- 现行
- 正在执行有效
- 2003-07-30 颁布
- 2003-10-01 实施
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文档简介
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犅41
中华人民共和国农业行业标准
犖犢/犜680—2003
禽白血病病毒狆27抗原
酶联免疫吸附试验方法
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20030730发布20031001实施
中华人民共和国农业部发布
书
犖犢/犜680—2003
前言
本标准的附录A为规范性附录。
本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口。
本标准起草单位:农业部兽医诊断中心。
本标准主要起草人:陈西钊、苏敬良、王宏伟、田克恭、吴清民、王传彬。
Ⅰ
书
犖犢/犜680—2003
禽白血病病毒狆27抗原
酶联免疫吸附试验方法
1范围
本标准规定了禽白血病病毒(ALV)p27抗原酶联免疫吸附试验方法。
本标准适用于检测鸡蛋蛋清以及鸡胚组织细胞培养物中的ALVp27蛋白抗原。
2狆27抗原酶联免疫吸附试验
2.1试验材料
2.1.1试剂
2.1.1.1抗p27蛋白抗体:应用提纯的禽成髓细胞性白血病病毒p27蛋白免疫家兔制备。
2.1.1.2阳性抗原:含鸡白血病/肉瘤病毒群特异性p27蛋白抗原的鸡蛋清。
2.1.1.3阴性抗原:无鸡白血病/肉瘤病毒群特异性p27蛋白抗原的SPF鸡蛋清。
2.1.1.4酶结合物:辣根过氧化物酶标记的抗p27蛋白抗体。
2.1.1.5磷酸盐缓冲液(PBS):配制见第A.1章。
2.1.1.6包被液:配制见第A.2章。
2.1.1.7洗涤液:配制见第A.3章。
2.1.1.8样品稀释液:配制见第A.4章。
2.1.1.9底物溶液:配制见第A.6章。
2.1.1.10终止液:配制见第A.7章。
2.1.2器材
a)酶联检测仪;
b)聚苯乙烯板;
c)微量加样器,容量50μL~200μL;
d)37℃恒温培养箱。
2.1.3样品
2.1.3.1鸡蛋样品:将待检鸡蛋小的一端朝上放置,打碎蛋壳,用移液器无菌吸取蛋清,密装于灭菌小
瓶内。
2.1.3.2细胞培养物:用移液器无菌吸取细胞培养物,密装于灭菌小瓶内,4℃或-30℃保存或立即送
检。试验前将送检样品统一编号,试验时不做稀释。
2.2操作方法
2.2.1用包被液将抗p27蛋白抗体作4000倍稀释,每孔100μL加入96孔聚苯乙烯板中,4℃过夜。
2.2.2取出包被好的聚苯乙烯板,将液体倒弃,每孔加250μL洗涤液漂洗三次,每次2min,甩干。
2.2.3每孔加150μL质量浓度为1%的明胶封闭液,37℃反应60min。
2.2.4重复2.2.2。
2.2.5在A1、A2孔各加100μL标准阴性对照,A3、A4孔各加100μL标准阳性对照。
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