细胞培养基种类与基本成分

....细胞培育基种类与根本成分细胞培育基种类与根本成分培育基种类培育基种类DMEMRPMI1640MEMDMEM/F12都是应用最广泛的培育基。其他如M199、IMDM、L15培育基等也用于某些细胞的培育。其具体的特征与应用如下：1、BME细胞培育基BasalMediumEagle〕，1955Eagle设计，BSS＋12种氨基酸＋谷氨酰胺＋基酸＋谷氨酰胺＋8种维生素。简洁、便于添加，适于各种传代细胞系和特别研22、MEM细胞培育基又称低限量又称低限量Eagle培育基〔MinimalEssentialMedium〕，1959年在Eagle”s根底培育基〔培育基〔BME〕上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最根本、试用X围最广的培育基，最正确或者最经济的培育基。33、DMEM细胞培育基DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，承受双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为这就是大家常说的低糖和高糖了。这就是大家常说的低糖和高糖了。离原来生长点的克隆培育，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培育。例如胞的培育。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。44、IMDM细胞培育基MediumIscove”sMedium，用于培育红细胞和巨噬细胞前体。此种培育液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPESHEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDMB淋巴细胞，LPS常丰富的培育液，因此可以用于高密度细胞的快速增殖培育。常丰富的培育液，因此可以用于高密度细胞的快速增殖培育。B细胞，骨髓造血细胞，T细胞和淋巴瘤细胞的生长。IMDM为养分非55、RPMI-1640细胞培育基Moore1967RoswellParkMemorialInstitute设计，含BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等。现也用于悬浮细胞培育，如哺乳动物、特别造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培育，其它像动物、特别造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培育，其它像上皮细胞等均可参考使用。66、HamF10细胞培育基19631963HamF10适用于仓鼠、人二倍体细胞，特适于羊水细胞培育。适用于仓鼠、人二倍体细胞，特适于羊水细胞培育。77、DMEM/F12细胞培育基Ham”sF12CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析与原代培育。隆形成率的分析与原代培育。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种培育基的根底培育基。88、M199细胞培育基19501950MorganM-199BSSM-199培育转染的细胞。现广泛用于病毒学、疫苗生产。99、McCoy5A培育基Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。1010、L15细胞培育基L-15L-15CO2缺乏的状况下培育肿瘤代了葡萄糖。代了葡萄糖。培育基成分培育基成分接使用，格外便利。物质：氨基酸4℃冰箱中储存2周以上时，还应重参加原来量的谷氨酰胺。氨酰胺。碳水化合物要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。无机盐和钙离子，帮助细胞调整细胞膜功能。培育液的渗透压是一个格外重要的因素和钙离子，帮助细胞调整细胞膜功能。培育液的渗透压是一个格外重要的因素,260mOsm/kg～320mOsm/kgX围特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培育液中添加HEPES时需按以下方法调整钠离子浓度。缓冲系统钠离子浓度。缓冲系统pH在7.2-7.4。但是，细胞培育最适pH值随培育的细胞种类(7.4-7.7),而传代转化细胞系则需要偏酸pH(7.0-7.4)。由于多数培育液靠碳酸氢钠〔NaHCO3CO2体系进展缓冲，因此，气相中的的CO2CO2NaHCO33.95g/L。细胞培育瓶盖不应拧得太紧，以保证气体交换。细胞培育瓶盖不应拧得太紧，以保证气体交换。HEPES是一种非离子缓冲液，pH7.2-7.4X围内具有较好的缓冲力量，但是格外昂贵，在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠〔0.34g/L〕共用，以抵消因维生素在细胞培育中，尽管血清是维生素重要来源，但是很多培育基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。在细胞培育中，尽管血清是维生素重要来源，但是很多培育基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。其它成分在一些较为简单的培育液中还包括其它一些成分。如在杂交瘤技术中常用的在一些较为简单的培育液中还包括其它一些成分。如在杂交瘤技术中常用的DMEMDMEM培育液，使用时还需要补加丙酮酸钠和2-巯基乙醇〔2-Mercaptoethanol，2-Me〕。2-Me对细胞生长有很重要的作用。有人认为它相当于胎牛血清，有直接刺激细胞增殖作用。2-Me的活性局部是硫氢基，其中一个重要作用是使血清中含硫的化合物复原成谷胱甘肽，能诱导细胞的增殖，为非特异性的激活作用。同时避开过氧化物对培育细胞的损害。另一个重要作用是促进分裂原的反响和同时避开过氧化物对培育细胞的损害。另一个重要作用是促进分裂原的反响和DNADNA合成，增加植物凝集素(PHA)对淋巴细胞的转化作用，已广泛应用于杂交瘤技术，另外，也开头用于一些难以培育的细胞。2-Me是一种小分子复原剂，极易氧化。分子量为78.13，纯的2-Me是一种无色有刺激味的液体，比重为液体培育基保存：液体培育基保存：37干粉培育基保存：干粉培育基保存：血清清，如厂家能做到这一点，生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。质，其质量明显不如前两种。如小牛诞生后已哺乳，从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质，其质量明显不如前两种。如小牛诞生后已哺乳，从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物时间切勿超过时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加约10％，因此，血清在冻入低温冰箱前，必需预留肯定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。〔2〕一般厂商供给的血清为无菌，无需再过滤除菌。如觉察血清有悬浮物，则可将血清参加培育液内一起过滤，切勿直接过滤血清。〔〔3〕瓶装血清解冻需承受逐步解冻法：-20-70441天。然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不集而消灭沉淀。〔〔4〕热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中須規則搖晃complement〕灭活。除非必需，血清的质量。补体参与反响有：细胞毒作用,平滑肌细胞收缩,肥大细胞和血小板释放组胺,增加吞噬作用,促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。〔〔5〕切勿将血清在37℃放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。分会破会而影响血清质量。〔6〕血清中的沉淀物絮状物：主要是血清中的脂蛋白变性与解冻后血清中纤维3000rpm,5分钟去除，也可不用处理。显微镜下显微镜下“小黑点〞：经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观看象淀物在显微镜下观看象“小黑点〞