GB/T 31798-2015油菜黑胫病菌检疫鉴定方法

ICS6502001

B16..

中华人民共和国国家标准

GB/T31798—2015

油菜黑胫病菌检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofPlenodomusbiglobosus

Shoemaker&HBrunGruyterAveskamp&Verkley

(.),

2015-07-03发布2015-11-27实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T31798—2015

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任

。。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本标准起草单位中华人民共和国湖北出入境检验检疫局中国检验检疫科学研究院中华人民共

:、、

和国上海出入境检验检疫局中华人民共和国江苏出入境检验检疫局华中农业大学

、、。

本标准主要起草人赵晖王振华曾宪东易建平李彬李国庆吴品珊蔡翔

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T31798—2015

油菜黑胫病菌检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了油菜黑胫病菌Plenodomusbilobosus的检疫鉴定方法

(g)。

本标准适用于油菜种子植株及其产品中油菜黑胫病菌的检疫和鉴定

、。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3仪器设备和主要试剂

31仪器设备

.

生物显微镜体视显微镜高速冷冻离心机纯水仪超净工作台灭菌锅制冰机仪凝胶成

、、、、、、、PCR、

像系统电泳仪培养箱超低温冰箱常规冰箱涡旋振荡器

、、、、、。

32主要试剂

.

除另有规定外所有试剂均为分析纯或生化试剂试验用水符合

,,GB/T6682。

3211%次氯酸钠

..

322提取试剂提取试剂盒异丙醇无水乙醇尿素提取液

..DNA:DNA,,。(7mol/LUrea、50mmol/L

蛋白酶苯酚三氯甲烷异戊醇

Tris-HClpH8.0、62.5mmol/LNaCl、1%SDS),K(20mg/mL),∶∶

溶液

(25∶24∶1),3mol/LNaAc(pH5.2)。

323试剂缓冲液含Taq酶

..PCR:10×PCR(25mmol/LMgSO4),,dNTPs。

324凝胶电泳试剂琼脂糖缓冲液

..:,TAE,Loading,EB。

325培养基蔬菜汁公司琼脂粉蒸馏

..20%V8:V8(CampbellSoup)200mL,CaCO30.75g,13.0g,

水定容至调整至高压灭菌

1000mL,pH5.8,121℃20min。

326马铃薯葡萄糖琼脂培养基马铃薯浸粉葡萄糖氯霉素琼脂蒸

..(PDA):5.0g,20.0g,0.1g,13.0g,

馏水定容至调整至高压灭菌

1000mL,pH5.6,121℃20min。

4病菌的鉴定

41症状检查

.

411种子症状检查

..

取样品量若样品少可适量增大比例的种子在解剖镜下挑选皱缩干瘪变色残缺的

1%~5%(),、、、

种子或有霉变的籽粒或病残体每份种子样品挑选不少于