第6章各类化学成分分析1

1第六章

各类化学成分分析2讲授内容第1节生物碱类成分分析第2节黄酮类成分分析第3节三萜皂苷类成分分析第4节醌类成分分析第5节挥发性成分分析第6节木脂素类成分分析第7节其它类型成分分析3第一节生物碱类成分分析概述理化性质鉴别含量测定4一、概述生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合物（如氨基酸、蛋白质和B族维生素等）之外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性。含生物碱成分的常用中药：山豆根、制川乌、马钱子、延胡索、苦参、麻黄、黄连、黄柏、防己等小檗碱麻黄碱乌头碱水苏碱6二、理化性质物理性状溶解性紫外光谱特征显色反应7物理性状液体状的生物碱及个别小分子生物碱有挥发性甚至升华性如：麻黄碱具有挥发性咖啡因具有升华性生物碱通常无色，但有长共轭结构，并有助色团的，可显不同颜色。如：小檗碱黄色8溶解性大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂与酸结合成盐生水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性有差异季胺型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水。9溶解性液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于有机溶剂含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛性碱液10显色反应生物碱在一定pH条件下与一些酸性染料（多为磺酸肽类）生成有色配合物，可被氯仿等有机溶剂定量提出。结构中具有酯键的酯碱，如：乌头碱可与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色11紫外光谱特征结构中具有共轭体系的生物碱均有紫外吸收。结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的pH值有关。12三、鉴别沉淀法薄层色谱法气相色谱法高效液相色谱法一般理化鉴别色谱鉴别131、沉淀反应大多数生物碱在酸性水溶液可与某些试剂生成不溶于水的复盐或分子复合物。酸性aq：KI-I2(棕红↓)；BiI3·KI(橘红～黄↓)；HgI2·2KI(类白↓)；硫氰酸铬铵(雷氏铵盐NH4[Cr(NH3)2(SCN)4](红↓)中性：苦味酸(三硝基苯酚)(黄↓)中药水浸液中蛋白质、多肽和鞣质等成分，也可与生物碱沉淀试剂生成沉淀，需排除干扰，防止出现假阳性结果。季铵盐↓剂142薄层色谱法吸附剂：硅胶、氧化铝展开剂：多用氯仿、苯等低极性溶剂，加入其它溶剂调整展开剂的极性。（由于硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶板上能形成盐，使Rf值很小或拖尾，形成复斑。在硅胶吸附薄层中，常用碱性系统或在碱性环境下展开。）显色剂：改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾试剂后再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更清晰；亦可用碘蒸气、硫酸铈、碘铂酸等。15例：三妙丸中黄柏及小檗碱的鉴别

(苍术、黄柏、牛膝)

取三妙丸粉末0.1g,加乙醚10ml，超声处理15分钟，滤过，弃去乙醚液，残渣加甲醇5ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.1g，同制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液2ml、对照药材溶液与对照品溶液各1ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试剂(12∶6∶3∶3∶1)为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。162纸色谱法可用于生物碱盐或游离碱的鉴别。主要是以水为固定相的正相纸色谱法，分离效果常取决于流动相的性质。BAW系统显色剂：基本和薄层色谱法相同，但含硫酸的试剂不适用。173高效液相色谱法依据：tR条件不同时，可已知品作内标，采用峰面积或峰高加大法优点：快速，灵敏、微量等18四、含量测定生物碱的含量测定方法早期常用酸碱滴定法、沉淀滴定法等经典的化学方法，近年来多采用分光光度法、薄层色谱法及高效液相色谱法等（一）总生物碱的含量测定（二）生物碱类单体成分的含量测定19（一）总生物碱的含量测定直接测定法重量分析法酸碱滴定法离子对萃取比色法酸染料比色法苦味酸盐比色法雷氏盐比色法异羟肟酸铁比色法化学分析法分光光度法本法适用于处方药味较少、内成分较简单的中药制剂20酸碱滴定分析法强碱滴定生物碱盐时，在70％～90％的乙醇介质中终点比在水中明显，因此常将生物碱盐溶于70％～90％乙醇，再用标准碱-乙醇液滴定。若选择的溶剂及指示终点方法合适，也可用非水滴定法进行。21酸碱滴定分析法指示终点方法电位法指示剂水溶液中非水溶液溴酚蓝甲基红溴甲酚蓝酚酞溴酚蓝甲基黄结晶紫净化-中性氧化铝；空白试验22例止喘灵注射液中总生物碱的含量测定—酸碱滴定法处方麻黄洋金花苦杏仁连翘方法精密量取止喘灵注射液10ml，置分液漏斗中，加1mol/L氢氧化钠溶液0.5ml，用三氯甲烷提取4次，（10ml、10ml、5ml、5ml）合并三氯甲烷液，置具塞锥形瓶中，精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）10ml及新沸过的冷水10ml，充分振摇，加茜素黄酸钠指示剂1-2滴，用氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）滴定至淡红色，并将滴定结果用空白实验校正。每1ml硫酸滴定液相当于3.305mg的麻黄碱（C10H15NO）。变色范围：3.7～5.2黄→紫23重量分析法重量分析法提取重量法沉淀法适用：混合碱、未知结构、M差异大优点：简便、不用换算因数无需知M缺点：挥发性、碱性条件下可水解生物碱不适用；取样大、操作易乳化、费时优点：取样少、灵敏度高缺点：计算复杂、操作繁琐24例昆明山海棠片中总生物碱成分的含量测定—重量法处方昆明山海棠取昆明山海棠片60片，除去糖衣，研细，取约相当于25片的量，精密称定，置200ml锥形瓶中，加适量硅藻土（每1g中加入硅藻±0.2g），混匀，加乙醇70ml，加热回流40分钟，放冷，滤过，滤渣再加乙醇50ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，合并滤液，置水浴上蒸干，残渣加盐酸溶液（1→100）30ml，置水浴上搅拌使溶解，放冷，滤过，残渣再用盐酸溶液（1→200）同法提取3次（20ml、15ml、15ml），合并滤液溶于分液漏斗中，加氨试剂使溶液呈碱性，用乙醚振摇提取4次（40ml、30ml、25ml、25ml），合并乙醚液，用水振摇洗涤2次，每次10ml，乙醚液滤过，滤液置已在100℃干燥至恒重的蒸发皿中，在低温水浴上蒸去乙醚，残渣中加入少许无水乙醇，蒸干，在100℃干燥至恒重，称定重量，计算，即得。252分光光度法-直接测定法不经过化学反应，利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色测定的方法。一般用于药味较少，干扰不大的中药制剂中总生物碱的含量测定。如：戊己丸26（2）比色法生物碱本身具有的颜色与氧化剂产生颜色因所具有的功能基与试剂反应产生颜色根据生物碱的通性与酸性染料、雷氏盐、苦味酸盐等结合成有色化合物，并能溶于有机溶剂中的271）酸性染料比色法应用本法的关键在于介质的pH、酸性染料的种类和有机溶剂的选择。常用的酸性燃料：甲基橙溴香草酚蓝（BTB）溴甲酚绿等281）酸性染料比色法-基本原理291）酸性染料比色法pH的选择：根据染料的性质及生物碱的碱性（pKb

）大小确定。一元5.2～6.4二元3.0～5.8常用的酸性染料：甲基橙、溴香草酚蓝（BTB）、溴甲酚绿等有机溶剂的选择原则：根据离子对与有机相能否形成氢键以及形成氢键能力的强弱，氯仿等是常用的提取溶剂。在提取过程中，严防水分混入有机溶剂。30例风湿骨痛胶囊中乌头总生物碱的含量测定——酸性染料比色法方法对照品溶液制备精密称取经1050C干燥至恒重的乌头碱对照品10mg，至100ml量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含乌头碱0.1mg）。31标准曲线的制备精密量取对照品溶液0ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置于分液漏斗中，依次精密加入三氯甲烷20ml，再精密加入pH3.0醋酸盐缓冲液（称取无水醋酸钠0.15g，加水使溶解，加冰醋酸5.6ml，用水稀释至500ml，摇匀，并在pH计上校正）10ml和0.1%溴甲酚绿（取溴甲酚绿0.2g加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.2ml使溶解，用水稀释至200ml，摇匀）2ml，强力振摇5分钟，静置20分钟，分取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，以相应试剂为空白，滤液照分光光度法，分别在412nm的波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。32测定法取装量差异项下的内容物，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醚-三氯甲烷-无水乙醇（16∶8∶1）的混合溶液25ml和氨试液1.5ml，摇匀，称定重量，于快速混匀器上振荡三次，每次2分钟，放置过夜，称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，再于快速混匀器上振荡2分钟，静置，倾取上清液，精密量取5.0ml，置分液漏斗中，加乙醚5ml，用0.05mol/L的硫酸溶液提取4次，每次10ml，分取硫酸液，滤过，合并滤液，置另一分液漏斗中，33加浓氨试剂4ml，摇匀，用三氯甲烷提取4次，每次10ml，分取三氯甲烷层，滤过，合并滤液，蒸干，残渣于105℃加热1小时，取出，放冷，加三氯甲烷分次溶解，转移至25ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取20ml，置分液漏斗中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入pH3.0醋酸盐缓冲液10.00ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中乌头碱的量（μg/ml）计算，即得。

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该法为酸性染料分光光度法，其水相pH的选择是离子对萃取法取得成功与否的关键，风湿骨痛胶囊测定时的pH是分别取乌头碱标准液以pH2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、5.8、6.0、6.2的缓冲液进行试验结果，表明以pH3.0较为适宜，在该条件下测定供试液吸收度较大，指示液空白试验吸收度较小，且呈色稳定性较好。352）苦味酸盐比色法在弱酸性或中性溶液中生物碱可与苦味酸定量生成苦味酸盐沉淀，该沉淀可溶于氯仿等有机溶剂，也可以在碱性条件下解离释放出生物碱和苦味酸。363）雷氏盐比色法雷氏盐在酸性介质中可与生物碱类成分定量地生成难溶于水的有色合物。将沉淀过滤洗净后溶于丙酮（或甲醇），直接比色法测定，换算成生物碱含量。也可精密加入过量的雷氏盐试剂，滤除生成的生物碱雷氏盐沉淀，将滤液在520～526nm（溶于甲醇时，其λmax为427nm）处进行比色，测定残存的过量的雷氏盐含量，间接计算生物碱的含量。37硫氰化铬铵在丙酮中的摩尔吸收系数ε=106．5（单盐），故可根据其吸收值A按下式直接测定而不需绘制标准曲线。

W一被测物重量（mg）M一被测物质的分子量V一溶解沉淀所用丙酮的ml数38雷氏盐比色法注意事项

雷氏盐的水溶液在室温可分解，故用时应新鲜配制，沉淀也需在低温进行供试品如为稀的水溶液（如注射剂等），沉淀前应浓缩,对于中药制剂含有干扰物质时，应事先经过纯化处理雷氏盐的丙酮或丙酮一水溶液的吸收值，随时间而有变化，故应尽快地测定。39处方益母草当归人参黄芪何首乌桃仁蒲黄熟地黄香附昆布白术黑木耳对照品溶液制备取盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml含1mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取装量差异下的内容物，研细，取12g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过，精密量取续滤液25ml，置50ml烧杯中，置水浴上蒸干，精密加入0.1mol/L盐酸溶液10ml使溶解，即得。

例产妇康颗粒中益母草总生物碱的含量测定—雷氏盐比色法40测定法取上述对照品溶液和供试品溶液，各加活性炭0.5g，置水浴上加入1分钟，搅拌，滤过，滤液分别置25ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液10ml分次洗涤烧杯和滤器，洗涤液并入同一量瓶中；另取0.1mol/L盐酸溶液20ml置另一25ml量瓶中，作为空白溶液。各精密加新制的2%硫氰酸铬铵溶液3ml，摇匀，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，置冰浴中放置1小时，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以0.1mol/L盐酸溶液为空白，在525nm的波长处分别测定吸收度，用空白溶液的吸收度分别减去对照品与供试品的吸收度，计算，即得。414）异羟肟酸铁比色法含有酯键结构的生物碱，在碱性介质中加热，酯键水解，产生的羧基与羟胺反应生成异羟肟酸，再与Fe3＋生成紫红色的配合物（异羟肟酸铁），在一定浓度下符合Beer定律，可用比色法进行含量测定。42（二）生物碱类单体成分的含量测定1薄层色谱法2高效液相色谱法3气相色谱法431薄层色谱法生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定。吸附剂、展开剂及显色方法与鉴别相似，但要求比鉴别严格。注意：使用改良碘化铋钾等作为显色剂时，必须完全挥干展开剂后（尤其在碱性环境下展开时）才可喷洒，否则背景深，反差小，影响测定。44例九分散中士的宁成分的含量测定—薄层扫描法处方马钱子粉麻黄乳香（制）没药（制）取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加三氯甲烷20ml与浓氨试液1ml，轻轻摇匀，称重，于室温放置24小时，再称重，补足三氯甲烷减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取续滤液10ml，用硫酸溶液（3→100）分次提取，至生物碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液使呈碱性，用三氯甲烷分次提取，合并液，蒸干，放冷，残渣中精密加三氯甲烷5ml使溶解，作为供试品溶液。另取士的宁对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯一丙酮一乙醇一浓氨试液（16∶12∶1∶4）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法进行扫描，波长：λs=254nm，λR=325nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。452高效液相色谱法以反相高效液相色谱法应用较多。在反相高效液相色谱中，由于硅胶表面残留硅羟基的影响，使生物碱分析易产生保留时间延长、峰形变宽、拖尾；可采取改进流动相、固定相等措施以克服游离硅羟基的影响，满足定量分析的要求。中药制剂中生物碱成分进行高效液相色谱法测定时，使用较多的是紫外检测器。46例小孩清热止咳口服液中盐酸麻黄碱含量测定—高效液相色谱法处方麻黄、苦杏仁、石膏、甘草等色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%磷酸溶液(含0.1%三乙胺)（3﹕97）为流动相；检测波长为205nm。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml含45µg的溶液，即得。47供试品溶液的制备精密量取本品5ml，加水10ml及浓氨水0.5ml用乙醚提取5次（30ml，30ml，20ml，20ml，20ml），合并乙醚液，加盐酸乙醇溶液（1→20）2ml，混匀，低温回收溶剂至干，残渣加乙醇5ml使溶解，转移至25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。483气相色谱法只适用于有挥发性、遇热不分解的生物碱类。生物碱盐在急速加热过程中产生的酸对色谱柱和检测器不利，应该注意。制备供试品溶液时一般采用冷提取，净化过程也要避免加热，以防止成分流失，最后需用氯仿等低极性有机溶剂为溶剂制备成供试液。49第二节黄酮类成分分析概述一般性质鉴别含量测定50一、概述黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物。现泛指两苯环通过中央三碳键相互联结而成的一系列化合物。在植物体内大部分与糖结合成苷，一部分以游离形式存在。槲皮素异槲皮素表儿茶素金丝桃苷52二、一般性质溶解度酸碱性紫外光谱特征53溶解度黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元，单糖苷、双糖或三糖苷）不同而有很大差异。游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不溶与苯、氯仿等。54酸碱性酸性：黄酮类化合物因分子中多有羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。碱性：氧原子的性质：黄酮类化合物分子中γ-吡喃酮环上的1－位氧原子，因有未共用的电子对，故表现出微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成盐，常表现出特殊的颜色，可用于鉴别。生成的盐极不稳定，加水后即可分解。55显色反应黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及γ-吡喃酮环有关。1还原反应2与金属盐类试剂的络合反应561还原反应常用：与盐酸-镁粉（或锌粉）的反应。反应时多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红-紫红色，少数显紫-蓝色，且B环上有-OH或-OCH3取代时，颜色即随之加深。查耳酮、橙酮、儿茶素类则不发生色变。花青素及部分橙酮，查耳酮等在单纯浓盐酸下也会发生色变，须预先作一对照，以便排除。572与金属盐类试剂的络合反应黄酮类化合物分子中有游离的3-OH、5-OH或邻二酚羟基时可与Al3＋、Zr4+、Pb2＋、Sr2+等形成配合物，这些配合物有的产生荧光或颜色加深（如Al3＋、Zr4+），有的产生沉淀（如Pb2＋、Sr2+）。Al3＋：1%AlCl3或Al(NO3)3;黄色(λmax=415nm)，有荧光Pb2＋：1%PbAc2或碱式PbAc2；黄↓～红↓，有荧光Zr4+：2%ZrOCl2的甲醇溶液；↑枸椽酸，5-OH黄酮的黄色aq显著褪色；3-OH黄酮的aq呈鲜黄色58紫外光谱特征因有2-苯基色原酮的基本结构，具有特定的紫外吸收峰，两个较强的吸收带：Ⅰ带在300~400nm范围内，由B环桂皮酰基引起。Ⅱ带在240～285nm范围内，由A环上的苯甲酰基引起。黄酮类化合物当加入一些移位剂如甲醇钠、醋酸钠、氯化铝等，可使最大吸收波长发生位移。选择性提高，可消除杂质的干扰，有利于含量测定。59三、鉴别（一）显色反应（二）薄层色谱鉴别60（一）显色反应黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及γ-吡喃酮环有关。1还原反应2与金属盐类试剂的络合反应611还原反应-盐酸-镁粉（或锌粉）的反应方法为将甲醇或乙醇提取液5~10ml，加入几滴浓盐酸，然后加入少许镁（或锌）粉（必要时微热），如果有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇存在，数分钟后即可出现橙色～红色。此反应要先加盐酸再加镁粉，因为像花色素等成分在单纯加盐酸后就能产生颜色变化；为避免在该反应中供试品液本身颜色的干扰，可注意观察上升的泡沫(阳性)62例牛黄解毒片（黄芩）的鉴别：取本品6片，研细，加乙醇10ml，温热10分钟，滤过，取滤液5ml，加盐酸0.5ml与少量镁粉，加热，溶液显红色。632与金属盐类试剂的络合反应例银黄注射液的鉴别：取本品1ml于试管中，加5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液各0.3ml，溶液呈黄色；另取注射液0.1ml，加水10ml，摇匀，取稀释液2ml，加5%二氯氧锆溶液1-2滴，溶液呈黄色，再加盐酸1-2滴，颜色不褪。64（二）薄层色谱鉴别吸附剂：硅胶、聚酰胺、纤维素硅胶色谱分离弱极性化合物较好聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷为佳纤维素薄层板则适用于分离多糖苷混合物显色：采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配合的方法。65例二陈丸中橙皮苷的鉴别处方陈皮半夏（制）茯苓甘草取本品5g，加甲醇30ml，置水浴上加热回流30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2µl，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（100﹕17﹕13）为展开剂，展开，展距约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20﹕10﹕1﹕1）的上层溶液为展开剂，展开，展距约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。66薄层板为氢氧化钠溶液制备的硅胶G板，可有效地减少黄酮类成分在硅胶板上的拖尾现象；进行二次展开，可有效地增大极性黄酮类成分在硅胶G板上的分离度；三氯化铝显色后检视荧光，有效地增大其检测的灵敏度。67例双黄连口服液中黄芩苷、绿原酸鉴别

处方金银花黄芩连翘

取本品1ml，加75%乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。另取黄芩苷、绿原酸对照品，分别加75%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液。吸取上述三种溶液各1~2µl，分别点于同一聚酰胺薄膜（5cm×7cm）上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。68四、含量测定（一）总黄酮含量测定（二）黄酮类单体成分含量测定69（一）总黄酮含量测定1直接测定2比色法701直接测定黄酮类化合物具有特定的紫外吸收峰，含黄酮类化合物的原料药及部分制剂经一定的提取纯化后，可直接于最大吸收波长处测定其吸收度，以芦丁等为对照品计算其含量。71灯盏细辛注射液中总咖啡酸酯的测定处方灯盏细辛提取物对照品溶液的制备取1,5-氧-二咖啡酰奎宁酸对照品适量，精密称定，加0.1mol/L碳酸氢钠溶液制成每1ml含总咖啡酸酯以1,5－氧－二咖啡酰奎宁酸10mg的溶液，即得。供试品溶液的制备精密量取本品1ml，置200ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。测定法分别取对照品溶液与供试品溶液，照紫外-可见分光光度法，在305nm波长处测定吸光度，即得。本品每1ml含总咖啡酸酯以1,5－氧－二咖啡酰奎宁酸计，应为2.0～3.0mg。722比色法黄酮类化合物显色以后显色物与背景最大吸收波长差别较大，可消除背景（即阴性空白）的干扰，以提高本法的选择性及灵敏度。常用铝盐作显色试剂。73例消咳喘糖浆中总黄酮含量测定处方满山红对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品30mg，置100ml量瓶中，加60%乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置50ml量