分析方法验证

2023/2/4李宏业136011192401分析方法验证

主讲人：李宏业欧美GMP认证高级咨询师北京宏汇莱科技有限公司总经理天津大学制药工程硕士班GMP课程专职讲师国家食品药品监督管理局高级研修学院培训讲师

重点议题法规要求验证目的检验项目和验证内容分析方法确认分析方法再验证2023/2/4李宏业136011192402分析方法的法规要求第十二条质量控制的基本要求：（四）检验方法应当经过验证或确认；2023/2/4李宏业136011192403分析方法的法规要求第二百二十三条物料和不同生产阶段产品的检验应当至少符合以下要求：（二）符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证：1.采用新的检验方法；2.检验方法需变更的；3.采用《中华人民共和国药典》及其他法定标准未收载的检验方法；4.法规规定的其他需要验证的检验方法。2023/2/4李宏业136011192404分析方法的法规要求（三）对不需要进行验证的检验方法，企业应当对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠；2023/2/4李宏业1360111924052023/2/46分析方法的法规要求药典或官方标准收载的方法－不需完整验证－需验证方法的适用性（确认）自研方法或对官方标准进行了大幅调整－需完整验证验证的目的证明采用的方法适合于相应的检测要求。2023/2/4李宏业1360111924072023/2/4lihongye8检验项目和验证内容

注：—表示通常不需论证的项目；+表示通常需论证的项目；

①

假如已论证重现性，可不需再论证中间精密度；

②缺乏专属性的分析方法，应由其他分析方法来作补充；

③有些情况不需要。

2023/2/4lihongye9术语（1）准确度－－是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（％）表示。精密度－－是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度，一般用偏差，标准偏差或相对标准偏差表示。2023/2/4lihongye10术语（2）专属性－－是指在其他成分（如杂质、降解产物，辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。如方法不够专属，应采用多个方法补充。检测限－－是指试样中被测物能被检测出的最低量。定量限－－是指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测量结果应具一定准确度和精密度。2023/2/4lihongye11术语（3）线性－－是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。范围－－是指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。耐用性－－是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法可用于提供常规检验依据。2023/2/412分析方法的验证项目典型分析方法验证的项目：－专属性specificity

－精密度precision－准确度accuracy－检测限detectionlimit

－定量限quantitationlimit－线性linearity－范围range－耐用性robustness

2023/2/413分析方法的验证-专属性专属性－定义：指一种方法在有可能的干扰物质（如杂质、降解产物和基质）存在时，能够准确无误地评估被分析物的能力鉴别:确保可以鉴别被分析物纯度检查：确保所有的分析过程能够为杂质的含量提供准确的数据，如相关物质检查、重金属限度检查、有机挥发性杂质检查等含量测定：提供准确的检测结果以保证含量样品中被分析物的含量或效价值准确无误2023/2/414分析方法的验证-专属性专属性－方法定性分析（鉴别）：样品阳性结果＋空白阴性结果＋结构相似物质的阴性结果；杂质检查（对照品可得）：将可能的杂质对照品加入样品中；杂质检查（对照品不可得）：－用另外一种官方的标准或经验证的方法对样品和经降解的样品分析，比较两种方法得到的杂质概况2023/2/415分析方法的验证-专属性杂质检查（对照品不可得）－使用其他技术对峰纯度进行检查，如二极管阵列检测器、MS等含量测定：

被分析物与其他干扰峰完成分离。向样品中加入一定量的干扰物，含量测定的结果不受干扰；检查主峰的纯度分析方法的验证-专属性鉴别试验：本品的红外吸收图谱应与对照品的图谱一致。采用与被测物结构类似的化合物以及被测物分别进行红外测试。被测物为正反应。被测物结构类似的化合物为负反应。被测物结构类似的化合物可选用中间体、副产物或降解产物等。2023/2/4李宏业1360111924016分析方法的验证-专属性鉴别：化学滴定的颜色反应；采用与被测物结构类似的化合物以及被测物分别进行鉴别试验。被测物为正反应。被测物结构类似的化合物为负反应。被测物结构类似的化合物可选用中间体、副产物或降解产物等。2023/2/4李宏业13601119240172023/2/418分析方法的验证-精密度精密度precision－定义：对均一样品重复取样检测每个检测结果间的接近程度，RSD%,CV%

－重复性repeatability：短时间内同一分析人员使用同一仪器－中间精密度intermediateprecision:在同一实验室内的变化，如不同分析时间、不同分析人员、不同分析仪器－重现性reproducibility:在不同实验室内重复

2023/2/419分析方法的验证-精密度精密度－方法

－100％浓度≥6次－3浓度×3次2023/2/420分析方法的验证-准确度准确度－定义：方法的检测结果与真实值的接近程度。－方法：

－原料药：分析已知含量的对照品；第二种确定的方法分析，结果比较－制剂：加样回收；第二种确定的方法分析，结果比较－应在方法的范围内－计算回收率：3浓度×3次

2023/2/421分析方法的验证-检测限检测限detectionlimit－定义：在声明的实验条件下所能检测到的被分析物的最小量。限度检查的指标；表示为在样品中的浓度％,ppm－方法：－检测已知浓度的样品(对照品)－杂质的DL<0.05%－信噪比2:1/3:12023/2/422分析方法的验证-定量限定量限quantitationlimit－定义：在声明的实验条件下被分析物可被定量分析并能满足合格的精密度和准确度的最小值。微量物质的定量分析：有关物质定量分析，有机挥发性物质的定量分析。％，ppm－方法：－已知浓度样品（对照品）－相关物质<0.05％－证明精密度和准确度－信噪比10:12023/2/423分析方法的验证-线性与范围线性和范围linearityandrange－定义：－线性：在给定的范围内使检测结果直接或通过数学转换后与被分析物在样品中的浓度成比例的能力－范围：在适当的精密度、准确度和线性基础上检测到的被分析物的最低水平到最高水平区间2023/2/424分析方法的验证-线性与范围－方法：一定范围内的不同浓度点进样，绘制响应值（y）与浓度(x)之间的回归线，计算回归方程，相关系数（r,r2）

－主成分含量测定：80％－120％检测浓度－杂质含量测定：定量限（50％）－120％标准－装量差异：70％－130％检测值－溶出实验：±20％规定范围分析方法的验证-线性与范围2023/2/4李宏业1360111924025要提供如下数据：回归方程y＝a+bx回归曲线相关系数2023/2/426分析方法的验证-耐用性耐用性robustness－定义：分析方法的某些参数发生微小变化时方法抗干扰的能力，表示在正常使用时的可靠性－方法：刻意改变参数，考察结果的变化流动相的pH值、流动相的组成（极性的变化）、不同供应商柱子、柱温、流速等分析方法的验证-耐用性液相：评估柱温、流速、色谱柱、缓冲盐pH、有机相比例、流动相比例、溶液放置时间对检测结果的影响气相：评估柱温、流速、色谱柱、溶液放置时间对检测结果的影响2023/2/4李宏业13601119240272023/2/428分析方法的验证-系统适用性系统适用性systemsuitability－耐用性验证的结果－影响参数在方法中列出－在日常样品分析前、过程中进行考察－色谱方法中尤为重要分析方法的验证-系统适用性液相和气相可以不同；液相：任何两个组分之间的分离度R不小于1.5；重复进样(6次)的相对标准偏差RSD不大于2.0%气相：任何两个组分之间的分离度R不小于3；重复进样(6次)的相对标准偏差RSD不大于15%。2023/2/4李宏业13601119240292023/2/430分析方法的验证USP对不同方法验证项目的要求*根据不同的方法特点也可能需要

“＋”需要“－”不需要验证项目I类II类III类IV类定量限度检查准确度++**-精密度++-+-专属性+++*+检测限--+*-定量限-+-*-线性++-*-范围++**-2023/2/431分析方法的验证I类方法：制剂中原料药或活性成分（包括防腐剂）的定量分析方法；II类方法：原料药中杂质或制剂中降解化合物的分析方法；包括定量方法和限度检查；III类方法：药物性能特征分析方法：溶出，药物释放IV类方法：鉴别实验分析方法确认适用于药典方法和其他已验证的法定标准。因为药典方法和其他法定标准被认为是验证过的分析方法，不需要验证，但需要通过方法确认来证明方法在该实验室条件下的适应性。2023/2/4李宏业1360111924032分析方法确认对于方法确认，通常采用两种方式：一、由两名检验人员分别独立对同一批产品进行检验（如可能使用不同的仪器）比较两人的检测结果来证明方法在本实验室（人员，分析仪器，试剂）的适用性；二、根据验证目的和评估结果选择相关项目进行确认：（具体见下表）2023/2/4李宏业1360111924033分析方法确认2023/2/4李宏业1360111924034分析方法再验证在某些情况下，如原料药合成工艺改变、制剂处方改变、分析方法发生部分改变等，均有必要对分析方法再次进行部分或完整的再验证，以保证分析方法可靠。2023/2/4李宏业1360111924035分析方法再验证当原料药合成工艺发生改变时，可能引入新的杂质，杂质检查方法和含量测定方法的专属性就需要再进行验证，以证明有关物质检查方法能够检测新引入的杂质，且新引入的杂质对主成份的含量测定应无干扰。2023/2/4李宏业1360111924036分析方法再验证当制剂的处方组成改变、辅料变更时，可能会影响鉴别的专属性、溶出度和含量测定的准确度，因此需要对鉴别、含量测定方法再验证。当原料药产地来源发生变更时，可能会影响杂质检查和含量测定的专属性和准确度，因此需要对杂质检查方法和含量测定方法进行再验证。2023/2/4李宏业1360111924037分析方法再验证再验证原则：根据改变的程度进行相应的再验证。当这种改变到达一定程度时，则需要完整的验证。如分析方法完全改变时，则应视为新方法并需要完整的验