GB/T 36875-2018猪瘟病毒RT-nPCR检测方法

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T36875—2018

猪瘟病毒RT-nPCR检测方法

MethodofRT-nPCRfordetectionofclassicalswinefevervirus

2018-09-17发布2019-04-01实施

国家市场监督管理总局发布

中国国家标准化管理委员会

中华人民共和国

国家标准

猪瘟病毒RT-nPCR检测方法

GB/T36875—2018

*

中国标准出版社出版发行

北京市朝阳区和平里西街甲号

2(100029)

北京市西城区三里河北街号

16(100045)

网址

:

服务热线

:400-168-0010

年月第一版

20189

*

书号

:155066·1-61269

版权专有侵权必究

GB/T36875—2018

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业农村部提出

。

本标准由全国动物卫生标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位军事医学科学院军事兽医研究所中国兽医药品监察所

:、。

本标准主要起草人郭焕成王琴徐璐冯烨张乾义赵启祖邹兴启朱元源涂长春

:、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T36875—2018

猪瘟病毒RT-nPCR检测方法

1范围

本标准规定了猪瘟病毒特异的反转录套式聚合酶链反应方法的技术要求

-(RT-nPCR)。

本标准适用于可能感染猪瘟病毒的猪脏器血液粪便和细胞培养物中猪瘟病毒核酸的检测可用

、、,

于猪瘟的诊断和监测

。

本标准的猪瘟病毒方法不能区分感染的猪瘟病毒野毒株和免疫的疫苗株

RT-nPCR。

2缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

乙二胺四乙酸二钠

EDTA-2Na:(ethylenediaminetetraaceticaciddisodiumsalt)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

反转录套式聚合酶链反应

RT-nPCR:-(reversetranscriptionandnestedpolymerasechainreac-

tion)

3实验前准备

31实验室条件

.

311实验室分区

..

实验室分区包括核酸提取区反应体系配制区配液区扩增区电泳区流程顺序为

PCR、PCR———、、。

核酸提取区配液区扩增区电泳区各区仪器和耗材专用

→→→。。

312实验室应配备的仪器及器材

..

3121仪器级生物安全柜台式高速冷冻离心机普通冰箱和分析天平扩增

...:Ⅱ、、(-20℃4℃)、、PCR

仪电泳仪电泳槽紫外凝胶成像仪或紫外分析仪组织研磨器扁桃体采样器微波炉单道可调移

、、、()、、、、

液器

(2μL、10μL、200μL、1000μL)。

3122器材无菌注射器眼科剪眼科镊称量纸棉拭子灭菌牙签量筒锥形瓶

...:、、、、、、500mL、500mL、

一次性无酶吸头无酶离心管薄壁管

RNA(10μL、200μL、1000μL)、1.5mLRNA、0.2mLPCR。

32化学药品及试剂

.

321总提取试剂

..RNATrizol。

322电泳缓冲液的制备配制方法见附录

..TAE,A。

323琼脂糖凝胶配制方法见附录

..1%,A。

324其他试剂反转录酶缓冲液酶抑制剂

..:200U/μLM-MLV,5×M-MLV,40U/μLRNA,DEPC-

聚合酶缓冲液2+碱基随机引物

H2O,5U/μLExTaqDNA,10×ExTaq(MgPlus),6(50μmol/L),

上样缓冲液