动物细胞培养和核移植技术上课用

动物细胞工程生活联系：

烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，所以需要用培养的人细胞构建人造皮肤最基础的是

——动物细胞培养技术动物细胞工程常用的技术：动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合单克隆抗体等1、什么叫动物细胞培养？2、动物细胞培养的原理是什么？从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。细胞增殖（有丝分裂）一、动物细胞培养概念及原理过程是如何进行的?放入二氧化碳培养箱中培养动物细胞培养过程示意图

结合问题，阅读书本，六人一组，讨论动物细胞培养的流程图。（5min)学习活动：结合问题思考流程1、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞呢？2、胰蛋白酶的作用是什么？由此可说明细胞间的物质主要是什么成分？3、培养瓶或培养皿的内表面为何要光滑、无毒？分散成单个细胞易培养，营养容易供应，代谢废物容易排出；也可使细胞水平的相关技术得以实现。水解细胞间的物质，说明细胞间的物质主要是蛋白质。易于细胞贴附放入二氧化碳培养箱中培养动物细胞培养过程细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快贴附在瓶壁上。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖二、动物细胞培养相关概念原代培养：通常将直接从动物体内取出的动物组织消化后的初次培养称为原代培养。传代培养：原代培养的细胞出现接触抑制后，贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞增殖。这样即为传代培养。二、动物细胞培养相关概念细胞株：从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，部分可以传到40-50代，其遗传物质没有发生变化。这部分细胞成为细胞株。细胞系：传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限制的传代下去。这部分细胞称为细胞系。二、动物细胞培养相关概念动物细胞培养过程总结动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加培养液遗传物质未改变遗传物质已改变1、选用组织时，一般用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做培养材料，而不用老龄动物的因为幼龄组织或器官上的细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。老龄动物的细胞则相反。特别提醒：2、胰蛋白酶处理组织时要注意时间，

不能够用胃蛋白酶代替吗

控制好消化时间，太长会消化细胞膜上的蛋白质因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近.特别提醒：3、动物细胞培养最终不能培养成新个体动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体特别提醒：无菌、无毒全部的营养物质适宜的温度和PH值必要的气体条件3、动物细胞培养的条件动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和PH

36.5左右,7.2-7.44、气体环境：

O2

和

CO2（95%空气和5%CO2）补充合成培养基缺乏的营养物质维持培养液中的PH值细胞代谢必需①生物制品的生产②用于基因工程③用于检测有毒物质④细胞的生理、病理、药理研究4、动物细胞培养技术的应用1．动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是A.动物细胞培养B.动物细胞融合C.单克隆抗体D.胚胎核移植

练一练~~~Let'stry!2．贴壁细胞的分裂方式具体是A.无丝分裂B.有丝分裂C.减数分裂D.增殖获得细胞细胞的全能性植物体培养结果或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较细胞群体3．关于动物细胞培养的叙述，不正确的是

A.动物细胞培养前要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散开来B.通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养C.动物细胞培养只能传50代左右，所培育的细胞全部衰老死亡D.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织

练一练~~~Let'stry!

根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达?

再想一想利用动物体细胞核移植技术理论基础：动物的细胞核具有全能性二、动物体细胞核移植技术

1、概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。

用核移植的方法得到的动物称克隆动物二、动物体细胞核移植技术2、核移植的种类胚胎细胞核移植体细胞核移植（易）（难）学习活动三：思考探究1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为30.8t，创造了世界奶牛产奶量的最高记录。目前世界各国高产牛奶场的奶牛，平均每年产量为十几吨，而我国平均水平仅有3－4吨。

你能想办法繁殖卢辛达的后代，使年产奶量为30.8t吗？供体细胞培养（MⅡ卵母细胞）减数第二次分裂中期去核的卵母细胞供体细胞注入去核卵母细胞激活受体细胞，完成分裂、发育胚胎移植代孕牛子宫克隆牛3、过程：供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质）去核无核卵母细胞注入细胞融合重组细胞构建重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛归纳:1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植2.取卵细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作,它发育可直接表达性状3.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状核移植过程①加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育②保护濒危物种，增加存活数量③克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白④可以作为异种移植的供体4、应用前景：⑤可以用于组织器官的移植5、存在问题：①成功率低②克隆动物存在健康问题③克隆动物食品的安全性问题存有争议从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙的去核卵母细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再将胚胎移到另一只母羊丙的子宫内，出生的小羊大多数性状

A.难以预测 B.像甲C.像乙D.像丙

练一练~~~Let'stry!2.下列有关克隆的叙述，不正确的是

A.生物体通过体细胞进行的无性繁殖B.将某种瘤细胞体外培养繁殖成大量细胞C.扦插和嫁接实质上也是克隆

D.将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA中练一练~~~Let'stry!1、动物细胞培养的过程：

幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞加培养液细胞悬液10代细胞原代培养50代细胞传代培养无限传代遗传物质未改变遗传物质已改变1、动物细胞培养的过程：问题1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？３、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？没有是成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理胰蛋白酶水解蛋白质细胞间的成份是蛋白质(胶原蛋白等)思考题６、细胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？８、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？10、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？蛋白质和磷脂能注意时间的控制不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛11、贴附性细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？13、如果此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？细胞株和细胞系通常是培养多少代的细胞?易于培养细胞贴壁，进行生长增殖

当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。

将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。这样的过程叫做传代培养思考题14、如何理解原代培养和传代培养？15、传代培养的细胞能一直传代下去吗？16、有些为何能一直传下去吗？动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？17、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？用于植皮的细胞培养应该不多于多少代？

上述过程中，在第一培养瓶中培养就