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B-葡糖苷酶（纤二糖酶）测定方法

（总2页）--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小-试验二B-葡萄糖苷酶（BG；EC）活性测定新鲜土样比色法的原理：以对硝基苯-B-D-吡喃葡糖苷为基质，水解产生对硝基酚，比色测定（硝基酚比色法）。1.配置溶液：（1） 改进的通用缓冲溶液（MUB）贮备液：三羟甲基氨基甲烷（CHNO即Tris）、4113马来酸（CH0）、14g柠檬酸（CH0）和硼酸（HBO）溶于500mlNaOH溶液444 687 3 3中，用去离子水稀释至1L，于4°C下贮存。（2） pH值的MUB缓冲溶液：在继续搅拌下，在200mlMUB贮备液中分别滴加HcL或NaOH至溶液pH值为，去离子水稀释定容至1L（3） 4-Nitrophenyl-beta-D-glucopyranoside对硝基酚-B-D-毗喃葡糖苷（PNPG）溶液［CHN0=］：PNPG溶于40mlMUB溶液（pH为）中，用相同pH值的缓冲1215 8液稀释至50ml，于4°C下贮存。（4） Cacl2溶液（）：取无水Cacl2加入1L的容量瓶中配置22（5） Tris缓冲液［c（CHNO）=,pH值］:g三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶于800ml411 3去离子水，用NaOH调节pH至，去离子水稀释至1L（6） 标准对硝基苯酚溶液：溶解对硝基酚于400ml双去离子水中，定容到500mL,保存于4度，用时再稀释10倍。稀释后为。（一般需1000ppm）2.试验过程⑴取1g新鲜土样（＜2mm）于100ml三角瓶中，加甲苯，通风橱10min后，4mlpH为的MUB溶液和1mmPNPG溶液，盖上瓶盖，充分混匀，在37°C培养1h。⑵加1mlCacl2溶液和4mlpH值的Tris缓冲液，摇匀，迅速用快速滤纸过滤，滤液在400nm处比色测定。做空白对照时，可在培养结束后，加Cac—溶液和tris缓冲液之前加入1mL缓冲液（代替1mL底物）溶液。每个样品必须做一个空白和三次重复。（3）标准曲线：吸取0，，1，2，3，4，5，6ml于100ml容量瓶中，加去离子水稀释至5ml，然后加1ml氯化钙溶液和4mltris溶液，充分混匀后定容50ml，过滤，400nm处比色测定结果计算B-葡萄糖苷酶活性（|1g对-硝基酚.）=CV/dwt

式中：C表示样品对-硝基酚的含量（|1g/ml）；V表示土壤溶

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