标准解读

《NY/T 547-2002 兔粘液瘤病琼脂凝胶免疫扩散试验方法》是一项农业行业标准，主要用于指导实验室通过琼脂凝胶免疫扩散技术来检测兔粘液瘤病毒抗体或抗原。该标准详细规定了实验所需材料、试剂制备方法、操作步骤及结果判断等关键环节。

在准备阶段，首先需要准备好所有必要的材料和试剂，包括但不限于特异性抗血清（针对兔粘液瘤病毒）、待测样品（如疑似感染动物的血清或其他体液样本）、以及用于制作琼脂板的基础成分——琼脂糖。此外，还需确保实验室环境符合生物安全要求，并采取适当措施防止交叉污染。

接下来是琼脂凝胶板的制备过程。将适量的琼脂糖溶解于蒸馏水中加热至完全溶解后冷却至约60°C左右，然后倒入预先清洁并干燥好的玻璃培养皿内形成均匀薄层，待其自然冷却固化即可得到所需的琼脂凝胶板。

随后，在已固化的琼脂凝胶板上按照预定模式打孔，通常采用圆形排列方式。将特异性抗血清加入中心孔中，而待测样品则分别加至周围的小孔里。放置好所有液体后，需轻轻敲击培养皿底部使溶液充分渗入凝胶孔洞内部。

完成上述步骤后，将整个装置置于湿润环境中（例如湿度箱）保持恒定温度（一般为37℃），让其静置足够时间（至少24小时）。期间，若存在相应抗体与抗原，则会在两者之间形成沉淀线，这是由于免疫复合物形成的缘故。

最后一步是对实验结果进行观察分析。根据沉淀线出现的位置、数量及其清晰度等因素综合判断待测样品是否含有兔粘液瘤病毒相关的抗体或抗原。需要注意的是，正确解读沉淀线形态对于获得准确结论至关重要，因此建议由经验丰富的技术人员执行此任务。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2002-08-27 颁布
  • 2002-12-01 实施
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文档简介

ICS.11.220NYB41中华人民共和国农业行业标准NY/T547-2002免粘液瘤病琼脂凝胶免疫扩散试验方法Agargelimmunodiffusionforrabbitmyxoma2002-08-27发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部发布

NY/T547-2002前免粘液瘤是免的病毒性致死性传染病，世界动物卫生组织World（rganizationforAnimalHealth（英）,OfficeintentionaldesEpizootic(法),OIE和我国分别将之列为B类或二类动物疫病。本标准是依据OIE《诊断试验和疫苗标准手册》（2000版）（"ManualofStandardsforDiagnostieTestsandVaccines”,2000）第2.2.1章制定的。本标准与该章的差异是-本标准只采用了该章规定的最实用的抗体抗原兼测的琼脂凝胶免疫扩散试验(液体法)技术·此项技术已可满尼我国对内和对外诊断及检疫的需要；-本标准基于该章的原则性规定，根据我国的研究与实践经验规定了具体的操作程序本标准的附录A为规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部动物检疫所。本标准主要起草人：杜元钊、朱万光、刘佩兰、吴延功。

NY/T547-2002免粘液瘤病琼脂凝胶免疫扩散试验方法1范围本标准规定了免粘液瘤病琼脂凝胶免疫扩散试验的技术要求本标准适用于免粘液瘤病毒特异抗体和可溶性抗原的检测.也可用于兔粘液瘤病的流行病学调查，拉验方法2.1材料2.1.1器材与试剂：a）孔器：内径6mmib）家脂楼：三羟甲基氮基甲烧（Tris）10%故酸;乙二胺四乙酸(EDTA)。2.1.2琼脂扩散抗原，按说明书使用2.1.3标准阳性血清，按说明书使用。2.1.4被检血消：按常规方法采血分离血清,4℃保存10d内检测有效；一20℃冻结保存，一年有效。2.1.5琼脂糖平板制备方法见附录A。2.2操作方法2.2.1在琼脂糖平血上,按坐标纸上画好的梅花型(见图1)打孔，其孔径为6mm.孔距为4mm;孔内琼脂糖用针头小心挑出，勿破坏周围琼脂。打孔后用酒精灯加热封底。图1梅花型打孔示意图2.2.2加样:滴加抗原和血清于梅花型孔中，中央孔(7孔）加抗原（Ag)，1、3.5孔加标准阳性血清,2、4、6孔加被检血清，每孔均以加满不溢出为度。2.2.3反应：加样完毕后.静置10min.然后放入带盖的湿盒中置37C反应,24h观察结果，48h判定结果。阴性或可疑的结果于72h再判定一次。2.3结果判定2.3.1判定标准检测血清中可溶性抗原或抗体出现的沉淀线：a）加被检血清中含有可溶性抗原，则被检血消与阳性血清之间形成沉淀线，并与阳性血清和抗原形成的沉淀线

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