实验动物使用操作规程

四、动物试验及设施设备操作规程1、屏障设施使用操作规程人员进出试验人员进入动物试验室，更换各自试验室的拖鞋。的拖鞋拿到内侧门边摆放整齐，人员即可离开，离开前将拖鞋在消毒液中浸泡5开一更、二更紫外灯消毒。每次进出动物试验室须填写记录表。物品进出放，不能超过两周。夏季留意防霉防潮。垫料经双扉高压蒸汽灭菌柜灭菌后传入内储存室。泡后，再喷雾消毒三遍方可进入。传递窗进入饲养室预备间。20—30待洗刷物品经内储存室传入消毒室。试验完毕后，试验用品通过内储存室传递窗传出。动物治理动物进入：动物引进应先放入隔离检疫室，待隔离检疫合格后移入饲养室。10min。翻开运输箱，取出动物置于隔离检疫室饲养盒内。检疫合格后进入试验区。饮水：每天供给灭菌水。留意检查瓶塞是否漏水或堵塞。压过度的饲料，准时移出，不再用于饲喂。更换垫料：每周一、四，更换垫料。周一用消毒液清洗饲养盒、盖。将饲养10集中送相关单位做无害化处理。每次试验完毕后，动物尸体及试验废弃物处理时须填写记录。物品消毒饲养室预备间。方法：将分装好的饲料、垫料、水等物品，由外门放入真空灭菌器内，关好直接移入饲养室，关好内门。①笼具架3132℃42不能高压蒸汽灭菌的笼具架擦拭干净、消毒液外表消毒三遍后进入。②饲养盒和垫料先去除盒内的污物，用水将盒的内外壁冲洗干净，晾干。3，132℃4min，2min。7d。③垫料垫料应选择无毒性、无异味、无油脂、吸湿性好、粉尘少的材料。2-3cm6子不装垫料。置于高压蒸汽灭菌器灭菌室中。关闭高压锅门，灭菌参数为脉动3次、132℃灭菌5min、枯燥3min。灭菌后的垫料贴上标签，标明灭菌日期。存放7d。④饮水瓶3132℃3min2min。7d。⑤饮水20min、125℃30min。7d。⑥饲料首先检查饲料是否腐败、变质，确认质量合格后，将饲料分装成小袋，随机袋与袋之间要有充分的空隙。关闭灭菌器门，灭菌参数为脉动3次、132℃灭菌5min7d。⑦无菌水的使用仅限于饲养室的消毒用水。⑧衣服、毛巾用中性洗涤剂洗净衣服、毛巾，清水冲洗干净，晾干，叠整齐。3，132℃4min，4min。检查指示卡颜色，确认灭菌效果到达要求，置于其次更衣室衣柜中。⑨购置的物品区域，进展安装、消毒。处进展第三次喷雾消毒。其它物品进入均按相应操作规程。⑩物品的定期消毒0.5%百毒杀消毒液擦拭。b.手消毒液定期更换。IVC传递窗每次使用后用消毒液擦拭，紫外灯照耀15min。饮水瓶、饲养盒每周高压灭菌1次，饲养盒盖每月高压灭菌一次。清洁卫生①环境清洁消毒周四用1％甲酚皂消毒液或0.1％洁尔灭溶液擦拭或0.5％过氧乙酸喷雾消毒每周至少消毒两次。紫外灯每天早晚开启两次，每次15分，不能与日光灯同时开启。②试验用仪器设备的清洗消毒试验用的器和设备使用完毕后，用绸布擦拭后再用棉球蘸取75％酒精擦拭一次。挂水珠。试验中的烧杯、锥形瓶、量杯等一般的玻璃器皿在试验完毕后，用2％洗1％2～342～3③清洁液的配制(220ml1000(1％)303000ml，做为洗涤用。洗液的配制：称取重铬酸钾801001000ml导致爆炸事故。④消毒液的配制20ml10001％的溶液，作为室内喷雾消毒用。40m12023m1，0.1％的溶液，作为器械等浸泡消毒用。24890.2%的消毒液。75％95％78.95m121.05m1100ml⑤每次洗刷消毒须填写记录表。⑥环境掌握试验期间每天记录环境温湿度状况。屏障环境要求：温度20℃～26℃范围；相对湿度40％～70％。14ppm，硫化氢含量应低于0.0001％。准时更换过滤介质，初效每周更换二次，中效每月更换一次。⑦设备治理转。水管、暖气管道应每周检查一次，觉察问题准时解决。⑧操作失误及补救措施饲料高压过度，发黑炭化，或有发霉时，应废弃不用。⑨工作日程安排时间上午下午周一消毒笼具、更换垫料加水加料周二更换垫料、消毒加水加料周三高压消毒加水加料周四消毒笼具、更换垫料加水加料周五更换垫料、消毒加水加料周六高压消毒加水加料周日高压消毒加水加料2过滤层清洗要求①初效箱内初效滤层清洗要求：必需在系统待机状态时更换初效3天一次，同时清理箱内尘土。主要是依据实际状况，见脏时准时取下冲洗干净后即可装上。中效过滤袋更换要求1动物试验室内各高效过滤器更换要求33系统开启操作步骤：冬天：依次开启总电源、开水泵、开启风机、开启电加湿。缩机。系统关闭操作步骤：4、一般设施日常维护规程环境指标的掌握与监测。兔饲养室、兔试验室为开放式，定期消毒。测记录。各房间均安装有紫外灯，用于环境消毒。动物尸体装袋放专用冰柜，由石家庄市医疗废弃物处置中心负责燃烧。5操作程序灭菌前预备：0.15～0.30MPa1/3～2/3③翻开蒸汽锅电源进展预热；贴于器壁和门板，并放入化学指示卡，填写脉动真空灭菌器使用登记表；⑤检查密封圈、前封板和门板有无杂质和损坏，用干净的棉布进展搽洗；灭菌操作：0.4MPa正确，启动运行程序；有特别，准时处理，防止意外事故发生；③做好灭菌效果的监测，记录存档，便于追踪调查；出物品；⑤灭菌物品从灭菌器中取出后，存放在指定位置，防止二次污染；灭菌后工作：①翻开前门，关闭总电源，切断设备掌握电源和空气压缩机电源；②关闭供水阀门和冷却水阀门；维护与治理①脉动真空灭菌器由动物室专人负责治理；②蒸汽锅进水压力，水位必需到达规定值时才能翻开蒸汽锅炉电源；用具，以免烫伤；⑤当化学指示卡指示灭菌不合格时，应从灭菌处理；⑥非经培训过的工作人员，其他人不得乱碰和操作灭菌设备；人员联系进展修理，不得擅自拆卸进展修理，并做好相应记录。6、热原测温仪操作规程热原探头标定仪启动热原仪标定程序，进入恒温槽温度读数状态。四周插入测温探头。37℃〔37.2℃〕即是热原测温仪标定程序的第一个温度读数。④温度预置开关右旋一档〔38℃，恒温槽加热，当指示灯再次闪耀时〔37.9℃，温度计读数即是热原测温仪标定程序的其次个温度读数。置可由低到高，也可由高到低。补偿凹凸的旋钮。WRY-2023①在启动计算机后，翻开微机热原测温仪电源；②点击Windows桌面上的pyrogen2023图表或[开头/程序/热原测定程序2023]菜单项，启动热原测定程序；〔必需对更换探头标定后再测温〕或临时拔掉不窗口；用的家兔体重输入表格中，按[返回]按钮回到主窗口。的药品的名称、批号、剂量、规格、初试升温总和〔对于初试请输入0，对于复3〕输入表格中，按[关闭]按钮返回到主窗口。⑥点击工作栏上温度测定按钮，翻开测温窗口，按[预览]后半小时，按[开头点击[完毕]按钮，将终止测温。移入选上兔表中；通过点击[排序]按钮，客队选上图及落选图表中的家兔排序；15时使用。注射完毕后输入室温，按[连续]按钮，将翻开测温窗口。30分钟记录一次体温，共6210口。⑨点击工具栏上记录按钮，翻开查询、追加、打印记录窗口，在窗口中可通过输入查询、打印条件〔试验日期、药品名称、批号可选任一项，假设有试验日〕然后输入栏被清空，这时可输入试验数据，再按[追加]按钮将输入的试验结果保存，按[关闭]按钮回到主窗口。7试验设计有重复性、牢靠性、适用性和可控性，另外还要经济、宜行。动物及环境①环境的预备。在引入试验动物之前必需严格掌握试验动物饲养室及试验及通风，防止途中试验动物被污染或窒息死亡。料要满足动物的各个时期或不同微生物等级动物的不同需要。③动物的预备。在购入或领取动物时，应留意向供给部门索取以下资料：合格证书；e.饲育单位负责人签名。8解剖试验则必需无痛处死后，固定于蜡盘再进展。大鼠：轻轻抓住大鼠尾巴提起，置于试验台上，用玻璃钟罩扣住或置作时，试验者应戴上棉纱手套〔有阅历者也可不戴，右手轻轻抓住大鼠的尾巴即可将大鼠固定在左手中，右手进展操作。环握颈部，另一只手托住其臀部，即可轻轻提起、固定。前阻拦它跑动。然后一只手抓住兔的颈部皮毛，将兔提起，用另一只手托其臀部，或用一只手抓住背部皮肤提起来，放在试验台上，即可进展采血、注射等操作。9试验动物给药①注射给药法刺入，把针尖轻轻向左右摇摆，简洁摇摆则说明已刺入皮下，然后注射药物。棉签轻按片刻。肌肉注射：注射时针头要垂直快速刺入肌肉，如无回血现象即可注射。0.5cm，再使针头与皮肤呈45°角方向穿过腹肌刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液、尿液后，缓缓推入药液。静脉注射：小鼠、大鼠的静脉注射：常承受尾静脉注射。操作时，先将动物固定在暴露75％酒精棉球反复擦拭使血管扩张，并可使表皮角质软化，注射量为0.1～0.2ml/10g体重。特别留意。兔的静脉注射：一般承受外耳缘静脉，因其表浅易固定。注射部位指夹住静脉的近心端，拇指绷紧静脉的远心端，无名指及小指垫在下面，右手持注射器，尽量从静脉的远端刺入血管，移动拇指于针头上以固定，放开食、中指，将药液注入，然后拔出针头，用手压迫针眼片刻以止血。②经口给药法口服法：把药物放入饲料或溶于饮水中让动物自动摄取。注射器和特别的灌胃针构成或直接承受灌胃管。0.2～1ml，1～4ml，1～5ml。③其他途径给药方法过动物呼吸道给药。药液经皮肤吸取。脊髓腔内给药：此法主要用于锥管麻醉或抽取脑脊液。脑内给药：此法常用于微生物学动物试验，将病原体等接种于被检动物脑内，然后观看接种后的各种变化。直肠内给药：此方法常用于动物麻醉。关节腔内给药：此法常用于关节炎动物模型的复制。人与动物的用药量换算方法比例进展换算：人用药量 1小鼠、大鼠 25～50豚鼠 15～20按动物体外表积计算的方法：量可以通过体外表积进展换算，公式如下：A＝K×〔W2／3／10000〕A＝体外表积，m2W＝体重，ｇK＝常数：K小鼠、大鼠＝9.1 K豚鼠＝9.8 K人＝10.6试验动物采血①大鼠、小鼠的采血方法5mm，从尾部向尾尖部按摩，血即0.4ml。眼眶后静脉丛采血。左手拇指及食指抓住鼠两耳之间的皮肤使鼠固定，一次可采血0.2～0.3ml，大鼠一次可采血0.5～1.0ml。〕静脉或颈〔股〕动脉采血。将鼠麻醉，剪去一侧颈部外侧被毛，做剪断或用注射器采血即可，股动脉较深需先剥离，再采血。d.皮针的注射器缓缓抽取血液。一般大鼠可取血10ml左右。e.摘眼球采血。此法常用于鼠类大量采血。采血时，用左手固定动物，压血液。②豚鼠采血方法在切口边缘涂上20％的柠檬酸钠溶液，防止血凝，则血可自切口处流出。此法每次可采血0.5ml。背中足静脉采血。固定豚鼠，将其右或左后肢膝关节伸直，脚背消毒，马上出血。心脏采血。用手指触摸，选择心跳最明显的部位，把注射针刺入心脏，③兔的采血方法手指轻弹兔耳，使静脉扩张，用针头刺耳缘静脉末端，或用刀片沿血管方向割破一小切口，血液即流出。本法为兔最常用的采血方法，可屡次重复使用。动脉。用左手固定兔耳，右手持注射器，在中心动脉的末端，沿着与动脉平行的向心方向刺入动脉，即可见血液进入针管。由于兔耳中心动脉简洁痉挛，故抽血前必需让兔耳充分充血，采血时动作要快速。采血所用针头不要太细，一般用6号针头，针刺部位从中心动脉末端开头，不要在近耳根部采血。颈静脉采血。方法同小鼠、大鼠的颈静脉采血。心脏采血。使家兔仰卧，穿刺部位在第三肋间胸骨左缘 头刺入心脏后，持针手可感觉到兔心脏有节律的跳动。此时如还抽不到，以防弄伤兔的心、肺。试验动物的处死物安乐死方法的选择取决于动物的种类与争论的课题。①大鼠和小鼠按住鼠头。将脊髓与脑髓拉断，鼠便马上死亡。断头法。用剪刀在鼠颈部将鼠头剪掉，鼠马上死亡。或用木锤用力击打鼠头部也可致死。亡。药物致死法。吸入肯定量的一氧化碳、乙醚、氯仿等均可使动物致死。②豚鼠、家兔空气栓塞法。向动物静脉内注入肯定量的空气，使之发生栓塞而死。10cm的横切口，把股动、静脉全切断，马上喷出血液。用一块湿纱使股动脉切口保持畅通，动物在3～5min内即可致死。承受此种方法，动物格外安静，对脏器无损伤，对活杀采集病理切片标本是一种较好的方法。10伦理学原则3R”原则，并遵循本国的法律和指导方针。试验动物时，要重视动物的社会性及行为需求。“3R”原则法以削减动物苦痛和担忧。①替代 主要包括用体外培育器官组织细胞等代替试验动物用低等物代替高等动物，用物理或化学方法代替动物试验，或电脑模拟动物试验。②削减 尽可能地削减使用试验动物的数量。③优化 指技术路线和手段的精细设计与选择使动物试验得到良好的结果并削减试验动物的苦痛。依据国家科技部2023年9月30日颁发的“关于善待试验动物的指导性〔国科发财字[2023]398号〕的有关规定执行。11依据中国兽药典2023版〔一部〕附录1141原理本法系指将肯定剂量的供试品溶液注入小鼠体内,在规定时间内观看小鼠死亡状况，判定供试品是否符合规定的一种方法。试验方法尾静脉注射〔5〕供试品溶液应平衡至室温。设备用具电热枯燥箱、鼠盒、时钟、镊子、注射器(1ml)针头(7#、4#)75%〔5〕供试品溶液应平衡至室温。试验动物预备试验用小鼠应安康合格,在试验前及试验观看期内，均应按正常饲养条件饲养,体重在18-22g,将称好体重的小鼠分别平均使用,每批供试品5只,复试时用19-21g的小鼠,每批用10只，做过本试验的小鼠不得重复使用。操作方法① 将各种试验用具及供试品溶液按肯定位置安排在工作台上,鼠盒应标有②将注射器与注射针头配套后,用少量供试品溶液洗涤三次,弃去洗液,取供试品溶液后排注射器内的气泡,将准确调至所需量。③捉小鼠时在其身后捏住尾巴,放入固定器内,将其尾巴露在外,用左手的拇指和中指拉直,食指按在固定器上,使小鼠固定。④用镊子取75%乙醇棉球擦试小鼠尾巴,使静脉扩张及消毒。⑤在尾长近尾尖1/4针尖与尾巴成一适当角度(小于30°)刺入静脉内,平行推入少许供试品溶液。4-5秒钟内匀速注入供试品溶液0.5ml,并记录时间。规定缓慢注射的品种可延长至30秒。如注射部位皮下发白,且推入药0.02ml,应另取小鼠注射。⑦注射完毕拔出针头,随即左手拇指按住注射部位,并轻轻揉压,使血液及溶液不致流出。⑧马上将小鼠放开,将其在固定器内自由活动,以观看即时反响,并作记录,然后取出小白鼠放入标明批号组别的鼠盒内。⑨照上法连续注射其它各鼠,在每次抽取供试品时均须将注射器内的回血用少量供试品溶液洗涤干净。留意事项①注射完毕后拔出针头时,如觉察药液外溢较多时,此小鼠应废弃,另取小鼠依法操作。②试验后,待观看小鼠,喂养方法同试验前。③试验室及饲养室温,一般掌握在20-26℃。非生物制品试验，除另有规定外，全部小鼠在给药后48小时内不得有死亡；非生物制品试验，除另有规定外，全部小鼠在给药后48小时内不得有死亡；如有死亡时，应另取体重19～21g的小鼠10只复试，全部小鼠在48小时内不得有死亡，为符合规定。生物制品试验要求观看7天。观看期内，小鼠应全部健存，且无特别反响，体重19～21g的小鼠10只复试1次，判定标准同前。体重19～21g的小鼠10只复试1次，判定标准同前。12、生物活性试验操作规程依据中国兽药典2023版〔二部〕黄芪多糖注射液生物活性测定原理本法系指将肯定剂量的供试品溶液注入小鼠体内,在规定时间内观看小鼠脾指数的变化状况，判定供试品是否符合规定的一种方法。试验方法腹腔注射〔5〕供试品溶液应平衡至室温。设备用具电热枯燥箱、鼠盒、时钟、镊子、注射器(1ml)针头(7#、4#)75%〔5〕供试品溶液应平衡至室温。试验动物预备试验用小鼠应安康合格,在试验前及试验观看期内，均应按正常饲养条件饲养,体重在18-20g,〔给药组和比照组8～10只。操作方法①将各种试验用具及供试品溶液按肯定位置安排在工作台上,鼠盒应标有供试品批号,日期的标签。②将注射器与注射针头配套后,用少量供试品溶液洗涤三次,弃去洗液,取供试品溶液后排注射器内的气泡,将准确调至所需量。③用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其他粗糙外表上， 前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，将小鼠置于左手掌心，无名指和小指夹其背部皮肤及尾部，即可将小鼠完全固定。⑤给药组每鼠腹腔注射供试品0.5ml，比照组每鼠腹腔注射生理盐水0.5ml，称重，计算平均脾指数。④小鼠腹部用酒精棉球擦拭消毒，然后在左或右侧腹部将针头刺入皮⑤给药组每鼠腹腔注射供试品0.5ml，比照组每鼠腹腔注射生理盐水0.5ml，称重，计算平均脾指数。留意事项①试验后,待观看小鼠,喂养方法同试验前。②试验室及饲养室温,一般掌握在20-26℃。结果判定≥2。脾指数＝脾重〔mg〕/体重〔g〕＝组内脾指数总和/组内动物数13、过敏反响试验操作规程依据 中国兽药典2023版〔一部〕附录1147原理本法系指将肯定剂量的供试品溶液注入豚鼠体内,间隔肯定时否引起动物全身过敏反响。试验方法静脉/腹腔注射设备用具及用具洗涤消毒(1ml)头(7#、4#)、鼠笼、75%乙醇棉球。②用具洗涤消毒热枯燥箱内250℃30分钟即可。试验动物预备试验用豚鼠为清洁级DH豚鼠，体重在250-350g,雌鼠应无孕。做过试验的豚鼠不得重复使用，每批供试品需6只豚鼠。操作方法① 腹腔注射标有供试品批号,日期的标签。将注射器与注射针头配套后,用少量供试品溶液洗涤三次,弃去洗液,取供试品溶液后排尽注射器内的气泡并准确调至所需量。75%乙醇d.连续3次，隔日腹腔注射供试品溶液d.连续3次，隔日腹腔注射供试品溶液0.5ml，进展致敏。每日观看每只动为2314日和第211ml进展激发。观看激发后30分钟内动物有无过敏反响病症。②静脉注射75%轮廓静脉注射，右手持注射器,针尖与耳朵成一适合角度〔小于30度〕刺入静脉内，平行推注少许供试品溶液。马上将注射器内拴平行推入,在4-5秒钟内匀速注入供试品溶液1ml,并记录时间,如注射部位皮下发白,且推入药液阻力很大,表示针头未插入静脉内。假设三次未注进或药液损失大于0.02ml,应另取小豚鼠注射。注射完毕拔出针头,随即左手拇指按住注射部位,并轻轻揉压,使血液及供试品溶液不致流出。,30否合格。3030竖毛、抖动、干呕、连续喷嚏3声、连续咳嗽3声、紫癜和呼吸困难等现象中的2种或2种以上，或消灭二便失禁、步态不稳或倒地、抽搐、休克、死亡现象之一者，判定供试品不符合规定。14依据 中国兽药典2023版〔一部〕附录1142原理本法系指将肯定剂量的供试品溶液注入家兔耳缘静脉内,观看家兔体温变化的状况，以判定供试品是否具有热原。试验方法耳缘静脉注射试验材料及用具天平0.01mg或0.lmg、0.lmglmg、10g电热枯燥箱，250℃以上，受热均匀。恒温水浴热原测温仪或肛门体温计，精度0.1℃家兔固定盒，盒两侧有通气孔。试验用具:注射器、烧杯、三角瓶、大称量瓶、吸管、移液管、外表皿、玻璃棒、广口、直镊、金属制密封器〔、时钟、脱脂棉或细软卫生纸。〔内毒素检查，含细菌内毒素低于0.25EU/ml)、无热原氯化钠〔经250℃30分钟200℃lh或180℃2h。①供试用家兔供试用的家兔应安康合格，体重1.7kg①供试用家兔供试用的家兔应安康合格，体重1.7kg以上〔用于生物制品检查用的家兔体重为1.7～3.0kg〕，雌兔应无孕。a.推测体温前a.推测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精3试品前7日内推测体温，进展选择。b.测量体温时，测温仪探头或肛门温度计插人肛门的深度各兔应一样约6cm1.5min。c.每隔30min186℃38.4～39.4℃)的范围内，0.4℃的家兔，可供3周内试验用。7供试品名、正常体温、温差、结果。③家兔的重复使用>0.6℃的家兔，应休息2周以上，重测温选择后使用。供试品判定为不符合规定的家兔，不再使用。51次。④复试用家兔选择体重相近、体温相对稳定、正常体温温差小，平均值避开使用。试验前的预备要求者不能使用。②用具的除热原清洗干净的玻璃器皿、注射器、针头、直镊等放入金属250℃30min200℃lh以上或1802h以上加热除热原。控温时间应从到达规定温度时开头计时。去除热原未曾开启的密封容器内用具，可供一周