实验动物微生物寄生虫学

CompanyLOGO实验动物微生物

寄生虫学A遗传控制标准化B微生物控制标准化环境设施标准化化C饲料营养的标准化D实验动物的四个“标准化”2微生物质量控制要求：要求生产的实验动物达到预定的微生物质量标准，而且动物实验过程也要执行同样的微生物质量标准。3按微生物学控制分类无菌动物GF，和悉生动物GN1234普通动物，(conventionalanimal,CV)清洁动物，(cleananimal,CL)无特定病原体动物，SPF实验动物45普通动物

（Conventionalanimal，简称CV动物）定义：不带有动物烈性传染病和人兽共患病病原体的动物。饲养条件：普通开放环境来源：经微生物学检查不带有上述病原体的动物，或SPF动物降级。应用：豚鼠、兔、犬、猴等大动物的实验研究。6普通动物特点：1、微生物学特点要求不携带所规定的人兽共患病病原和动物烈性传染病的病原。2、饲养管理饲养于开放系统。但仍然对温度，湿度，饲料，垫料，饮水，卫生等有一定控制。3、生理学特点外观健康，饮食排泄正常，无异常分泌物，无临床症状，脏器无眼观病灶。7普通动物的应用：仅可作为生物医学中教学示教之用，或作为某些科学研究为探索方法而从事的预试验之用，不可供科研、生产和检定之用，由于普通级动物繁殖力强，生产量大，生产成本低，适宜作一般性的教学实验和预实验用。8清洁动物（Cleananimal，简称CL动物）定义：微生物控制级别介于SPF动物和普通动物之间的动物。除普通级动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原。饲养条件：屏障系统大规模生产来源：SPF动物扩群应用：各种科研、教学用大小鼠9清洁动物特点：1、微生物特点清洁级动物比普通级动物要求排除的微生物和寄生虫多，但比SPF动物少。清洁级动物除肉眼观察无病外，尸体解剖时，主要脏器、组织无论是肉眼观看还是病理组织切片均应无病变。102、饲养管理

清洁级动物饲养于温湿度恒定的万级空气净化的屏障系统中。其所用的饲料、垫料、饮用水、笼器具等都经过消毒灭菌处理。工作人员需换灭菌工作服、鞋、帽、口罩等进入动物室进行操作。11实验动物大楼二楼SPF实验室实验动物大楼二楼SPF实验室无特定病原体动物（Specificpathogenfreeanimal，简称SPF动物)定义：指不携带普通动物、清洁动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原。饲养条件：屏障系统内大规模生产/隔离器内保种最初来源：将无菌动物/悉生动物转移到屏障系统中饲养繁殖14SPF动物特点：1、微生物特点SPF动物除一、二级动物应排除的病原体外，不携带主要潜在感染或条件致病和对研究实验干扰大的病原。2、来源SPF动物来源为无菌动物或剖腹产动物。3.饲养管理SPF动物必须饲养在温湿度恒定的万级空气净化的屏障系统中，实行严格的微生物控制。15洗刷消毒间污染走廊实验室消毒后室储物间实验室实验室清洁走廊检疫室饲养室饲养室饲养室风淋二更接收间淋浴污染走廊一更外走廊1617无菌动物（Germfreeanimal，简称GF）定义：指用现有的实验手段检测，动物的体表体内不携带其它生命体（包括一切微生物和寄生虫）的实验动物。饲养条件：无菌隔离器内来源：第一代通过无菌剖腹产术，人工哺乳获得；以后通过无菌动物雌雄交配繁殖或无菌剖腹产术，保姆鼠代奶扩群。2006浙江大学王建国博士论文19隔离器20种类培育者及育成时间小鼠Pleasants,1959大鼠Reyniers1946；Gustafsson,1948豚鼠Miyakawa1958;Tanami,1959;兔Wostmann1959;Luckey,1963狗Glimsedt,1946猫Bleby,1969山羊、绵羊Smith,1961,1966猪Whitenair,1960马Drummond等,1973猴Reyniers,1942鸡Reyniers,1943鹌鹑Woodard等,1965;Miles,196621无菌动物特点：1.微生物特点：在动物体内外任何部位均检不出任何活的微生物和寄生虫。

“无菌”是个相对的概念，只是根据现有的科学知识和检验方法在一定时期内不能检出病原体而已。随着科学技术的发展，现在认为是无菌的动物或许将来可以检出病原体而不是无菌动物。222.形态学特点：消化系统

(1)盲肠肥大，

(2)肠道肌层薄，肠绒毛变细变短

(3)肝脏变小23循环系统

(1)心脏变小

(2)白细胞数变少，且数量波动范围小免疫系统(1)胸腺，淋巴组织，网状内皮系统发育不良(2)脾脏小24免疫功能

(1)血清中IgG、IgM水平低，几乎不存在丙种球蛋白和特异性抗体

(2)免疫应答速度慢，过敏反应、对异体移植物的排斥反应以及自身免疫现象消失或减弱25生长率：不同种属不同

(1)无菌鸟类生长率高于同种普通鸟

(2)无菌大、小鼠与普通鼠差不多

(3)无菌豚鼠和无菌兔比普通的慢26生殖(1)无菌大、小鼠略高于普通大小鼠(2)豚鼠和兔繁殖能力比普通级低代谢和营养无菌动物血中含氮量少，肠管对水的吸收率低，代谢周期比普通动物长体内不能合成维生素B和K，易产生这两种维生素的缺乏症27抗辐射能力

无菌动物抗辐射能力强，抗实验性烫伤和抗休克死亡能力也强于普通动物寿命

无菌动物的寿命普遍长于普通动物28悉生动物（Gnotobioticanimal，简称GN）定义：又称已知菌动物，指动物体内带有明确的微生物种类的动物。饲养条件：无菌隔离器内来源：人为将已知的微生物投给无菌动物，使其体内带有已知菌单菌动物(monoxenie)双菌动物(dixenie)多菌动物29悉生动物特点：微生物特点

体内携带有已知微生物来源

无菌动物植入微生物饲养管理

必须饲养在温湿度恒定的百级空气净化的隔离系统中，实行严格的微生物控制。30其他

与无菌动物比较。

悉生动物肠道内存在细菌可以合成维生素，不会像无菌动物一样发生维生素缺乏症。

抵抗力、生活力较强，易于饲养管理。31实验动物微生物等级2001版国家标准根据微生物和寄生虫等级对实验动物等级进行了重新设定。小鼠清洁级SPF级无菌级大鼠清洁级SPF级无菌级地鼠普通级清洁级SPF级无菌级豚鼠普通级清洁级SPF级无菌级家兔普通级清洁级SPF级无菌级犬普通级SPF级猴普通级SPF级32二、实验动物的微生物学、寄生虫学质量监测33(一)微生物、寄生虫感染的危害1、威胁人类健康。如汉坦病毒、钩端螺旋体感染人致病。2、影响动物生产。如兔出血热病毒的感染导致动物的大批死亡。3、影响实验结果。如小鼠肝炎病毒感染引起血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高。4、污染实验材料。如用于疫苗生产的原材料SPF鸡胚污染病毒，接种疫苗导致病原的扩散。345、寄生虫对实验动物的影响。1）掠夺宿主的营养；2）体外寄生虫对动物的骚扰；3）对宿主机体产生机械性损;4）对宿主产生毒性作用；5）对宿主生理、生化和免疫系统产生影响。35（二）监测意义1、保证实验研究的顺利进行和工作人员的身体健康。2、确保实验数据的准确性和可重复性。36（三）监测方法实验动物的微生物、寄生虫检测具体操作方法详见《国家标准实验动物微生物学检测方法》（GB/T14926.1-14926.64）和《国家标准实验动物寄生虫学的检测方法》(GB/T

18448.1～18448.10)。细菌、真菌和寄生虫以病原学检测为主，血清学检测为辅；但有些病原体也逐渐使用血清学方法检测，如支原体、泰泽氏病原体、弓形体等。病毒的常规定期检测以血清学为主，而疾病诊断则以病原学检测为主。包括监测项目的选定、采样数量、检测频率、采样方法、病毒、细菌、寄生虫和真菌检测方法。37

1、监测项目我国经过十多年来对各地实验动物感染病原微生物、寄生虫情况的调查，结合其他国家的规定和经验，制定了我国啮齿类、兔、犬、猴和鸡的微生物学以及寄生虫学等级标准。目前有关实验动物的标准有28个。颁布年代主要在2001年，最近对标准又进行了部分修订。38GB14925实验动物环境与设施GB14923实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制

GB14922.1实验动物寄生虫学等级及检测GB14922.2实验动物微生物学等级及检测GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准

GB14924.2实验动物配合饲料卫生标准

GB14924.3实验动物小鼠、大鼠配合饲料

GB14924.4实验动物兔配合饲料

GB14924.5实验动物豚鼠配合饲料

GB14924.7实验动物犬配合饲料GB14924.8实验动物猴配合饲料GB14924.6实验动物地鼠配合饲料

GB/T14927.1实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法GB/T14927.2实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法GB/T14926.42～14926.43实验动物微生物学检测方法（1）GB/T14926.1～14926.6实验动物微生物学检测方法（2）GB/T14926.8～14926.17GB/T14926.41GB/T14926.44～14926.49GB/T14926.50～14926.55实验动物微生物学检测方法（3）GB/T14926.18～14926.32实验动物检测方法（4）GB/T14926.56～14926.64GB/T18448.1～18448.10实验动物寄生虫学检测方法GB/T14924.9实验动物配合饲料常规营养成分的测定GB/T14924.10实验动物配合饲料氨基酸的测定GB/T14924.12实验动物配合饲料矿物质和微量元素的测定GB/T14924.11实验动物配合饲料维生素的测定GB/T17998SPF鸡微生物学监测总则39我国实验动物微生物国家标准规定SPF级实验大小鼠检测16种病原菌如沙门菌、支原体、泰泽病原体等；14种病毒如鼠痘病毒、汉坦病毒、仙台病毒和小鼠肝炎病毒等；7种寄生虫如体外寄生虫、弓形体等；豚鼠、地鼠和兔检测14种病原菌如沙门菌、多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌等；8种病毒如兔瘟、仙台病毒等；6种寄生虫如弓形体、兔脑原虫、球虫等；犬、猴检测9种病原菌如志贺菌、结核菌等；9种病毒如B病毒、逆转录病毒等；5种寄生虫如弓形体、溶组织阿米巴等。40采样数量我国国家标准规定：选择成年动物用于检测。取样数量：每个小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠和兔生产繁殖单元；以及每个犬、猴生产繁殖群体，根据动物多少，取样数量见表。群体大小（只）取样数量1）〈100不少于5只100-500不少于10只〉500不少于20只1）每个隔离器检测2只。413、检测频率普通级动物：每三个月至少检测动物一次。清洁级动物：每三个月至少检测动物一次。无特定病原体动物：每三个月至少检测动物一次。无菌动物：每年检测动物一次。每2-4周检查一次动物的生活环境标本和粪便标本。一般来说，一旦病原体入侵动物群体引起感染，初期分离病原体较容易，随后抗体的检出率上升，2-3个月后可因某些个体抗体水平的降低以及新出生的非感染个体的增加等原因，抗体检出率下降。42小结：微生物感染对人、动物和实验的影响

直接影响：（1）引起人畜共患病，影响工作人员的身体健康。（2）引起动物传染病，影响均衡生产，影响动物健康和质量。（3）严重干扰实验结果的可靠性、准确性、重复性。（4）污染环境间接影响：（1）引用不正确的实验结果可能会导致临床的错误治疗。（2）用不健康的动物材料制成生物制品可扩散疾病。（3）重复实验可造成新的人力、物力、才力的浪费。因此，要保证工作人员的身体健康，实验结果的准确和一些实验的特殊要求，必须对实验动物进行微生物控制，这是不断提高实验水平的需要，也是实验动物科学发展的必然趋势。43实验动物的防疫原则1．隔离饲养：不同种动物要分开饲养，严禁混养在一起。防止交叉感染。2．引进动物要严格检疫：依据国家检测标准进行，严格检疫。要从具有质量合格证的单位引进动物。3．坚持卫生消毒制度：杜绝各种病原微生物的侵入和繁殖。要定期对动物房舍和饲养用具进行消毒。4．人员健康检查：饲养管理人员要定期进行健康检查，有人畜共患病者，应调离与动物接触的工作岗位。5．动物质量检查：保种单位、生产单位要对饲养的动物定期进行质量检查，发现问题及时更新种群。6．动物免疫制度：对国家标准要求必须实施预防接种的实验动物要定期进行免疫接种。7．隔离和无害化处理：严格防止野生动物进入实验动物室，对死亡动物进行无害化处理。44动物传染病防制的具体措施如下：1、根据不同等级的实验动物分别制定科学的饲养管理和卫生防疫制度，并严格执行。2、根据不同等级的实验动物的要求建立合理的环境设施，严格区分实验动物繁育区与动物实验区，且各种动物要分开饲养，以防交叉感染。3、坚持平时的各项卫生消毒灭菌制度，对实验动物的房舍、用具等定期进行消毒或灭菌，杜绝各种微生物的侵入。4、自繁自养自用，引进的动物只有确认健康后才能与原设施内动物合群或投入使用；不得从疫区引进动物。5、外环境定期进行杀鼠灭蝇的工作，防止野生动物和昆虫进入动物饲养室或动物实验室。6、工作人员定期进行健康检查，患有传染性疾病的人员不能从事实验动物工作。7、发现疫情及时上报，迅速隔离患病动物，危害性大的疫病采取封锁、扑杀等综合性措施，将患病动物进行焚烧，污染的环境及用具应进行彻底严密的消毒或灭菌。8、开展经常性的卫生检疫，发现疫情，及时采取相应的防治措施。45实验动物的卫生防疫与隔离措施1.平时的预防措施（1）饲养人员应严格按照不同等级实验动物的饲养管理和卫生防疫制度和操作规程，认真做好各项记录，发现情况，及时报告。（2）实验动物设施周围应无传染源，不得饲养非实验用家畜家禽，防止昆虫及野生动物侵入。（3）坚持平时卫生消毒制度，降低环境设施中的病原体含量。（4）各类动物应分室饲养，以防交叉感染。饲养室严禁非饲养人员出入和各类人员互串，购买或领用动物者不得进入饲养室内。（5）饲料和垫料库房应保持干燥、通风、无虫、无鼠，饲料应达到相应的国家标准。（6）饲养人员和兽医技术人员应每年进行健康检查，患有传染性疾病的人员不得从事实验动物工作。462.发生疫病时的扑灭措施（1）及时发现、诊断和向上级管理和防疫部门上报疫情，并通知邻近单位做好预防工作。（2）迅速隔离患病动物，污染的环境和器具紧急消毒。实验期间的动物应停止实验观察或淘汰。（3）若发生危害性大的疫病，如鼠痘、流行性出血热等应采取封锁等综合性措施。消毒处理后一个月方可解除封锁。（4）病死和淘汰动物应采取焚烧等措施合理处理。3.消毒措施（1）预防性消毒：平时要定期对实验动物房、笼架具、饮水等进行消毒，以达到预防的目的。（2）随时消毒：在发生传染病时，为了及时消灭刚从患病动物体内排出的病原体而采取的消毒措施。（3）终末消毒：在患病动物解除隔离、痊愈或死亡后，为了消灭疫区内可能残留的病原体所进行的全面彻底的大消毒。47生物危害（biohazard）是指在生命科学中，由于实验人员的操作失误，而使有害病原体散播到外界，污染外界环境，并造成周围人及动物感染发病。发生的原因：实验者，实验动物及实验环境预防实验中生物危害的发生。48常见人畜共患病毒性疾病1.流行性出血热病毒感染（Epidemichemorrhagicfevervirusinfection）病原：流行性出血热病毒（Bunyaviridae,Hantavirus)流行病学：

传染源：带毒野鼠和实验大鼠传播途径：咬伤接触传播，气溶胶吸入易感动物：大小鼠及其它啮齿类动物临床症状：大小鼠无临床症状，人感染后得流行性出血热，典型表现有发热、出血和肾脏损害三类主要症状

49诊断：血清学检查，病毒分离预防和控制：

预防：饲养区内外捕杀野鼠，不从无生产许可证单位购买动物。控制：捕杀血清学检查阳性大鼠、小鼠，消毒、隔离常见人畜共患病毒性疾病502.淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒感染（Lymphocyticchoriomeningitisvirusinfection)病原：LCMV（Arenaviridae,Lymphocyticchoriomeningitisvirus）流行病学：

传染源:感染LCMV的野小鼠或实验小鼠传播途径：接触传播，垂直传播易感动物：小鼠、仓鼠、人临床症状：小鼠可无症状，发病后病鼠呆滞、昏睡等；人感染后呈流感样、脑膜炎常见人畜共患病毒性疾病51诊断：血清学检查，样品脑内注射预防和控制：彻底消灭饲养室周围的野鼠和家鼠，避免鼠类的排泄物污染的饮食，避免吸入被污染的尘埃。

52LymphocyticChoriomeningitisVirusInfectioninFVBMouseProducesHemorrhagicDiseaseFrederickJ.SchnellSarahSundholmStacyCrumleyPatrickL.IversenDanV.Mourich3.猴疱疹病毒感染（B-Virusinfection)病原：CercopithecineHerpesvirusType1流行病学：传染源:感染B病毒的非人灵长类动物传播途径：接触传播（咬伤、抓伤，性）易感动物：猴、人临床症状：发热、头痛、结膜炎，器官坏死、出血性休克、严重致死常见人畜共患病毒性疾病53诊断：血清学检查预防和控制：对进入实验室的猴做彻底的检疫，避免接触野生猴类544.狂犬病（Rabies)病原：Rhabdovirus流行病学：传染源:感染Rhabdovirus的犬、猫、狼和蝙蝠等传播途径：接触传播（唾液）易感动物：所有哺乳动物常见人畜共患病毒性疾病55临床症状：潜伏期、前驱期、急性神经症状期和麻痹期即昏迷死亡期

56诊断：1.

狂犬病特异性抗原2.

在脑组织中存在Negri体（狂犬病病毒包涵体）

3.

在脑组织或唾液中用细胞培养分离到病毒预防和控制：禁止野犬进入动物房周围，对实验犬和实验人员接种狂犬病疫苗57二.立克次体疾病立克次体是介于细胞与病毒之间的微生物，具有以下特点：

①需在活细胞内生长，在代谢衰退的细胞内生长旺盛；

②具典型的细胞壁、有DNA和RNA，呈短小、多形性球杆状，染色后光学显微镜可以查见③对抗生素敏感58人畜共患的实验动物立克次体疾病59病原为立克次氏体，以鼠类为储存宿主，由某些节肢动物如虱、蚤、蜱或螨为媒介传给人类。潜伏期多在2～14日内。表现有高热、头痛、精神症状（如谵妄、狂躁、昏迷等）、皮疹（Q热无皮疹）和肝、脾肿大等，有的有皮肤溃疡及焦痂。诊断主要依据典型临床表现。确诊可作立克次氏体分离及血清学检查。氯霉素或四环素族抗生素治疗有特效。三、人畜共患常见细菌性疾病1.沙门氏菌病（Salmonella）病原：沙门氏菌流行病学：

传染源：患病动物和无症状带菌动物传播途径：消化道易感动物：啮齿类、兔临床症状：突然死亡，腹泻诊断：临床症状，病原菌分离62豚鼠的脾脏病变小鼠肝脏病变预防和控制：对动物的食物和饮水进行严格消毒，一旦发现有动物染病，立即扑杀并对环境彻底消毒。三、人畜共患常见细菌性疾病632.布氏杆菌病（Brucellosis）病原：Brucellasuis流行病学：

传染源：犬、牛、猪、羊传播途径：接触感染（口、皮肤、黏膜）易感动物：犬、牛、猪、羊临床症状：体重减轻、睾丸炎、不育诊断：临床症状，病原菌分离三、人畜共患常见细菌性疾病646465四.常见的影响实验动物生产的疾病1.鼠痘（Mousepox,Infectiousectromelia）病原学：鼠痘病毒（Poxviridae,mousepoxvirus）流行病学：

传染源：病鼠，野生小鼠很少发生传播途径：接触传播、消化道传播、呼吸道易感动物：小鼠（某些品系易感，某些品系抵抗）临床症状：痘斑、脱脚、断尾66诊断：流行病学，临床症状，病毒分离，实验室检查预防和控制：

预防：严格执行规章制度，不从无生产许可证单位购买动物。控制：捕杀病鼠，消毒饲养室672.仙台病毒感染（Sendaivirusinfection）病原学：仙台病毒（Paramyxoviridae,Sendaivirus）流行病学：

传染源：病鼠；传播途径：呼吸道或直接接触；易感动物：啮齿类，包括大小鼠、豚鼠等。临床症状：感冒或肺炎症状68仙台病毒感染肺病变对麻醉实验和吸入毒理学研究等产生严重干扰诊断:流行病学，临床症状、实验室检查预防和控制：引进动物时执行严格的检疫制度，发现感染鼠后及时扑杀，剖腹产重建鼠群693.鼠肝炎（Mousehepatitis）病原：鼠肝炎病毒（Coronaviridae,Mousehepatitisvirus）流行病学：

传染源：隐性感染鼠、病鼠传播途径：消化道，接触传播易感动物：小鼠临床症状：乳鼠死亡，裸鼠“WasteSyndrome”四.常见的影响实验动物生产的疾病6970感染鼠肝炎的裸鼠wastesyndrome裸鼠的肝脏病变7071诊断:流行病学，临床症状、

实验室检查预防和控制：引进动物时执行严格的检疫制度，发现感染鼠后及时扑杀，剖腹产重建鼠群71724.犬细小病毒病（CanineParvovirusdisease）病原：犬细小病