微生物的基本培养技术(第2课时)【高效课堂+备课精研】 高二生物 精讲课件（人教版2019选择性必修3）

第2节

微生物的培养技术及应用01一生物的基本培养技术（第2课时）第1章发酵工程在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。1.相关概念2.微生物纯培养的步骤三、微生物的纯培养培养物：纯培养物：纯培养：获得纯培养物的过程就是纯培养。配制培养基灭菌接种分离培养等酵母菌的纯培养微生物群分散或稀释单个细胞繁殖单菌落(1)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落(2)单菌落：一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。(3)获得单菌落的方法：稀释涂布平板法、平板划线法1.实验原理特征：大小、形状、隆起程度、颜色等功能：鉴定菌种的重要依据单个微生物固体培养基上大量繁殖子细胞群体菌落在相同培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征酵母菌的纯培养酵母菌的纯培养

2.目的要求

(1)学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。

(2)学会进行无菌操作。

(3)尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。

3.材料用具

酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖(或蔗糖)、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸(或报纸)、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。4.方法步骤配制培养基称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15~20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。灭菌

将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15~30min。将5～8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160～170℃灭菌2h。倒平板待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。酵母菌的纯培养（1）制备培养基④等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置①拔出锥形瓶的棉塞②将瓶口迅速通过火焰倒平板的具体操作步骤③用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10-20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖。倒平板注意事项：①温度：50℃左右②操作：在酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置酵母菌的纯培养

琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时，高于50℃则会烫手，若低于50℃不及时操作，琼脂会凝固。3.为什么倒平板时，将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不能完全打开？防止杂菌污染培养基实验注意事项、分析、思考1.培养基灭菌后为什么要冷却到50℃左右时开始倒平板？2.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。酵母菌的纯培养6.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。4.为什么倒平板和接种整个过程要在酒精灯火焰旁进行？避免杂菌污染5.倒平板时为什么要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。实验注意事项、分析、思考酵母菌的纯培养将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。8.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？7.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。实验注意事项、分析、思考酵母菌的纯培养（2）接种和分离酵母菌

通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。连续划线法分区划线法酵母菌的纯培养4.方法步骤平板划线的具体操作步骤①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。②在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞。③将试管口通过火焰④将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液。⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。⑥左手在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。酵母菌的纯培养平板划线的具体操作步骤12345灼烧接种环蘸取菌液第1区接种灼烧接种环第2区接种灼烧接种环第3区接种第5区接种注意：①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次。②划线首尾不能相接③每次划线前接种环进行灭菌；在5个区域划线，接种环灼烧灭菌共6次。④划线后,培养皿倒置培养平板划线完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃

左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24~48h。

警示：在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。

（3）培养酵母菌酵母菌的纯培养4.方法步骤1.在未接种的培养基表面是否有菌落生长?如果有,说明了什么?2.在接种酵母菌的培养基上,你是否观察到了单菌落?这些菌落的颜色、形状和大小是否一致?如果你观察到了不同形态的菌落,你能分析出可能是由哪些原因引起的吗?3.你是如何记录实验结果的?请与其他同学交流、互评。提示1：在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染。提示2：如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或无菌操作不规范等原因引起的。5.结果分析与评价酵母菌的纯培养

1.为什么在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧时期目的取菌种前每次划线前接种结束后杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞。杀死接种环上原有微生物6.实验注意事项、分析、思考酵母菌的纯培养2.在灼烧接种环之后，要等其冷却再进行划线，目的是什么？避免温度过高杀死菌种使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落①一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；②存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落4.为什么划线时要注意不能划破培养基？3.除第一次划线外，每次划线都从上一次划线的末端开始，目的是什么？5.未接种的培养基直接培养起什么作用？

做空白对照，若培养后培养基表面无菌落，则说明培养基没有污染。6.实验注意事项、分析、思考酵母菌的纯培养评估论点的可信程度

有一段时间，水果“酵素”风靡各地。水果“酵素”制作的大致过程是：将洗净、切成块状的水果放入洁净的容器，再加入糖和水,密封，置于阴凉处发酵一至两周。有人说，吃水果“酵素”可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力。请评估这一论点是否可信。追问以下问题可以帮助你分析。“酵素”是什么？水果“酵素”的制作原理是什么？水果“酵素”中可能含有哪些成分？它是否含有人们无法从其他食品中获取但又是维护健康所必需的成分？水果“酵素”中的所有成分都有益于人体健康吗？如果要更加有力地支持或反驳水果“酵素”有益健康的论点，应该怎样获取证据？

所谓“酵素”，就是“酶”的另一种说法。“酵素”制作就是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。这样制作的“酵素”中可能有糖类(包括-些简单的糖和膳食纤维等)、蛋白质(包括多种酶)、有机酸等成分，不存在它独有的、特殊的营养物质，其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质，食用后可能会危害人体健康。因此，“吃水果酵素可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力”的论点值得怀疑。

1.微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。（1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。（）（2）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。（）（3）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。（）×√×练习与应用一、概念检测

2.日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？提示：日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低温储存等。干制可以降低食品的水分含量；腌制可以通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；低温则是通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。练习与应用一、概念检测

1.某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。（1）这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有（2）“将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步操作？（3）从实验结果来看,洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？提示（1）：培养皿和培养基。提示（2）：接种。（3）提示：通过实验结果可以看到，洗手后手上还有一些微生物，不能直接进行无菌操作。可以通过用酒精棉球擦拭双手，或戴消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。二、拓展应用练习与应用

2.某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置