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文档简介

实验六大肠杆菌菌浓的测定及发酵罐实验的了解目的要求学习比浊法测量细菌数量的方法；学习空气浴摇床的使用方法；学习分光光度计和离心机的使用方法；掌握菌浓和菌体干重关系曲线的测定方法；了解通用发酵罐的基本结构。了解发酵罐实验的一般流程及注意事项。微生物生长曲线的测定比浊法干重法菌落计数法血球计数板计数法…菌浓OD600与菌干重的对应关系将大肠杆菌用LB培养基进行培养，在快速生长中期取样，分别用去离子水（新鲜LB培养基）稀释至不同浓度，分别测定OD600值。同时取10mL菌液，8000rpm离心5min后，弃菌液，并用无菌水重悬洗涤、离心2次，80℃下烘干至恒重后，测得干重。菌浓与OD600的对应关系如下图所示。经数据拟合，线性良好。大肠杆菌菌浓OD600与菌干重的关系曲线编号样品浓度（g/L）OD600离心管空重（g）离心管+菌重量（g）实验材料菌种：

大肠杆菌。（老师提前准备菌种和用于菌体干重测定的菌液）仪器和其它物品：722型分光光度计，空气浴振荡摇床，离心机，比色皿，试管，移液器、枪头、离心管等。上次灭菌的肉膏蛋白胨液体培养基。发酵罐发酵培养基发酵菌种火圈…实验内容分配每4人一组每组建立一个菌浓和OD600关系曲线。分光光度计的实验空白对照吸光度和透光度吸光度值的适用范围离心机的使用离心管平衡!离心效果与转速、时间的关系【实验内容】1.离心管称重将一干净15ml离心管，用分析天平准确称重并记录。2.菌液离心将老师准备好的大肠杆菌摇瓶，准确吸取菌液10ml加至已称重的离心管内(取液前将培养液振荡，使细胞均匀分布)。与另一加水的相同离心管进行配平。8000rpm离心5min，弃去上清，加去10ml离子水重悬菌体，离心。再重复上述洗涤操作1次。弃去水溶液，将带有菌体的离心管在80℃烘干至恒重。准确称重并记录。【实验内容】3.菌液稀释将老师准备好的大肠杆菌摇瓶，吸取一定体积的菌液至试管中，在不同试管中按不同比例进行稀释。（至少5个水平）4.测定吸光度用未接种的肉膏蛋白胨液体培养基作空白对照，选用600nm波长进行光电比浊测定。最好使其光密度值在0.1~0.7之内(测定OD值前，将待测定的样品液振荡，使细胞均匀分布)。做一个以去离子水稀释的对比试验（以去离子水做空白对照），看肉膏蛋白胨培养基对OD600吸光度的影响。通用发酵罐的基本结构在你所见到的实验室发酵罐上是否找到对应功能的部件？发酵罐实物图控制主机罐体通气系统空压机、通气管、流量计…搅拌系统电机、搅拌桨、挡板…控温系统升温、降温传感器pH、温度、溶氧、泡沫…补料系统消泡系统取样口、接种口发酵实验的一般操作过程准备菌种（大肠杆菌）准备培养基校准电极（pH、溶氧…）发酵罐（含培养基）灭菌接种发酵及取样分析（~24h）下罐发酵取样记录表格标号发酵时间(h)取样体积(ml)稀释倍数OD600菌浓

(g/l)实验报告内容OD600与菌体干重的关系曲线画出实验室发酵罐的示意图（包括主机、罐体、通气系统、搅拌系统、控温系统、传感器等）思考题除了比浊法，还有其他什么常用

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