标准解读

《GB/T 35337-2017 葡萄黄点类病毒检疫鉴定方法》是针对葡萄黄点类病毒（Grapevine yellow speckle viroid, GYSVd）制定的一份国家标准，主要应用于进出口贸易、国内流通以及科学研究等领域中对该病毒的检测与鉴定。该标准详细规定了从样品采集到最终结果判定的一系列操作流程和技术要求。

在样品采集方面，标准明确了采样时间应选择在发病高峰期或症状明显期进行；对于田间植株，推荐选取具有典型病症特征的新鲜叶片作为待检材料；同时强调了样品保存条件的重要性，比如需要将采集到的样本迅速放入保鲜袋内，并尽快送至实验室处理，以保证后续实验的有效性。

关于样品制备部分，《GB/T 35337-2017》提供了两种不同的核酸提取方法供使用者选择：一种是基于硅胶膜柱的商业试剂盒法，另一种则是传统的酚/氯仿抽提结合异丙醇沉淀技术。无论采用哪种方式，都需严格按照说明书或既定步骤执行，确保获得高质量的RNA用于后续分析。

该标准还介绍了RT-PCR扩增反应的具体参数设置及优化建议，包括引物设计原则、退火温度控制等关键因素，旨在提高目标序列特异性扩增效率的同时降低非特异性产物生成的可能性。此外，为了进一步验证阳性结果的真实性，标准建议使用巢式PCR或者直接测序的方法来进行确认。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2017-12-29 颁布
  • 2018-07-01 实施
©正版授权
GB/T 35337-2017葡萄黄点类病毒检疫鉴定方法_第1页
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文档简介

ICS6502001

B16..

中华人民共和国国家标准

GB/T35337—2017

葡萄黄点类病毒检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofGrapevineyellowspeckleviroid

2017-12-29发布2018-07-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T35337—2017

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任

。。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本标准起草单位中国检验检疫科学研究院中华人民共和国北京出入境检验检疫局中国农业科

:、、

学院植物保护研究所

。

本标准主要起草人张永江邓丛良骆卫峰赵晓丽吕玉峰张志想辛言言

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T35337—2017

葡萄黄点类病毒检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了葡萄黄点类病毒的检疫鉴定方法

。

本标准适用于可能带有葡萄黄点类病毒的葡萄繁殖材料的检疫鉴定

。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3葡萄黄点类病毒基本信息

学名Graevineellowseckleviroid

:pyp。

缩写

:GYSVd。

异名葡萄黄斑类病毒葡萄黄痘类病毒

:、。

分类地位马铃薯纺锤块茎类病毒科Posiviroidae苹果锈果类病毒属Ascaviroid

:(p)、(p)。

葡萄黄点类病毒的其他信息参见附录

A。

4方法原理

类病毒检测主要针对其核酸序列主要的方法有和核酸分子杂交

。RT-PCR。

5仪器设备主要用具和主要试剂

、

51仪器设备

.

电子天平感量普通天平感量高速冷冻离心机小型瞬时离心机普通冰箱超

(0.001g)、(0.1g)、、、、

低温冰箱制冰机涡旋振荡器磁力搅拌器高压灭菌锅计仪微波炉电泳仪电

(-80℃)、、、、、pH、PCR、、、

泳槽凝胶分析成像系统实时荧光仪杂交炉塑料薄膜封口机紫外交联仪暗箱摇床恒温水

、、PCR、、、、、、

浴锅组织破碎仪等

、。

52主要用具

.

可调移液器无酶吸头

(2.5μL、10μL、20μL、200μL、1000μL、5000μL)、RNA(10μL、20μL、

无离心管研钵研棒磁性分离架

200μL、1000μL、5000μL)、RNase(1.5mL、5mL、10mL)、、、、PCR

反应管实时荧光孔反应板杂交瓶杂交膜杂交袋光片

(200μL)、96、、、、X。

53主要试剂

.

除另有规定外所有试剂均为分析纯实验用水应符合中相关规定

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