新版CNAS对临床基因扩增分析前的要求要素

新版CNAS对临床基因扩增分析前的要求要素分析前阶段定义CNAS-CL02定义（ISO15189同等引用）按时间顺序自医生申请至分析检验启动的过程，包括检验申请、患者准备和识别、原始样品采集、运送和实验室内传递等。（检验前过程/分析前阶段）检验申请患者准备

和识别原始样品采集原始样品运送实验室内传递全面质量控制分子诊断分析前质量控制特点环节众多包括检验申请、患者准备、标本采集、标本运送、标本接收及处理、保存等参与人员复杂包括医生、患者、护士、标本运送人员以及检验技师等难以标准化不同医院、同一医院不同科室条件不同，人员熟练程度不一致，难以标准化标本类型多、运输及保存条件复杂分子诊断分析前要求的要素5.1人员5.2设施和环境条件5.3实验室设备、试剂和耗材5.4检验前过程分析前前阶段人员人员资质PCR上岗证（《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》的规定）员工能力评审新员工培训、考核与授权离岗6个月以上的人员培训设施和环境条件实验室原则上分四个分隔开的工作区域实验室各分区应配置固定和移动紫外线灯，标本制备区应配置二级生物安全柜制定实验室温湿度的要求并监测制定实验室用水的要求并定期监测实验室设施与环境条件标准化5分区PCR实验室，各区之间物理分隔、空气单向流动、可适当合并,具体分区，视实验室所开展的项目定，以工作空间够用，不影响报告时间，操作互不干扰，防止污染为基本原则传递仓传递标本和试剂生物安全柜内操作，避免污染环境设施和环境条件基因扩增检验各工作区域应有明确的标记，不同工作区域内的设备、物品不能混用应有足够的、温度适宜的储存空间（如冰箱），用以保存临床样品和试剂，设置目标温度和允许范围，并记录。应有温度失控时的处理措施，并记录。

冷链系统面临风险冷链停止工作，温度快速升高，导致试剂失效，样本损坏突然停电工作制冷压缩机故障无人值守，非工作时间很难快速发现故障试剂库标本库生物样本库软件来解决！冷链监控系统通过终端采集的实时数据，设定报警范围，选择报警方式（短信或邮件），选择接收报警信息的人员系统终端采集到报警数据时，自动向相关人员发出报警信息，并提醒工作人员及时处理智能化监控，实时处理！实验室设备、试剂及耗材从事RNA的检测，应配备高速冷冻离心机应按国家法规要求对强检设备进行检定（PCR仪、加样器、温度计和恒温设备等）应对试剂和耗材进行合格性验收，故障后修复的设备应对其性能进行验证案例：HPV基因分型试剂验证不合格试剂失效，Globin值普遍在200左右原因分析：试剂运输途中荧光染料失效（SA-PE），导致Globin值偏低采取措施：新批（货）次试剂与老批（货）次试剂比对CNAS-CL02:2012检验前过程要素5.4.1总则5.4.2提供给患者和用户的信息5.4.3申请单信息5.4.4原始样品采集和处理5.4.5样品运送5.4.6样品接收5.4.7检验前处理、准备和储存质量控制关键点实验室应制定检验前活动的文件化程序和信息，以保证检验结果的有效性患者知情同意要求（例如：需要委托检验时，同意向相关医疗专家公开临床信息和家族史）与患者和申请项目相关的临床资料，用于检验操作和解释检验结果目的总则科室《原是样品采集和运送管理程序》《标本核收、处理和储存程序》《原始样品采集手册》专业组《实验室标本接收与处理程序》

案例：原始样品采集手册微创产前染色体非整倍体（T21/T18/T13）检测知情同意书案例：2015年10月，一例无创产筛多条染色体数量信号异常，而B超未提示任何异常，遂于孕妇沟通结果，孕妇孕前1月有异体输血病史乳腺癌风险评估相关基因高通量测序申请单申请单——一笔业务患者基本信息申请项目申请医生信息流转流程记录采集确认标本转运标本接收……CNAS-CL02:2012检验前过程要素5.4.1总则5.4.2提供给患者和用户的信息5.4.3申请单信息5.4.4原始样品采集和处理5.4.5样品运送5.4.6样品接收5.4.7检验前处理、准备和储存质量控制关键点正确选择原始样本类型考虑检测目的、原始样本稳定性及影响因素正确采集标本考虑采集原是样品对检测的结果的影响正确运送标本和保存考虑运送过程中原是样品的稳定性、生物安全等因素样品接收初步判断样品是否适合检验，信息是否齐全标本类型适合的检测项目全血/血浆/血清HBV、HCV、CMV等血液病毒定量、定型、突变检测，血流感染细菌/真菌等鼻咽拭子H7N9、H5N1等呼吸道病毒检测女性阴道拭子NG、UU、CT、HPV基因分型乳汁CMV、HBV、HCV等脑脊液HSV、CMV、EBV、VZV感染性疾病分子诊断标本类型选择遗传病分子诊断标本类型选择标本类型适合的检测项目采集容器/量全血遗传病诊断，微创产前筛查紫头管/2-3ml羊水产前遗传病诊断无菌容器/最少10ml/双份绒毛膜产前遗传病诊断无菌容器/15mg以上肿瘤个体化医疗标本类型选择标本类型适合的检测项目血液乳腺癌基因（CYP2D6，BRCA1/2），血液系统疾病(JAK2)，嘌呤类化疗药物等骨髓血液系统疾病（融合基因筛查）石蜡组织切片/新鲜组织1、铂类/紫杉类/氟类/嘌呤类化疗药物，吉西他滨个体化用药；2、结肠癌(KRAS/BRAF)、非小细胞肺癌（EGFR/EML4-ALK）、乳腺癌（PI3KCA/HER2）、胃间质瘤（KIT/PDGFRA）、脑胶质瘤（1p/19q、IDH1/2）脱落细胞（胸腹水、支气管肺泡灌洗液等）结肠癌(KRAS)、非小细胞肺癌(EGFR)等甲状腺癌(RET)、乳腺癌(BRCA1/2)等口腔黏膜细胞乳腺癌基因（CYP2D6，BRCA1/2）血清Vs.血浆HBV荧光定量检测结果可相差10倍Vs.尽管行业规范文件以及试剂说明书规定，HBV-DNA定量既可以用血清也可以用血浆标本，实验室为减少临床医生和患者对结果的误解，应尽量规定单一标本类型全血、血清、血浆全血/血浆推荐采用EDTA抗凝HIV或HCV等RNA病毒检测的标本需在4h离心分离血浆，含分离胶采血管可原管运送、血浆标本2-8℃可稳定5天，-20℃或-70℃可稳定更长时间实验室应评估反复冻融次数对检测目标的影响全血、血清、血浆DNA检测全血标本提取核酸之前室温可稳定24h，2-8℃可稳定72h，RNA检测的全血标本需加入核酸稳定剂血清应该在干冰上运输，血浆应该在2-8℃条件下运输，并在-20℃以下存放血浆标本保存不应使用自动除霜的冰箱骨髓推荐以EDTA作为抗凝剂（不可使用肝素）DNA分析时核酸提取之前应放置在2-8℃环境下，必须在72h内完成核酸的提取，RNA分析时，骨髓标本中应加入核酸稳定剂、冰上运输至实验室，2-8℃保存应在4h内提取核酸不能按时提取核酸应将标本保存在-20℃条件下，可稳定数月建议冻存前先分离出有核细胞，避免因冻融红细胞裂解释放亚铁血红素抑制PCR新鲜组织以DNA为分析目标冰上运输至实验室DNA在新鲜组织中2-8℃可稳定24h、-20℃可稳定2w、-70℃以下可稳定至少2年实体组织富含内源性核酸酶，处理前需尽快保存于-70℃或更低温度带血的组织冻存之前应用无菌生理盐水充分洗净组织冻存应尽量以液氮或-70℃的低温冻存效果最好不可使用自动除霜冰箱保存新鲜组织对于进行FISH检测的新鲜组织，应包埋于最佳切割温度复合物中，直至检测开始新鲜组织以RNA为分析目标时新鲜组织应以干冰运输至实验室RNA如果不能在1-4h内完成提取必须在-70℃冻存，如无条件保存应尽快完成RNA抽提，保存RNA，-20℃条件下RNA酶仍然有活性所有冷冻过程都应该是快速冷冻标本保存容器必须是无菌、疏水性的塑料容器产前标本超声引导下穿刺采集绒毛膜：洗净后15mg以上（去除母体杂质）羊水：最少10ml推荐同时采集母亲外周血，供实验室排除母体基因组的影响绒毛膜运输必须使用惰性组织培养基或者生理盐水缓冲液培养细胞必须双瓶，且75%融合，对于未达到75%融合的样本，应继续培养，如满足要求应当天处理绒毛膜/羊水细胞样本检测前需通过显微镜评价是否母体污染，应尽量去除，如不能当天处理，必须放置2-8℃保存，次日提取DNA干血片干血片适用于DNA分析，血片不应放置在密封的塑料袋中，湿气会是血片长菌，如果放置塑料袋或容器中，应配备足够的干燥剂和指示剂不同血片之间应用玻璃纸或隔开以避免交叉污染，可室温保存和运输，可稳定至少19个月其它标本支气管肺泡盥洗液，室温运输，稳定24h、2-8℃稳定72h，更长时间保存需放置-20℃或-70℃、用于结核分枝杆菌检测的标本冻存之前需经过消化去除污染男性尿道标本应使用聚酯拭子标本采集女性子宫颈标本或者尿道标本可以聚酯拭子或者人造丝拭子、运输需采用转运培养基HPV检测标本的采集和转运应按照试剂生产商的要求进行口腔黏膜细胞石蜡组织切片脱落细胞其它标本脱落细胞：胸水，无菌容器40-50ml；细