琼脂糖凝胶电泳和SDSPAGE凝胶电泳2

DNA/RNA的琼脂糖凝胶检测2023/2/612015/5/6凝胶电泳分离长度琼脂糖凝胶电泳200bp—近50kb聚丙烯酰胺凝胶电泳5—500bp分辨率高采用不同浓度的凝胶可以分辨DNA分子的范围2023/2/622015/5/6一、实验原理

电泳是现在用于分离和纯化DNA/RNA片段的最常用技术。当制备好的一块“胶”即一块包含电解质的多孔支持介质并把它置于静电场中，DNA/RNA分子将向阳极移动，这是因为DNA/RNA分子沿其双螺旋骨架两侧带有富含负电荷的磷酸根残基。当DNA/RNA长度增加时，来自凝胶的阻力就会增加，不同长度的DNA/RNA片段就会出现不同的迁移率。因而就可依据DNA/RNA分子的大小使其分离2023/2/632015/5/6含不同量琼脂糖的凝胶的分离范围

凝胶中的琼脂糖含量%(W/V)DNA/RNA分子的分离范围(kb)0.35—600.61—200.70.8—100.90.5—71.20.4—61.50.2—320.1—22023/2/642015/5/6核酸染料

溴化乙锭（EB）是一种为芳香族类染料，当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时，琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分子中形成荧光络合物，使DNA发射的荧光增强几十倍，电泳后就可直接紫外灯照射下检测琼脂糖中的DNA。Godview吖啶橙类核酸低毒染料目前尚未发现具有致癌性。Genegreen花青素母体为基础，苯环改良成链式结构的油性大分子，目前认为的最低毒的核酸绿色染料。备注：一般将核酸染料加入loadingbuffer中可以减少污染及减少用量（1mlloadingbuffer：10ul染料）。2023/2/652015/5/6电泳缓冲液的组成

Tris—乙酸（TAE）Tris—硼酸（TBE）Tris—磷酸（TPE）其浓度约为50mmoL/L，PH为7.5—7.8,这些缓冲液均含有EDTA。这些缓冲液通常配制成浓缩液，贮存于室温。2023/2/662015/5/6常用的电泳缓冲液的配制缓冲液使用液浓贮存液（每升）Tris—乙酸（TAE）1×：0.04moL/LTris—乙酸

0.001moL/LEDTA50×：242gTris碱57.7mL冰乙酸100mL0.5moL/LEDTA(PH8.0)Tris—磷酸（TPE）1×：0.09moL/LTris—磷酸

0.002moL/LEDTA10×：108gTris碱15.5mL85%磷酸40mL0.5moL/LEDTA(PH8.0)Tris—硼酸（TBE）0.5×0.045moL/LTris—硼酸

0.001moL/LEDTA5×：54gTris碱27.5g硼酸20mL0.5moL/LEDTA(PH8.0)2023/2/672015/5/6加样缓冲液

缓冲液类型

6×缓冲液贮存温度I

0.25%溴酚蓝

0.25%二甲苯青FF40%（W/V）蔗糖水溶液4℃II

0.25%溴酚蓝

0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖水溶液室温III

0.25%溴酚蓝

0.25%二甲苯青FF30%甘油水溶液4℃IV

0.25%溴酚蓝

40%（W/V蔗糖水溶液）4℃V（碱性加样缓冲液）

300mmoL/LNaoH6mmoL/LEDTA18%聚蔗糖水溶液

0．15%溴甲酚绿

0．25%二甲苯青FF4℃2023/2/682015/5/6加样缓冲液可以增大样品密度，以确保DNA均匀进入样品孔内，还可以使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利。溴酚蓝在琼脂糖凝胶中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍,溴酚蓝在琼脂糖凝胶中移动的速率约与长300bp的双链线性DNA相同,而二甲苯青FF在琼脂糖凝胶中移动的速率则与4kb双链线性DNA相同。2023/2/692015/5/6DNA片段长度标记

DNA片段长度标记通常叫作DNAMarker,本实验使用MarkerIII，分别由200bp、500bp、800bp、1200bp、2000bp、3000bp和4500bp的7条DNA条带组成，DNAMarker不仅可以作为凝胶中DNA片段长度的一个标记，还可以作为电泳的对照。2023/2/6102015/5/6二、实验方法

1、50×TAE的稀释：如制备50mL1×TAE，取1mL50×TAE加入49mL水定容至50mL。2、制备1%的琼脂糖胶液：取0.2g琼脂糖溶于20mLTAE中，在短时间里加热琼脂糖全部熔化，使溶液冷却至60℃。2023/2/6112015/5/62023/2/6122015/5/63、用于RNA电泳的电泳槽用去污剂洗干净，再用水冲洗，用乙醇干燥后灌满3%的H2O2溶液，于室温放置10分钟，然后用DEPC—SDW冲洗电泳槽，梳子同样处理。4、在制胶槽中放好梳子。将融化的琼脂糖凝胶导入胶槽中。室温冷却15-20min5、将温热琼脂糖倒入胶床中，凝胶的厚度在3—5mm之间，凝固15—20min。基本参数（北京六一）：

外型尺寸（L×W×H）：310×150×90mm

凝胶板规格(L×W)：60×60mm；120×60mm；60×120mm；120×120mm

试样格：11+25齿(1.0mm厚)；6+13齿,8+18齿(1.5mm厚)；2+3齿(2.0mm厚)

缓冲液总容量：约650ml

重量：1Kg2023/2/6132015/5/66、在凝胶完全凝固之后，小心垂直移去梳子，将胶床放在电泳槽内，加样孔一侧靠近阴极（黑极）。7、向电泳槽中注入适量的TAE缓冲液，通常缓冲液高于胶面1cm。8、分别将DNA/RNA样品与加样缓冲液混合,用移液枪将样品加入加样孔。9、正确连接电泳槽和电源，设定稳压为140V，电流一般为50mA。10、电泳结束后，在紫外观测仪上进行观察。2023/2/6142015/5/6三、注意事项与实验技巧制胶和加样过程中要防治气泡的产生。紫外光对人眼有害，观察时加盖玻璃罩，观察时间不宜太长。EB具有强诱变性，可致癌。必须戴手套操作，严格注意防护。加样时，Tip头不宜插入样品孔太深，也不要穿破胶孔壁，否则样品渗漏或DNA带型不整齐。配胶和灌电泳槽需使用同一批缓冲液。因为pH或离子强度很小的差别也会在凝胶前部造成紊乱，影响DNA片段的泳动。梳板的选用一般每个制胶模具均配有多个齿型不同的梳板，梳齿宽厚，形成的点样容积较大，用于DNA片段回收实验等；相反，梳齿窄而薄，形成的点样容积就较小，用于PCR产物、酶切产物鉴定等。一般来说，上样量小时尽量选择薄的梳板制胶，此时电泳条带致密清晰，便于结果分析。

2023/2/6152015/5/6四、跑出好看的电泳图凝胶一定要加热熔解完全，均匀，可以对着光亮的地方看看清澈不清澈；一般情况下，梳子越薄而长，条带越好看；上样量不宜过多，会造成条带的相互挤压；如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘效应，中间电场比较均匀；做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致；加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电泳孔内；电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后，再调高电压。

2023/2/6162015/5/6SDS凝胶电泳实验二2023/2/617SDS凝胶电泳实验原理实验步骤注意事项SDS的优点SDS的缺点实验常见问题及处理小技巧2023/2/618实验原理基本原理分类分离范围2023/2/619丙烯酰胺N,N’-亚甲基双丙烯酰胺聚丙烯酰胺四甲基乙二胺(TEMED)过硫酸胺(AP)激活作用激活作用共聚合2023/2/620基本原理之一阴离子去污剂SDS破坏蛋白质分子之间及与其它物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变其原有的构象，并同蛋白质分子充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物。强还原剂巯基乙醇打开蛋白质分子内的二硫键使这种结合更加充分。2023/2/621基本原理之二结合了SDS的蛋白质在水溶液中的形状类似于长椭圆棒，不同的蛋白质-SDS复合物其椭圆棒的短轴长度恒定，而长轴的长度则与蛋白质分子量的大小成正比。这样的蛋白质-SDS复合物在电场作用下，其迁移率便不再受蛋白质原有的净电荷及形状等因素的影响，而主要取决于其分子量大小这一因素。根据这一特点，就可以将各蛋白组分按分子量大小分开。2023/2/622分类

PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类.

连续系统电泳体系中,缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。2023/2/623电泳槽2023/2/624不连续系统不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。2023/2/625浓缩胶浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。分离胶孔径较小,通过选择合适的凝胶浓度,可以使样品很好的分离.2023/2/626SDS聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围取决于用于灌胶的聚丙烯酰胺的浓度和交联度。在没有交联剂的情况下聚合的丙烯酰胺形成毫无价值的粘稠溶液，而经双丙烯酰胺交联后凝胶的刚性和抗张强度都有所增加，并形成SDS-蛋白质复合物必须通过的小孔。这些小孔的孔径随“双丙烯酰胺～丙烯酰胺”比率的增加而变小，比率接近1：20

时孔径达到最小值。SDS聚丙烯酰胺凝胶大多按“双丙烯酰胺～丙烯酰胺”为1：29配制，试验表明它能分离大小相差只有3%的蛋白质。分离范围2023/2/627变性胶浓缩胶10%8ml5%4ml(2cm)H2O3.2mlH2O3.2ml30%丙烯酰胺2.7ml30%丙烯酰胺0.67ml1.5MTrisHClPH8.82ml1MTrisHClPH8.81ml10%SDS100μl10%SDS50μl10%AP50μl10%AP25μlTEMED5μlTEMED5μl2023/2/628活性胶6%8mlH2O4.2ml30%丙烯酰胺1.67ml1.5MTrisHClPH8.82.02ml10%AP100μlTEMED10μl胶的配制方法凝胶的筛分特性取决于它的孔径，而孔径又是灌胶时所用丙烯酰胺和双丙烯酰胺绝对浓度的函数。用5～15%的丙烯酰胺所灌制凝胶的线性分离范围如下表：丙烯酰胺浓度（%）线性分离范围（kD）

1512～431016～687.536～945.057～212双丙烯酰胺～丙烯酰胺摩尔比为1：29。2023/2/629上样缓冲液之一

上样缓冲液(SDS

loading

buffer)是一种以溴酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS凝胶电泳上样缓冲液，用于常规的SDS蛋白电泳样品上样。

本产品分为还原型和非还原型两种，还原型上样缓冲液中的巯基可使蛋白分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，使通过二硫键连接的各亚单位彼此分离，在电泳凝胶上显现多个蛋白条带，选购和使用时请务必注明，仔细区分。

2023/2/630上样缓冲液

之二注意事项

还原型上样缓冲液中含一定量的DTT（二硫苏糖醇）或巯基乙醇，有轻微刺激性气味，较易区分；

含巯基的试剂有一定的毒性，为了安全和健康，应穿实验服并戴一次性手套操作。2023/2/631上样缓冲液

之三使用说明

1.按每4μl蛋白样品加入1μl蛋白上样缓冲液的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5X)。

2.

100℃或沸水浴加热3～5min，以充分变性蛋白。

3.

冷却到室温后取上清直接上样到SDS胶加样孔内即可。

4.

通常电泳时染料到达胶的底端附近（0.5～1cm)即可停止电泳。2023/2/632

增加样品密度以保证蛋白质沉入加样孔内，一般上样缓冲液中加入一定浓度的甘油或蔗糖，这样可以增加样品的比重。上样缓冲液中的甘油非常重要，起增加粘度的作用，这可以阻止样品从梳样孔中扩散出来到电泳缓冲液中。

指示剂检测电泳的行进过程，一般加入泳动速率较快的溴酚蓝指示电泳的前沿。上样缓冲液

之四2023/2/633

单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混和的固定液。Carnoy固定液（甲醇:冰乙酸=3:l）每次使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15min至24h，冰箱、室温均可。甲醇/冰醋酸固定液2023/2/634甲醇/冰醋酸固定液甲醇：有固定、硬化和脱水的作用。可以固定白蛋白、球蛋白、核蛋白，但对核蛋白固定效果较差(亲和力小且易自溶)。甲醇固定的特点是杀死快，渗透力强，对组织收缩较大(可收缩20左右)，可使材料变硬。冰醋酸：纯醋酸在温度稍变低时即形成冰晶，所以又称为冰醋酸。常用0.3～0.5的浓度作为固定液。冰醋酸对材料有膨胀作用，对核蛋白固定好，可与水、酒精、氯仿混合。2023/2/635电泳后的凝胶经考马斯亮蓝染色、脱色后的凝胶照片图1标准蛋白质与待测样品电泳图谱

940006200043000310002010014400注：胶槽1标准蛋白；胶槽2、3样品蛋白

考马斯亮蓝染色常用染色方法银染法金属离子染色法以考马斯亮蓝染色为例蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡测定蛋白质浓度范围为0～1000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。2023/2/636实验步骤１．试剂配制

(1)30%丙烯酰胺（Acr）：称Acr30g，甲叉双丙烯酰胺（Bis）0.8g，加蒸馏水至100ml，过滤后置棕色瓶中。4℃，1～2月

（2）10%SDS（十二烷基磺酸钠）

（3）1.5mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.9)：

称取Tris18.2g,加入50ml水,用1mol/L盐酸调pH8.8,最后用蒸馏水定容至100ml。2023/2/637（4）1.0mol/LTris-HCl缓冲液(pH6.8):

称取Tris12.1g,加入50ml水，用1mol/L盐酸调pH6.8,最后用蒸馏水定容至100ml（5）0.05mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.0)：称取Tris0.6g,加入50ml水，用1mol/L盐酸调pH8.0,最后用蒸馏水定容至100ml（６）TEMED（四甲基乙二胺）2023/2/638（７）上样缓冲液：

SDS（100mg）+巯基乙醇（0.1ml）+溴酚蓝（2mg）+甘油（2g）+0.05mol/LpH8.0Tris-HCl（2ml），最后定容至10ml（８）固定液：50%甲醇454ml，冰乙酸46ml混匀（９）染色液：称取考马斯亮蓝R2500.125g，加上述固定液250ml，过滤后备用2023/2/639（1０）脱色液：

冰乙酸75ml，甲醇50ml，加蒸馏水定容至1000ml（1１）电极缓冲液（内含0.1%SDS，0.05mol/LTris-0.384mol/L甘氨酸缓冲液pH8.3）：称Tris6.0g，甘氨酸28.8g，加入SDS1g，加蒸馏水使其溶解后定容至1000ml2023/2/640（12）高分子量标准蛋白试剂盒:

兔磷酸化酶BMW=97,400

牛血清白蛋白MW=66,200

兔肌动蛋白MW=43,000

牛碳酸酐酶MW=31,000胰蛋白酶抑制剂MW=20,100

鸡蛋清溶菌酶MW=14,400

置-20℃保存，使用前室温融化，沸水浴中加热3-5分钟后上样。（13）样品：兔血清2023/2/641２.聚胶前准备

(1)配制10％过硫酸铵溶液(需每天新鲜配制)。

(2)将单体储存液、缓冲液、水按照一定比例配制成凝胶溶液。

(3)将灌胶装置准备好。

(4)待凝胶溶液平衡至室温(23~25℃)后，真空脱气15min。2023/2/6421）.安装膜具①将玻璃板用蒸馏水洗净晾干,将凡士林均匀的涂在两侧的封条上，用封条将玻璃板封好。

②称取2g琼脂糖加100ml蒸馏水，慢慢的煮开（煮的过程中要不断搅拌），将煮好的(无气泡)琼脂糖倒入支胶架三分之二高度，快速将两侧封好的玻璃板插入琼脂糖中，注意凹槽朝外，用夹子固定好，待凝固后灌胶。2023/2/6432）制备SDS聚丙烯酰胺凝胶

①制备分离胶30%丙烯酰胺5ml+分离胶缓冲液5ml+10%SDS0.2ml+10%过硫酸铵0.2ml+蒸馏水9.6ml；混匀后加入8ulTEMED,立即混匀（不能有气泡），灌入安装好的垂直板中，灌胶时要匀速贴壁流入，防止气泡产生。灌至离槽沿3cm处，立即在胶面上用移液管加入1-2cm的蒸馏水，静置，待凝胶聚合后（约30min），去除水相，然后用吸水纸吸干残余的水。2023/2/644②制备浓缩胶30%丙烯酰胺1.32ml+浓缩胶缓冲液1ml+10%SDS0.08ml+10%AP0.08ml+蒸馏水5.6ml；混匀后加入8ulTEMED,立即混匀（不能有气泡），灌入垂直板至离槽沿0.5cm处，插入梳子（不能混入气泡），静置，待凝胶聚合后，加入电泳缓冲液，拔去梳子。2023/2/645③先用刀片将琼脂糖剥离开，再将玻璃板从架子上取出，再用夹子固定在电泳槽内（注意凹槽朝内），将电泳缓冲液倒入电泳槽内。

3).样品预处理

取0.5ml样品加入0.5ml上样缓冲液，置沸水中煮5分钟。

4).上样

①第一个孔内加20ul标准蛋白质溶液

②其他每孔加入20ul样品。上样时要将移液枪头垂直插入孔内且要缓慢匀速推入样品。2023/2/646

垂直板电泳装置加样样品迁移方向2023/2/6475).电泳

接通电源，将电压调至80V、50mA。当溴酚兰进入分离胶后，把电压提高到150V、80mA，电泳至溴酚兰距离胶底部1-2cm处，停止电泳。

6).固定

取下凝胶，置于培养皿中的固定液中，轻轻振摇10分钟，倒去固定液。

7).染色脱色

培养皿中倒入50-60度预热的染色液浸没凝胶，约40分钟后回收染色液，用清水冲洗掉胶上多余的染色液。倒入脱色液，脱色2小时，期间换脱色液2-3次。2023/2/648电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒。混合样品带孔胶

按分子大小分离电泳方向

电泳

小分子大分子2023/2/649夹在两块玻璃板之间的凝胶

电泳缓冲液

电泳缓冲液

加在槽中的经SDS处理的样品分子量小分子量大电源2023/2/650标准蛋白分子量未知蛋白在一定的凝胶浓度下，多肽链分子量的对数与多肽链的相对迁移率成线性关系，所以可以通过标准曲线求未知多肽链分子量。

相对迁移率７.结果处理

2023/2/651实验注意事项

1.形成凝胶的试剂要有足够的纯度：丙烯酰胺是形成凝胶溶液中的最主要成份，其纯度的好坏将直接影响凝胶的质量，丙烯酰胺可能混有的影响凝胶形成的杂质有：线性多聚丙烯酰胺、金属离子等。2.

注意不能随便倾倒单体溶液，应加入过量的催化剂使其完全聚合成无毒性的聚丙烯酰胺后再弃置。2023/2/6523.

TEMED中混有氧化试剂后其自身极易被氧化而失去催化能力，另外TEMED的氧化产物呈黄色，以此可以鉴定TEMED的质量。如果无法获得无色透明的TEMED，只能适当增加用量以保证聚胶速度。2023/2/6534.

过硫酸铵容易吸潮，由于它溶解于水后很快降解失去催化能力，因此潮解后的过硫酸铵会渐渐失去活性。保存固体过硫酸铵应密闭干燥。过硫酸铵溶液宜制胶当天配制。另外在配制凝胶溶液时过硫酸铵不易过量，否则会使蛋白质在电泳过程中被氧化(主要指天然无变性剂凝胶)。2023/2/6545.

激活剂的用量:

激活剂的浓度适当与否不仅可以决定凝胶聚合的速度，也将影响凝胶的质量。增加过硫酸铵或TEMED的用量，将使丙烯酰胺聚合链长度缩短，凝胶会变得脆弱而失去应有的柔性。二者多至一定程度时，聚合链长度过短，将不会形成肉眼可见的凝胶，这些短链多聚物呈溶液状，只是其粘度较聚合前高一些。2023/2/655

6.温度的影响聚胶的最佳温度为23~25℃，需要注意灌胶前单体溶液(通常置于4℃冰箱)及玻璃板或管(有时从烘箱取出)也要平衡至此温度。由于溶液在抽真空时仍维持较低温度，需待其升至室温后再脱气，另外升温后脱去氧气的速度较低温时快。2023/2/656

7.氧气的影响氧气会与被激活的单体自由基作用抑制聚合过程，因此需在加激活剂前对单体溶液脱气。如果省去这一步骤，凝胶仍能聚合但需更多的激活剂，并且不能保证很好的重复性，充分去除氧气可以用尽量少的激活剂得到最佳聚合效果。通常在较好的真空度脱气至少15min。

2023/2/657

8.凝胶添加剂：凝胶中常常加入SDS、尿素、TritonX-100等添加剂。SDS加入后不会对凝胶的聚合产生影响，但尿素会使凝胶孔径变小，这一特性可用来分离小分子蛋白质或多肽。2023/2/658

9.

聚胶时间：虽然应用过硫酸铵／TEMED催化后灌胶15~20min即可观察到凝胶的形成，但至少需90min才能保证95％以上的单链聚合成长短以及具有合适的孔径大小。采用核黄素时聚胶时间需更长，但它一般用于等电聚焦即根据蛋白质的电荷性质进行分离，对孔径大小要求不高，因此不必等很长时间(完全聚合需8h)。2023/2/659

10.单体的浓度：是指单体总重量(丙烯酰胺+bis)在溶液中的百分比(w／v)，可选择的范围为3％~30％，单体浓度增加后聚合速度将加快，因此可适当减少催化剂的用量。

11.

SDS与蛋白质的结合按质量成比例（即：1.4gSDS/g蛋白质），蛋白质含量不可以超标，否则SDS结合量不足。

2023/2/66012.

用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。并且SDS测定分子量有10％误差，不可完全信任。13.

有的蛋白质（如：电荷异常或结构异常的蛋白质；带有较大辅基的蛋白质）不能采用该法测相对分子量。

2023/2/66114.

有些蛋白质由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（α-胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。

15.

如果该电泳中出现拖尾、染色带的背景不清晰等现象，可能是SDS不纯引起。2023/2/662常见问题及处理办法１、纹理和拖尾现象

由于样品溶解不佳引起的，克服的方法可以在加样前离心，增加一些增溶辅助试剂如尿素。２、蛋白带过宽，与邻近泳道的蛋白带相连是由于加样量太多，可以减少上样量。３．电泳时间比正常要长

可能由于凝胶缓冲系统和电极缓冲系统的pH选择错误。４．指示剂成微笑符号（指示剂前沿呈现向上的曲线形）：说明凝胶的不均匀冷却，中间部分冷却不好，导致分子有不同的迁移率。

2023/2/663５.指示剂成微笑符号（指示剂前沿呈现向下的曲线形）。

由于电泳槽的装置不合适，尤其是凝胶和玻璃板组成的“三明治”底部有气泡或靠近隔片的凝胶聚合不完全．６.凝胶时间不对。

通常胶在30min内凝聚．如果凝聚得太慢，可能是TEMED，APS剂不够或者失效。7.出现“皱眉”（两边向下中间鼓起）

主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。2023/2/6648.出现“鬼带”如何处理？

“鬼带”就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，