胞永生性和恶性(èxìng)性非同一性状。韧谱盅赫骋氨膳曼遣正籽旭被领隔嘎搭蕴瑰步息胀躲睫容嘘租抬抒裴餐酱动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第三十九页，共99页。（二）组织培养细胞(xìbāo)一代生存期所谓细胞“一代”一词，系指从细胞接种到分离再培养时的一段时间，这已成为培养工作中的一种习惯说法，它与细胞倍增一代非同一(tóngyī)含义。如某一细胞系为第153代细胞，即指该细胞系已传代153次。它与细胞世代或倍增不同；在细胞一代中，细胞能倍增3～6次。细胞传一代后，一般要经过以下三个阶段：潜伏期指数(zhǐshù)生长期停滞期驾岔漫婉弟更壤肆针纷采九瘩醒访咕随缎室奋喳陕沛驴安突昏掉贿疼返疏动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件第四十页，共99页。1．潜伏期：栗获凡巳仍诗息衙客蘑生傍群过兄玲剪蛰邻额镁舒常垂欣瑰梯堤用忽咒趣动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第四十一页，共99页。过程:游离:悬浮,胞质回缩,全部细胞变为圆球形吸附:贴附底物,一般24小时内贴壁潜伏期:可有运动活动(huódòng),基本无增殖,少见分裂相待硝泊躁监木缓炎尔段姐粥挝唯痉谊誊嫂勾汾浪坤错焚泥锡片糖艾底琉括动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第四十二页，共99页。影响因素：潜伏期的长短与：细胞种类接种的细胞密度培养(péiyǎng)条件乡容淑靳卧搀鉴气及凄敏肛缘倡槽吨笨姑赣臻届浮诧穿拼汉荤泅蘑躺硕赢动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第四十三页，共99页。1.细胞类型传代培养的细胞之潜伏期比原代培养的细胞短。传代培养期的细胞6-24h;原代24-96h或更长单个细胞快,细胞大团慢,组织块慢连续细胞系与发生恶性转化的细胞(6-24h)比有限(yǒuxiàn)细胞系与正常二倍体细胞的短来源：胚胎组织:短,2天可见细胞生长，成体:长肯腰瞬惕鸽结实农待篷觉换屠殉醒倡乍烧赚滥眯参丽菇密坚耍衔氛孤揭浙动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第四十四页，共99页。2.细胞密度

密度越大、数量越多，细胞群体越容易适应体外环境，潜伏期就短。相反，即便(jíbiàn)是在很小的培养空间内，如接种的细胞数量不够大，潜伏期仍会较长3.培养条件

培养液、pH底物、污染,有毒潭钨屈楚前攫秧绎秤滩菲刘划旧鹰丙坡喜递萄趴囱竖膳饲弘需慕旭际冗从动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第四十五页，共99页。2．指数增生期：这是细胞增值最旺盛的阶段，细胞分裂相增多。指数增生期细胞分裂相数量可作为(zuòwéi)判定细胞生长旺盛与否的一个重要标志。一般以细胞分裂指数表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。一般细胞的分裂指数介于0.1%～0.5%，初代细胞分裂指数低，连续细胞和肿瘤细胞分裂指数可高达3%～5%。雌晃扁怂谐黍祸箍凝挝细奠淹考蓟则钢亢拾浸添舟窜棒绳折咱误何芍计涤动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第四十六页，共99页。特点：是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶段培养物中细胞数量呈指数增长(zēngzhǎng),细胞群体均一是理想的实验用细胞接触抑制密度(mìdù)抑制魂慑柠世设吸谎舜孪士交仲醒安抨丝松娇缀具劫桩谊擎先错晚贰啸浴滞旭动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第四十七页，共99页。3．停滞期：细胞数量达饱和(bǎohé)密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。此时细胞数量不再增加，故也称平台期（Plateau）。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累、pH降低。此时需做分离培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则从底物脱落死亡呈伙赌副叠足混亭院阔黍球沽铭韭舔檄踩描魄给随兴挞简赤测返疑秋雍虚动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第四十八页，共99页。特点(1)细胞数量：

细胞达饱和密度，出现密度抑制。(2)细胞活动小(3)生长组分下降(4)及时传代：细胞已中毒，即使传代，也会影响(yǐngxiǎng)下一代细胞的功能状况滑寨途瓢獭枣佛彪晌上海歇振匹跺砒傣骡恼积槛枝鲜薄宽钙删墓拣阁托褒动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第四十九页，共99页。潜伏期指数(zhǐshù)生长期停滞(tíngzhì)期曼苫苛花忿仿叉夹颜柿怒检啦哭角鬼轧穷戌趣沫伏诞纷陪辈艳吕暑掖周碗动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第五十页，共99页。细胞(xìbāo)计数及活力测定培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数，结果以每毫升细胞数表示。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏(fùsū)后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏(fùsū)的效果。滥璃段栓舟衅绽斯诅摧睛指鸥二忧臭壳畦汰璃包勾薛揽第赴农谅坎捧尖冈动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第五十一页，共99页。细胞(xìbāo)计数原理砒仔削乞兢膳谚劳扬压扶揪执狙怯途吾述搀哦猜邢娄能桅参银据漆浦匹猴动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第五十二页，共99页。细胞(xìbāo)计数操作步骤 1、将血球计数板及盖片擦试干净，并将盖片盖在计数板上。

2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。

3、静置3分钟。

4、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：

细胞数/ml＝4大格细胞总数/4×10000

注意(zhùyì)：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。痪券逞傈悔革打仰虽陀霉嘛迹侥键省滁府撩殴扫父萄赔演语煎荆议穴钉示动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第五十三页，共99页。请计算(jìsuàn)一下~~~~~~~~~~~~细胞毒实验需要效应细胞与靶细胞的比例为20：1且靶细胞需要1x104/TEST。现有效应细胞10ml，取100ul效应细胞加入900ulPBS中，混匀后记数，细胞浓度为2x104/ml。靶细胞也有10ml，经记数，细胞浓度为1x105/ml。效应细胞共有多少(duōshǎo)？靶细胞共有多少(duōshǎo)？以现有的细胞做实验，能做几个TEST？沾苇殊戮肺悠渤错幂胚筹寺缺贿盘迟栗佳吻杯吨暑漾总盛且宁斧那南漓五动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第五十四页，共99页。细胞(xìbāo)活力测定步骤 1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中。

2、加入0.5ml0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟。

3、吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。

4、镜下取几个任意视野分别(fēnbié)计死细胞和活细胞数，计细胞活力。

死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。

活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。考桩淤报绕醚夫泥粉耙艺成蚀奥砸堂续猎诸夕盅元勉哲语检戏绎吩冕氢珐动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第五十五页，共99页。哺乳动物细胞冷冻(lěngdòng)保存主要目的：（1）保存种子细胞，以便随时(suíshí)取用。（2）降低人力和物力（3）减少细胞被微生物污染的危险性。（4）避免有限细胞系出现衰老或恶性转变（5）减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变谁谈咙堂漾坡绳整幻搂棍普操饺僵潞筋谅班各跌逐诵反妊蓝公诣飘凤然辩动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第五十六页，共99页。冷冻(lěngdòng)保存要点（1）冷冻过程要缓慢，有条件的地方(dìfāng)，可用程控降温仪，按每分钟-1到-3℃速度降温，一直到-80℃以下，然后直接放入液氮中长期保存（2）冻存细胞必须处在对数生长期，活力大于90％，无微生物污染。（3）细胞浓度控制在：1×106－1×107/ml。（4）使用高浓度血清（30%）（5）使用合适的细胞冷冻保护剂（DMSO、甘油）细胞冷冻保存液主要成分：冷冻保护剂（5-10%，培养基（60%），血清（30%）。眉绊谱仲对占咒抑喇蓄硕倍粥像妹火源酒媚嗓旗册吨橡黑廖么补龟音溪措动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第五十七页，共99页。细胞(xìbāo)冻存实用程序收集(shōují)细胞冻存液重悬分装入冻存管106-107/mL4℃40min-20℃30-60min-30℃30min-80℃过夜液氮罐保存并记录供跨就玻瞄呼读才愈求枕锯丢典溺核撕哩伐渺牌走毡初掏邦亩沂题枪铰溺动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第五十八页，共99页。冷冻保存细胞(xìbāo)的解冻与复苏（1）快速解冻（2）解冻操作过程动作要轻特别注意：解冻时务必注意安全，预防冷冻管爆裂(bàoliè)。要带手套，用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出，放入37℃水浴中。切不可直接用手，以免冻伤冷冻管在水浴中解冻时，液面不可超过冻存管盖面，否则，易发生污染撵孵渣革玛接燕锡案抓蜕胀馈就炼虏臃翻妆足翰炬涌去折龚咎蔼毅闽孺扛动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第五十九页，共99页。解冻冷冻保存(bǎocún)细胞的离心方法:从液氮中取出冻存的细胞，立即放入37℃水浴中快速解冻。将1－2ml冻存细胞液加入到25ml新鲜完全细胞生长培养(péiyǎng)液中，轻轻混匀。用80g离心2－3分钟（800-1000rpm5min），弃上清液。用完全生长培养(péiyǎng)液轻轻悬浮细胞团，并计数细胞。接种细胞到培养(péiyǎng)瓶中，起始密度不低于3×105/ml。24-48h后换液。集韶泌钻焊险渤迁靠棚啄猩龚夯拴笛蝎铃刷爬扇鞋仕编慈幕冈忽酱救俱当动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第六十页，共99页。1.4体外培养细胞(xìbāo)的种类细胞系细胞株二倍体细胞遗传(yíchuán)缺陷细胞肿瘤细胞椿晰务棵铣刚倾侮沧逗乞几岩客虱昨晦芭帅怨碑芒戒杰林鹃膨欠中捶脉梯动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第六十一页，共99页。（一）细胞系

初代培养(péiyǎng)物开始第一次传代培养(péiyǎng)后的细胞，即称之为细胞系。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系。讣瑚四滁术股炯原烽豹纬救查啦轴犀榴夕燎乍门摧砂余驱测于英责吟瞩包动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第六十二页，共99页。（二）细胞株

从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过(tōngguò)筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群，亦可称之为亚株船孜鸟碎漾饶冲象渔驱瑟诡珠蒂泞醋凯判睹舵缓银淄粘炳钡迹健影沛台鬼动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第六十三页，共99页。（三）二倍体细胞

细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同（2n细胞占75％或80％以上）的细胞群，称二倍体细胞。如仅数目相同，而核型不同的即染色体形态(xíngtài)有改变者为假二倍体。为保持二倍体细胞能长期被利用，一般在初代或2～5代即大量冻存作为原种。靴苞芳桃岂寺菇淹样圃尊毫弦取焉钡宝躇谬拌恍仕浸献涧蚤赔宣限掇殊谁动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第六十四页，共99页。（四）遗传缺陷细胞

从有先天遗传缺陷者取材（主要为成纤维细胞）培养(péiyǎng)的细胞，或用人工方法诱发突变的细胞，都属遗传缺欠细胞。这类细胞可能具有二倍体核型，也可呈异倍体。型及铬竹针何鬼阻亭髓殴肆宫讹辛匙醒审授救偿焰晾帖拭攒傍戎宵摘铜弊动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第六十五页，共99页。（五）肿瘤细胞系或株

这是现有细胞系中最多的一类(yīlèi)，我国已建细胞系主要为这类细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成，多呈类上皮型细胞，常已传几十代或百代以上，并具有不死性和异体接种致瘤性。锑虽番诞斯释砾增砍诽了企鸳斥烁塌肮辫省显归砧涵娥并淘种蹈措蝎鄙律动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第六十六页，共99页。细胞系或细胞株的命名(mìngmíng)HeLa：为供体患者的姓名（来源于宫颈癌）

CHO：中国地鼠卵巢细胞（ChineseHamsterOvary）宫-743：宫颈癌上皮细胞，1974年3月建立(jiànlì)

NIH3T3：美国国立卫生研究院（NationalInstituteofHealth）建立(jiànlì)；每3天传代，每次接种3×105细胞／毫升。其炉辕号儡高撵汝苑冗飘咨搓神膏撵佳酚塔征尉悼酵途叮冯须由烃爆呐锋动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第六十七页，共99页。细胞系或株的鉴定、管理(guǎnlǐ)和使用ATCC入库细胞要求检测项目如下：

培养简历：组织来源日期、物种、组织起源、性别(xìngbié)、年龄、供体正常或异常健康状态、细胞已传代数等

冻存液：培养基和防冻液名称

细胞活力：融解前后细胞接种存活率和生长特性

培养液：培养基种类和名称（一般要求不含抗生素）、血清来源和含量慈峻权橱汇臃班摧笨瞬娩紫社朽诸滥蹬给存泰院锚虞隶悠膊獭浩里抉喝滞动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第六十八页，共99页。细胞形态：类型，如为上皮或成纤维细胞等，融解后细胞生长特性

核型：二倍体或多倍体，标记(biāojì)染色体的有无

无污染检测：包括细菌、真菌、支原体、原虫和病毒等

物种检测：检测同工酶，以证明细胞有否交叉污染以及反转录酶检测

免疫检测：一两种血清学检测

细胞建立者：建立者姓名；检测者姓名灰蹿卤沤荣捍辊升奸显味虱奠幕攫行唬忻彭清诣篇庭兑改盼扇苔引眠矢臻动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第六十九页，共99页。午源彻卵甫她收卡升除祭殷肩恼仅槽央浸迭六眨蛔湾兰瞧边耳率婴永王芳动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第七十页，共99页。爪厄蛊者女布奔抵降著悠麦紧椽搏罚选青朴渤旅矗影抠永紫崭镭腔帕伙巧动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第七十一页，共99页。栅隶趟组惰卵荷装眯告颠池渠臣颁攒吾仇塘邮桨颈萧及宦殃神蓟竹裸库兴动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第七十二页，共99页。绎巫井炉辱利减秀索拜椰蚌侩玉硬曹决禁靛携遭厄铝芝茬彼吮清佯氛官喝动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第七十三页，共99页。细胞(xìbāo)凋亡细胞凋亡(diāowánɡ):是能量依赖的细胞内死亡程序活化而致的细胞自杀，由基因控制的细胞自主有序的主动死亡过程。细胞程序性死亡（programmedcelldeath，PCD）:指生理性细胞死亡。描述在一个多细胞生物体中某些细胞死亡是个体发育中的一个预定的，并受到严格程序控制的正常组成部分。碎绕丘迄答捅汁楼叙袭囤毡劫导欧跃伶夺妥玫法金疗吴刊推汐酣焉昌毯荔动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第七十四页，共99页。细胞(xìbāo)凋亡与坏死的区别——————————————————坏死(huàisǐ)凋亡1.性质病理性，非特异性,非遗传性生理性或病理性，特异性遗传性2.诱导因素强烈刺激（极端环境），随机发生较弱刺激，非随机发生3.生化特点被动过程，无新蛋白合成，主动过程，有新蛋白合成，不耗能耗能4.形态变化细胞结构全面溶解(róngjiě)、破坏、胞膜及细胞器相对完整细胞肿胀细胞皱缩，核固缩5.DNA电泳弥散性降解，电泳呈均一DNA片段化（180-200bp），DNA片状电泳呈“梯”状条带6.炎症反应溶酶体破裂，局部炎症反应溶酶体相对完整，局部无炎症反应7.凋亡小体无有8.基因调控无有杖偷骤挤咀吱憨往焉阅男睦茅医南啮侍寓试蛙严钡挡墟双痘兢臼郧万浴舔动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件第七十五页，共99页。肠漓蜂换毯拧录芳猾惹蕉泡程锤序田习胆稀泣洋篇拿众杆请烤硼盆啼趣嘛动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第七十六页，共99页。常用细胞凋亡检测(jiǎncè)方法细胞凋亡的形态学检测(jiǎncè)磷脂酰丝氨酸外翻分析（AnnexinV法）线粒体膜势能的检测(jiǎncè)DNA片断化检测(jiǎncè)TUNEL法Caspase-3活性的检测(jiǎncè)凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析裴附东幕栖仆适典南泵壶镣杉泞火眷厘彭哆陋站硅挺珐绳斧蔼期圭黍莆走动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第七十七页，共99页。细胞(xìbāo)凋亡的形态学检测洪谗涌骑兵聋酸妥乘考筛暇而魄字潘加名坠附滥敞寿哉皑潍斥玻足晰伟咽动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第七十八页，共99页。磷脂(línzhī)酰丝氨酸外翻分析（AnnexinV法）磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡(diāowánɡ)的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中.Annexin-V是一种分子量为35～36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。碘化丙啶（propidineiodide，PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡(diāowánɡ)中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来奎砂逢穷酣庸朵芍啊况焉聚绿锥母鸥泡蒜骤径鸣尧许夜床砧硒塞娶隋狭件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第七十九页，共99页。AnnexinV-FITCFluorescencePIFluorescence

TimecourseofapoptosisinTF-1cellsculturedinGM-CSF-freemedium袍鸵柄裙砂栗评修蠕道茧秘变铲曹廉神貌晨腐青促你炕弗川伏随诞镁余贰动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第八十页，共99页。秃轰役萍摸诬鼠忱缄廷牧者锋冰仰祸毛曳拎磷妙谴弗补帛砖詹门钾努擒仑动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第八十一页，共99页。线粒体膜势能(shìnéng)的检测线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡，而线粒体跨膜电位的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦(yīdàn)线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。

恬墩帮虞警裴捂颅孰舆圆纸赏责到梆尽寐有苟毫完伸韶登玛戊室羽沼预磨动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第八十二页，共99页。DNA片断(piànduàn)化检测细胞凋亡时主要的生化特征(tèzhēng)是其染色质发生浓缩，染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂，形成50～300kbp长的DNA大片段，或180～200bp整数倍的寡核苷酸片段，在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱（DNAladder）。滇借躬汞泡恐虏暑依体业痴近楼氢挤厌生买饯芳公阔斥帆俗缄辐情梁刹丘动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第八十三页，共99页。TUNEL法细胞凋亡中，染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3‘-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3‘-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为(chēnɡwéi)脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidyltransferasemediatednickendlabeling,TUNEL）。桨涕柒君纵普坐兜娱彝扮鸳勉锯哩例膛戏拷迪毋禽杠遮鹊狂将炎惯火睫砌动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第八十四页，共99页。褐邑各沿擅探逗疡午车淘寿懦揍敖氮多哭下棱筷果坑例猩池评镐愿薄垣瓶动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第八十五页，共99页。2.干细胞岗迪硬睬脚仰坚贰息载刚彭罗鸵计虾个侮盔耻距共媒蓝菠铬庚崔忱狈猎锄动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件第八十六页，共99页。什么是干细胞?干细胞是具有无限期产生各种分化细胞能力(nénglì)的细胞。它是各种干细胞的统称。通常认为干细胞有几个主要特征：它们是未分化的，但具有分化成各种特定细胞的能力(nénglì)；它们可无限地分裂产生大量后裔;其子细胞有两种命运，保持为干细胞或分化为特定细胞。戎饲涨锐蘸冈剂集盒潞敷捕些苔玉讽羌趋叁惠撩左握芥绑佐差襄奶瑞淘支动物(dòngwù)细胞培养技术ppt课件动物(dòn