一、细菌的形态与结构观察

第一次实验

细菌的形态和结构观察介绍实验室有关的内容实验内容实验小结

228963372/1/20231学习要求1、初步了解病原生物学和免疫学实验技术的概念和内容；2、熟悉病原生物学实验室的注意事项；3、掌握显微镜的使用和保护方法；4、掌握细菌的基本形态和特殊结构；5、掌握细菌的革兰染色法；6、了解细菌的运动特点。2/1/20232介绍实验室有关的内容

1、总论微生物实验寄生虫实验免疫学技术

2、实验室注意事项评分标准清洁卫生操作规程显微镜管理等2/1/20233实验内容1、显微镜使用和保护（录像）2、细菌的镜下形态观察（学生操作）3、细菌的特殊结构（学生操作）4、革兰染色（学生操作）5、细菌的动力观察录像（教师示教）

2/1/202342/1/20235实验小结1、显微镜油镜的使用和保护2、细菌的基本形态①球菌②杆菌③螺形菌

3、细菌的特殊结构①荚膜②鞭毛③芽胞④菌毛4、细菌的革兰染色法5、注意事项：评分、卫生、操作、管理。2/1/20236end2/1/20237细菌的基本形态观察(发片)1、球菌镜下形态：①葡萄球菌②链球菌③肺炎链球菌④脑炎奈瑟菌2、杆菌镜下形态：①大肠埃希菌②破伤风梭菌③产气荚膜梭菌④变形杆菌3、螺形菌革兰染色片：

霍乱弧菌或水弧菌

2/1/20238细菌的特殊结构(示教片)1．肺炎球菌荚膜染色示教片（示荚膜）2．变形杆菌鞭毛染色示教片（示鞭毛）3．破伤风梭菌芽胞染色或革兰染色示教片（示芽胞）2/1/20239

细菌的革兰染色革兰染色法是细菌检验中最常用的一种染色法。利用革兰染色法，可将细菌分为两大类，有助于鉴别细菌和选择用药等。

1、革兰染色法原理

2、革兰染色法操作步骤

3、革兰染色结果通过革兰染色可以观察到什么？细菌的形态、排列、荚膜、芽胞2/1/202310革兰阴性菌因其细胞壁中肽聚糖含量少，结构疏松，脂类物质含量高而被酒精脱色，经复染呈红色。革兰染色原理：革兰阳性菌因细胞壁中含有大量的肽聚糖和磷壁酸，且结构致密，可保留结晶紫与碘的复合物，并不被酒精脱色而显示为紫蓝色。2/1/202311

革兰染色方法(录像）

涂片自然干燥火焰固定染色染色过程：

已固定的涂片加结晶紫

1分钟，水冲洗滴加碘液1分钟，水冲洗95%酒精

20~30秒稀释石炭酸复红1分钟，水冲洗待干镜检初染媒染脱色复染一般用室温干燥，注意必须完全干燥后方可固定。涂片在酒精灯火焰上快速通过3～4次以固定细菌，并使其不易从玻片上脱落。注意不要将涂片直接放在火焰上烤，以免破坏细菌结构。

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用灭菌的接种环取无菌生理盐水1-2环，置于玻片中。接种环灭菌，待接种环冷却后，挑取适量培养物混合于盐水中，涂抹均匀使成一层薄膜（若检材是液体则不必加生理盐水）薄膜涂抹的面积约1.5×2.0cm

。按上法制备大肠杆菌涂膜。2/1/2023132/1/202314葡萄球菌（革兰染色）2/1/202315葡萄球菌（革兰染色）2/1/202316葡萄球菌电镜照片2/1/202317链球菌（革兰染色）2/1/202318链球菌（革兰染色）2/1/202319链球菌电镜照片2/1/202320奈瑟菌（革兰染色）2/1/202321双球菌（革兰染色）2/1/202322双球菌电镜照片2/1/202323大肠埃希菌（革兰染色）2/1/202324大肠埃希菌（革兰染色）2/1/202325大肠埃希菌电镜照片2/1/202326霍乱弧菌（革兰染色）霍乱弧菌电镜照片2/1/202327荚膜荚膜2/1/202328荚膜2/1/202329荚膜2/1/202330变形杆菌鞭毛染色（示鞭毛）

2/1/202331变形杆菌鞭毛电镜照片（示鞭毛）

2/1/202332破伤风梭菌（示芽胞）革兰染色和芽胞染色2/1/202333破伤风梭菌芽胞染色（示芽胞）

2/1/202334破伤风梭菌革兰染色（示芽胞）

2/1/202335破伤风梭菌芽胞电镜照片（示芽胞）

2/1/202336产气荚膜梭菌革兰染色（示荚膜）2/1/2023372/1/2023382/1/2023392/1/2023402/1/202341霍乱弧菌（革兰染色）霍乱弧菌电镜照片2/1/2023422/1/2023432/1/2023442/1/2023451、实验时不迟到、不早退。2、实验时要保持实验室内的整洁、安静。3、正确使用显微镜，观察完毕应把镜头和载玻片上的镜油擦净。

4、各实验小组的实验用品、由各组保管使用，不得随意与他组调换或挪用。如需补发或增添，应说明原因。5、每次实验后应清点实验器材、用品数量，如有遗失或损坏应按规定赔偿。动物及标本要按规定处理，不可擅自拿走。6、实验结束后，各组应自觉清理实验器材，值日生做好全室清洁工作，关好门窗、水电，经指导教师检查合格后方可离开实验室。

1、要按时完成实验报告。2、实验报告要保证准确、工整、美观。3、实验课结束要将实验报告交病原生物学实验室评分存档。

1、操作考核。2、大体标本考核。3、镜下标本考核。

病原