标准解读

《GB/T 31805-2015 豇豆重花叶病毒检疫鉴定方法》是一项国家标准，规定了豇豆重花叶病毒（Cowpea severe mosaic virus, CSMV）的检疫与鉴定方法。该标准适用于进出口及国内调运过程中豇豆及其种子、种苗等植物材料中CSMV的检测与鉴定。

标准内容主要包括以下几个方面：

  1. 范围：明确了本标准适用的对象和领域。
  2. 术语和定义：对标准中使用到的专业术语进行了定义，确保理解的一致性。
  3. 原理：介绍了用于识别CSMV的方法背后的科学依据，包括直接或间接地通过观察症状、酶联免疫吸附测定(ELISA)、RT-PCR等技术手段来确认病毒的存在。
  4. 样品采集：详细描述了如何正确收集疑似感染CSMV的样本，包括采样时间、部位选择等关键点。
  5. 实验室检测：
    • 外观检查：基于肉眼观察植株是否有典型病征如叶片变形、黄化斑块等进行初步判断。
    • 血清学测试：利用特异性抗体对抗原进行捕捉，通过颜色变化等信号指示反应结果，常用方法有DAS-ELISA（双抗体夹心法酶联免疫吸附试验）。
    • 分子生物学检测：采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)，通过对特定基因片段的扩增来实现对目标病毒核酸序列的定性和定量分析。
  6. 结果判定：根据上述各项检测所得数据，结合临床表现给出最终诊断意见。
  7. 报告编写：要求记录所有相关实验信息，并按照一定格式撰写正式报告。

此标准为从事农业科学研究人员、植物检疫工作者以及相关部门提供了规范化的操作指南和技术支持，在防控豇豆重花叶病害传播方面发挥着重要作用。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2015-07-03 颁布
  • 2015-11-27 实施
©正版授权
GB/T 31805-2015豇豆重花叶病毒检疫鉴定方法_第1页
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文档简介

ICS6502001

B16..

中华人民共和国国家标准

GB/T31805—2015

豇豆重花叶病毒检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofCowpeaseveremosaicvirus

2015-07-03发布2015-11-27实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T31805—2015

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任

。。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本标准起草单位中华人民共和国厦门出入境检验检疫局中华人民共和国江苏出入境检验检

:、

疫局

。

本标准主要起草人陈青李彬方志鹏黄峰廖富荣陈红运林石明

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T31805—2015

豇豆重花叶病毒检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了豇豆重花叶病毒检疫鉴定的血清学生物学和分子检测方法

、。

本标准适用于可能携带有豇豆重花叶病毒的植物繁殖材料种子植株和产品的检疫鉴定

(、)。

2仪器设备和主要试剂

21仪器设备

.

仪定量仪灭菌锅制冰机超低温冰箱常规冰箱旋涡震荡器电泳仪凝胶成像系

PCR、PCR、、、、、、、

统微量研磨仪酶标仪洗板机微量天平感量水平电泳槽高速冷冻台式离心机水浴槽

、、、、(:0.001g)、、、、

计移液器孔酶标板研钵等防虫温室

pH、(1000μL、200μL、20μL、2μL)、96、;。

22主要试剂

.

除另有规定外所有试剂均为分析纯缓冲液

,。PCR、dNTPs(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)、DNA

聚合酶引物和探针琼脂酶联检测试剂见附录

、、,B。

3检测样品的制备

31种子

.

挑取畸形种子播于灭菌土中待长出片片叶后将表现症状的植株编号未表现症状的植株

,3~4,,

分组株为组并编号采集的叶片分成份根据需要分别用于酶联测定和分子检测

(101)。2,。

32植株

.

有症状如叶片畸形花叶斑驳等的植株编号单独检测没有症状的分组并编号检测分组方法

(、、)。,

和检测方法同双抗体夹心酶联免疫吸附测定

3.1。。

4检测与鉴定

41双抗体夹心酶联免疫吸附测定

.

把制备的样品上清液加入已包被抗体的酶联板中进行每个样品平行加到

CPSMV,DAS-ELISA。

两个孔中设阴性对照和阳性对照健康的植物组织作阴性对照感染了的植物组织作阳性对

。[,CPSMV

照其中阴性对照种类和材料如种子或叶片应尽量与检测样品一致样品提取缓冲液作空白对照不

,()],,

同的检测试剂或试剂盒按说明操作具体操作见附录

。B。

42RT-PCR

.

分别提取样品和对照的总反转录合成后进行扩增健康的植物组织作阴性对

RNA,cDNA,PCR。

照感染的植物组织作阳性对照

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