长白山野生绣球菌菌丝体组织分离及营养特性研究

延边大学本科毕业论文长白山野生绣球菌菌丝体组织分离及营养特性研究TheMyceliumTissueIsolationandTheStudyonNutritionalCharacteristicsofWideSparassiacrispaofChangbaiMountain主要内容材料与方法前言12结果与分析3结论4

前言绣球菌[Sparassiacrispa（Wulf.）Fr.]又名绣球蕈、对花菌、干巴菌、椰菜菌、蜂窝菌、白绣球花、绣球蘑。分类学上隶属于担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目、绣球菌科、绣球菌属（Sparassis）。 绣球菌子实体肉质洁白细嫩，有茴香气味，鲜美异常，营养价值高，含有17种氨基酸，基本包含所有的必需氨基酸。药用价值增加白血球，提高人体免疫力，对癌细胞具有直接杀伤作用绣球菌素具抗真菌活性治疗高血压、糖尿病、肝病等多种疾病

本试验对采自长白山林区的野生绣球菌进行组织分离，并研究其菌丝体生长的营养条件，筛选出适宜长白山林区野生绣球菌菌丝生长的最佳营养条件，为开发、利用这一野生资源提供理论依据。

材料本研究所用野生绣球菌标本由延边大学农学院食用真菌实验室课题组成员于2010年7月采自长白山林区，由吉林农业大学图力古尔教授鉴定。将标本带回室内自然阴干，干燥后即可用于子实体组织分离菌种，纯化培养，获得试验所用菌株。试验材料供试培养基PDA培养基：马铃薯200g，葡萄20g，琼脂20g，加水至1000ml，pH自然。基础培养基：葡萄糖20g，蛋白胨2g，MgSO40.5g，琼脂20g，加水至1000ml，pH自然。试验方法1.组织分离1.1材料及用具野生绣球菌型大、颜色正、无霉、无虫害的子实体，无菌超净工作台，斜面培养基（10管），剪刀，镊子，酒精灯1.2组织分离组织分离过程在超净工作台内，整个过程要遵循无菌操作。1.3纯化培养

剪刀剪取部分绣球菌子实体75%酒精棉擦拭2-3遍酒精棉包住剪取的子实体约1min无菌剪刀将四周边缘剪掉选取远离基部的组织长≈0.5㎝宽≈0.2㎝无菌镊子夹取酒精灯外焰上方2-3次接种于斜面培养基中下部25℃恒温培养箱暗培养12天左右新生长出的菌丝接种块接种于平板培养基上25℃培养室纯化培养所得菌丝接种于斜面培养基上25℃恒温培养箱暗培养菌丝长满试管后4℃冰箱中保存2.不同碳源对绣球菌菌丝体培养特性的影响碳源处理：分别设置果糖、淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、麦芽糖包括葡萄糖各20g为碳源处理，以不加任何碳源为对照。重复次数：5次测定项目：菌丝长速，菌丝长势，菌落色泽及菌落边缘等特征。数据分析：采用Excel2003进行整理，用SPSS11.5软件中Duncan检验进行差异显著性分析。氮源处理：以基础培养基为标准，分别设置酵母膏、麸皮、黄豆粉、KNO3、(NH4)2SO4、NH4Cl包括蛋白胨各2g为不同氮源处理，以不加任何氮源为对照。重复次数、测定项目、数据分析同碳源处理。3.不同氮源对绣球菌菌丝体培养特性的影响无机盐处理：分别设置MnSO4、CaSO4、ZnSO4、CuSO4包括MgSO4各0.5g为不同无机盐处理，以不加任何无机盐为对照。重复次数、测定项目、数据分析同碳源处理。4.不同无机盐对绣球菌菌丝体培养特性的影响结果与分析

图2分离纯化后的绣球菌菌株1.野生绣球菌组织分离2.不同碳源对绣球菌菌丝体培养特性的影响注：“+”表示菌丝稀疏、纤弱，“++”表示菌丝密、长势壮，“+++”表示菌丝浓密、粗壮。小写文字母表示P<0.05水平上的差异显著性。数据为5个重复的平均值±SE。表1不同碳源对绣球菌菌丝体生长的影响Table1TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa碳源CarbonSources日均长速(mm·d-1)Dryweightofthemycelia(mm·d-1)菌丝长势Myceliumgrowthvigor菌丝色泽Myceliumcolour边缘整齐度Shapeofmargin淀粉Starch1.14±0.18a+++洁白White整齐Regular乳糖Lactose1.07±0.13a+++乳白milkWhite不规则Irregular葡萄糖Glucose1.04±0.13a+++乳白milkWhite整齐Regular麦芽糖Maltose1.03±0.09a++浅白White不规则Irregular果糖Fructose0.72±0.04b+浅白White不规则Irregular蔗糖Sucrose0.70±0.02b++乳白milkWhite整齐Regular甘露醇Mannitol0.65±0.01b++洁白Whiteness整齐Regular对照CK0.29±0.02c+浅白White不规则Irregular图3不同碳源对绣球菌菌丝体生长影响Fig.3TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa3.不同氮源对绣球菌菌丝体培养特性的影响表2不同氮源对绣球菌菌丝体生长的影响Table2TheeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa注：“+”表示菌丝稀疏、纤弱，“++”表示菌丝密、长势壮，“+++”表示菌丝浓密、粗壮。小写英文字母表示P<0.05水平上的差异显著性。数据为5个重复的平均值±SE。氮源NitrogenSources日均长速（mm·d-1）Averagedayrowthrate(mm·d-1)菌丝长势MyceliumGrowthvigor菌丝色泽Myceliumcolour边缘整齐度Shapeofmargin酵母膏Microzyme2.03±0.82a+++洁白Whiteness整齐Regular蛋白胨Peptone1.75±0.17ab+++洁白Whiteness整齐Regular硫酸铵(NH4)2SO41.71±0.13ab++浅白White整齐Regular黄豆粉Soybeanmeai1.65±0.11b++乳白MilkWhite不规则Irregular氯化铵NH4Cl1.57±0.17b++乳白MilkWhite整齐Regular麦麸Bran1.53±0.09b++浅白White不规则Irregular硝酸钾KNO31.52±0.10b+浅白White不规则Irregular对照CK1.15±0.05c+浅白White不规则Irregular图4不同氮源对绣球菌菌丝体生长的影响Fig.4TheeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa表3不同无机盐对绣球菌菌丝体生长的影响Table3TheeffectsofdifferentInorganiconthegrowthofmyceliumofSparassiacrispa4.不同无机盐对绣球菌菌丝体培养特性的影响注：“+”表示菌丝稀疏、纤弱，“++”表示菌丝密、长势壮，“+++”表示菌丝浓密、粗壮。小写英文字母表示P<0.05水平上的差异显著性。数据为5个重复的平均值±SE。无机盐inorganic日均长速(mm·d-1)Averagedayrowthrate(mm·d-1)菌丝长势MyceliumGrowthvigor菌丝色泽Myceliumcolour边缘整齐度Shapeofmargin硫酸钙CaSO41.75±0.09a+++洁白Whiteness整齐Regular硫酸镁MgSO41.53±0.11ab++洁白Whiteness整齐Regular硫酸锌ZnSO41.47±0.17ab+++乳白MilkWhite整齐Regular硫酸锰MnSO41.37±0.15b++乳白MilkWhite不规则Irregular对照CK1.01±0.02c+浅白White不规则Irregular硫酸铜CuSO40.00±0.00d–––图5不同无机盐对绣球菌菌丝体生长的影响Fig.5TheeffectsofdifferentInorganiconth