标准解读

《NY/T 680-2003 禽白血病病毒P27抗原酶联免疫吸附试验方法》是一项农业行业标准，旨在提供一种检测禽类样本中禽白血病病毒（ALV）P27抗原的方法。该标准详细描述了使用酶联免疫吸附试验（ELISA）技术来定性或定量分析禽类组织、血液等样本中的P27抗原水平。P27是一种由禽白血病病毒编码的蛋白质，在病毒感染过程中扮演重要角色，因此其存在与否可以作为判断是否感染禽白血病的一个重要指标。

根据此标准，整个实验流程包括但不限于以下几个关键步骤：

  • 样本准备：需要从待测动物身上采集合适的生物材料，如血清或其他体液。
  • 包被板制备：将特异性识别P27抗原的抗体固定于固相载体上。
  • 加样与反应：向包被有抗体的微孔板中加入待检样品，并让其充分作用一段时间，以便目标抗原能够与固相上的抗体结合。
  • 洗涤去除未结合物质后，再加入另一种标记有酶的抗体，这种抗体同样能特异性地与P27抗原结合。
  • 再次洗涤并添加底物溶液，通过酶催化底物产生颜色变化。
  • 最后一步是读取结果，通常借助于酶标仪测量每个孔内的吸光度值，从而间接反映出样品中P27抗原的含量。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2003-07-30 颁布
  • 2003-10-01 实施
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NY/T 680-2003禽白血病病毒p27抗原酶联免疫吸附试验方法_第1页
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文档简介

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犅４１

中华人民共和国农业行业标准

犖犢／犜６８０—２００３

禽白血病病毒狆２７抗原

酶联免疫吸附试验方法

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２００３０７３０发布２００３１００１实施

中华人民共和国农业部发布

书

犖犢／犜６８０—２００３

前言

本标准的附录Ａ为规范性附录。

本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口。

本标准起草单位：农业部兽医诊断中心。

本标准主要起草人：陈西钊、苏敬良、王宏伟、田克恭、吴清民、王传彬。

Ⅰ

书

犖犢／犜６８０—２００３

禽白血病病毒狆２７抗原

酶联免疫吸附试验方法

１范围

本标准规定了禽白血病病毒（ＡＬＶ）ｐ２７抗原酶联免疫吸附试验方法。

本标准适用于检测鸡蛋蛋清以及鸡胚组织细胞培养物中的ＡＬＶｐ２７蛋白抗原。

２狆２７抗原酶联免疫吸附试验

２．１试验材料

２．１．１试剂

２．１．１．１抗ｐ２７蛋白抗体：应用提纯的禽成髓细胞性白血病病毒ｐ２７蛋白免疫家兔制备。

２．１．１．２阳性抗原：含鸡白血病／肉瘤病毒群特异性ｐ２７蛋白抗原的鸡蛋清。

２．１．１．３阴性抗原：无鸡白血病／肉瘤病毒群特异性ｐ２７蛋白抗原的ＳＰＦ鸡蛋清。

２．１．１．４酶结合物：辣根过氧化物酶标记的抗ｐ２７蛋白抗体。

２．１．１．５磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）：配制见第Ａ．１章。

２．１．１．６包被液：配制见第Ａ．２章。

２．１．１．７洗涤液：配制见第Ａ．３章。

２．１．１．８样品稀释液：配制见第Ａ．４章。

２．１．１．９底物溶液：配制见第Ａ．６章。

２．１．１．１０终止液：配制见第Ａ．７章。

２．１．２器材

ａ）酶联检测仪；

ｂ）聚苯乙烯板；

ｃ）微量加样器，容量５０μＬ～２００μＬ；

ｄ）３７℃恒温培养箱。

２．１．３样品

２．１．３．１鸡蛋样品：将待检鸡蛋小的一端朝上放置，打碎蛋壳，用移液器无菌吸取蛋清，密装于灭菌小

瓶内。

２．１．３．２细胞培养物：用移液器无菌吸取细胞培养物，密装于灭菌小瓶内，４℃或－３０℃保存或立即送

检。试验前将送检样品统一编号，试验时不做稀释。

２．２操作方法

２．２．１用包被液将抗ｐ２７蛋白抗体作４０００倍稀释，每孔１００μＬ加入９６孔聚苯乙烯板中，４℃过夜。

２．２．２取出包被好的聚苯乙烯板，将液体倒弃，每孔加２５０μＬ洗涤液漂洗三次，每次２ｍｉｎ，甩干。

２．２．３每孔加１５０μＬ质量浓度为１％的明胶封闭液，３７℃反应６０ｍｉｎ。

２．２．４重复２．２．２。

２．２．５在Ａ１、Ａ２孔各加１００μＬ标准阴性对照，Ａ３、Ａ４孔各加１００μＬ标准阳性对照。

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