过敏原血清学检测与临床应用

过敏原血清学检测金花2013.3.22基本概念过敏反应：1906年vonPiguet提出了allergy一词。其概念为：机体对抗原刺激产生的一种“改变了反应性”的状态。这种状态可能是保护性的，即产生了免疫力；也可能是破坏性的，即产生了超敏反应。超敏反应是机体对某抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。过敏原：致敏原or变应原能够使人发生过敏的抗原。吸入过敏原接触过敏原

过敏原输注过敏原

过敏原食物过敏原

4种过敏反应类型(超敏反应)byCoombsundGell(1963)

TypeI早期反应核Platzhalter数分钟内

花粉热

TypeII细胞毒反应坏数小时到一天

输血反应

TypeIII免疫复合物形成IgE-介导肥大细胞脱IgG/IgM介导靶细胞的破持续产生IgG/IgM免疫复

合物Platzhalter

数小时到一天farmerslungs

TypeIV细胞免疫反应T-细胞介导反应

12小时到数周接触过敏反应(Ni)过敏性鼻炎、鼻息肉、鼻窦炎过敏性眼病哮喘、过敏性肺炎特应性皮炎和接触性皮炎慢性荨麻疹和血管性水肿过敏性休克昆虫过敏药物过敏食物过敏from《ManualofAllergyandImmunology》常见过敏性疾病流行病学平均发病率20%（8~45%）过去10年，成倍增加（doubled） 二十一世纪的流行病（theepidemicof21thcentury）TriggersEpisodic

（多有明显诱因）（呈发作性，症状来得快，去的快）Reversible（可完全缓解,查体常无阳性体征）Recurrent（病情反复，多与过敏原暴露相关）Atopic（特应性，发生于过敏体质者）临床表现的特点引起过敏反应因素遗传因素接触过敏原的机会抗原性质Th细胞及细胞因子过敏反应:诊断IgE检测原理FromALLERGY4thEdition检测IgE步骤1:总IgE•ELISA步骤2:特异性IgEEUROLINEExtinction总IgEELISA标准品100IU/ml10IU/ml 0IU/mlWHO75/502•4点定标Exampleforastandardcurve00,5

2

500IU/ml1,5 10100200300400500600IgE[IU/ml]年龄最高参考上限新生儿1.2IU/ml1-6月7.2IU/ml7-12月12.7IU/ml1-5岁60IU/ml6-9岁155IU/ml10-15岁199IU/ml>16岁100IU/ml总IgEELISA:参考范围>参考范围<参考范围：：可能存在过敏反应一般无过敏反应特异性IgE：EUROLINE•简便和快捷的实验操作•仅需少量样本(过夜温育)•结果基于广泛应用的EAST分级系统•通过EUROLineScan程序实现结果的自动判读EUROLINE检测系统颜色反应底物膜条

色原抗原提取物特异性IgE：EUROLINE

温育AP标记二抗AKP清洗3x5min

60min二抗反应

清洗3x5min

10min底物温育自动化判读或肉眼观察60min未稀释过夜1:11稀释类别浓度[kU/l]sIgE水平临床意义0<0.35未检出不过敏10.35-0.7低较敏感20.7-3.5中有临床症状33.5-17.5高重417.5-50很高（+）很重550-100特高（++）特重6>100特高（+++）特重特异性IgE分级标准及临床意义•结果判读:EUROLineScan特异性IgE欧蒙印迹法自动化IgE名称/商品名货号检测内容检测项目特点吸入及食物组合DP3713-1601-4E尘螨组合1（屋尘螨/粉尘螨)、猫毛、狗上皮、屋尘、蟑螂、霉菌组合1（点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉）、树组合2（柳树/杨树/榆树）、矮豚草、艾蒿、葎草、牛奶、鸡蛋白、花生、海鱼组合1（鳕鱼/龙虾/扇贝）、CCD标记物、质控带10项吸入、4项食物、CCD、指控带（14项）精简最常见的食物及吸入过敏原小蒙星DP-3713-1601-5E尘螨组合1（屋尘螨/粉尘螨)、猫毛、狗上皮、屋尘、蟑螂、霉菌组合1（点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉）、葎草、普通豚草、艾蒿、牛奶、鸡蛋白、花生、黄豆、蟹、虾、海鱼组合1（鳕鱼/龙虾/扇贝）、CCD标记物、质控带9项吸入、7项食物、CCD、指控带（16项）儿童相对常见过敏原吸入组合DP-3116-1601-2E树组合2（柳树/杨树/榆树）、矮豚草、艾蒿、尘螨组合1（屋尘螨/粉尘螨）、屋尘、猫毛、狗上皮、蟑螂、霉菌组合1（点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉）、葎草、CCD标记物、质控带10项吸入、CCD、指控带（10项）常见吸入过敏原食物组合DP-3414-1601-2E鸡蛋白、牛奶、花生、黄豆、海鱼组合1（鳕鱼/龙虾/扇贝）、淡水鱼组合1（鲑鱼/鲈鱼/鲤鱼）、虾、蟹、CCD标记物、质控带8项食物、CCD、指控带（8项）常见食物过敏原定制组合1DP3713-7E尘螨组合1（屋尘螨/粉尘螨)、猫毛、狗上皮、屋尘、蟑螂、霉菌组合1（点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉）、葎草、普通豚草、艾蒿、牛奶、鸡蛋白、海鱼组合1（鳕鱼/龙虾/扇贝）、CCD标记物、质控带9项吸入、3项食物、CCD、指控带（12项）跟据客户需求定制过敏原优敏组合Q1：TIgE&sIgE关系

总IgE:结果解释1.总IgE超出参考范围大多数是由于过敏反应导致•例外:寄生虫病;免疫抑制;HIV;重度烧伤2.临床相关特异性IgE结果•与总IgE相关的特异性IgE浓度越高，患者临床过敏反应的可能性就越大.特异性IgE总IgE特异性IgE总IgE5IU/ml(kU/l)200IU/ml总IgE:结果解释举例

患者1特异性IgE总IgE5IU/ml(kU/l)25IU/ml患者2总IgE浓度与特异性IgE水平关系——并不存在必然相关性约20-30%超敏疾病患者特异性IgE可能较高，但总IgE可维持正常，甚至低于几何均值。如患者仅对牛奶高度过敏，其特异性IgE为18kU/L。对于特异性

IgE而言，该结果已属于严重过敏（IV级）的范畴。从理论上讲， 该患者的总IgE也应该为18kU/L。而对于总IgE来说，这个结果 是很低的；总IgE升高并不一定是超敏反应，而过敏患者总IgE也不总是一定升高。这一要点在评价总IgE检测结果时非常重要。Q2：CCD？何谓CCDs?CCD是“CrossreactiveCarbohydrateDeterminants（交叉反应性碳水化合物决定子）”的英文缩写.该结构为结合于糖蛋白N末端的多聚糖。依据糖基化作用的不同而产生不同的结构。举例:MMXF(Manα1-6(Manα1-3)(Xylβ1-2)Manβ1-4GlcNAcβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc)CCDs在自然界中的存在?CCDs存在于多种植物性或动物源性的过敏原中。由于结构的相似性导致一些独特的交叉反应出现。典型含CCD结构的过敏原:•植物花粉•植物性食物•植物乳胶•昆虫毒液抗CCDIgE结果的临床价值?大部分糖蛋白仅含有一个IgE结合的多聚糖，因此无法促进结合有IgE抗体的肥大细胞表面受体形成二聚体化，进而无法活化肥大细胞发生脱核及释放组胺的作用，因此对于仅为抗CCDIgE抗体阳性的患者而言往往无临床症状的表现。在何种情况下应排除抗CCDIgE的干扰?••当体外实验结果与临床症状或皮试结果不符的情况下。当某一患者出现多个特异性IgE结果阳性时。举例:••••花生:特异性IgE阳性但并不表现出临床症状出现多个食物相关的阳性结果但缺乏临床症状表现.植物乳胶:针对花粉敏感的患者抗植物乳胶阳性，但无相关接触史。昆虫毒液:针对蜜蜂和马蜂特异性IgE阳性的患者可能存在交叉反应。••1715例体检人群的问卷统计及sIgE比较，存在不符合现象。CCD-IgE是引起sIgE检测交叉反应的重要因素，干扰血清sIgE检测结果，导致血清sIgE检测与临床症状不符合。

EUROIMMUNEUROIMMUN研究背景：1个病人皮试和血清检测结果不相符，分析研究了造成不符合的原因，评价CCD在其中的作用。实验方法：用已知碳水化合物结构的糖蛋白做抑制实验。用糖蛋白做和血清结合，同时做过敏原提取物和血清结合。共分析了428份结果，最终确定CCD引起假阳性的原因。EUROIMMUN独家包被有CCD指示带CCD是“交叉反应性碳水化合物决定因子”CCD存在于多种植物性或动物源性的过敏原中，由于结构相似性导致一些独特的交叉反应出现解释交叉反应的假阳性结果CCDQ3：食物不耐受&食物过敏EUROIMMUN食物过敏vs食物不耐受EAACI：欧洲变态反应与临床免疫学会食物过敏vs食物不耐受食物过敏：免疫介导；

如IgE免疫球蛋白食物不耐受：非免疫介导； 如酶促作用、药理作用

EAACI：欧洲变态反应与临床免疫学会

EUROIMMUNEUROIMMUN食物过敏vs食物不耐受美国变态反应和免疫学会及国立卫生研究院（NIH）定义：食物不良反