普通生物学实验指导2013版试用

第一部 基础实 实验一显微镜的结构和使用方 实验二细胞的结构与代谢产 实验三细胞的多样 实验四植物根和茎的结 实验五植物常规压片技 实验六植物叶的结 实验七叶绿体色素的提取、分离和理化性 实验八烟草叶片的组织培 实验九的解 第二部 选做实 实验十家兔的解 实验十一植物花的结构类型及花序类 实验十二植物的结构及胚的形成和发 实验十三植物营养的实验十四植物果实的结构与类 实验十五血细胞计数及大小测 实验十六血细胞种类的观察及血型鉴 实验十七红细胞膜通透性观 实验十八植物组织的水势和渗透 实验十九花粉萌发及花粉管生长观 实验二十番红—固绿二重染制作百合子房永久切 实验二十一用PCR扩增的方法鉴别不同物种来源的肌 实验二十二家鸡的解 附 附 生物绘图 附 常用显微制片 附 动物解剖的基本知 实验一一、目的与要(一)(二)二、材料与用三、实验操作与观(一)微镜，并学会最基本的和保养方法。镜等。根据其成像技术可分为相差显微镜、显微镜、微分反差显微1又可分为扫描电镜、透射电镜、高压电镜、隧道电镜等。(二)机械部分：用于装置与调节光学部分。包括以下结构（1.14510×，40×，100×，载物台：用于放置标本有一镜台孔，台上有一标本夹，可夹固，载物台纵向移动手轮（Y轴载物台横向移动手轮（X轴图 NikonYS100显微镜机械部光学部分：包括成像的光学系统(目镜、物镜)和照明光学系统(1.2目镜：一般光学显微镜均有2—3对放大率不同的目镜，上面分别标有5×、10×、16×，可根据观察时的不同要求，更换放大率不同的目镜。目4×、10×(低倍镜)、40×(高倍镜)100×(油镜)10×40400400聚光器位于载物台下由一到数块透镜组成用于将光线在被物光

目图 NikonYS100显微镜光学部(三)5—6cm用10×物镜对焦 将10×物镜对准镜台孔（当旋转到位时，物镜会自动卡位） 时调节聚光器的垂直位置等，直到整个视野中得到均匀、明亮的光度为止 （屈光度调节环（槽40×4×10次，正确调节视度。到视野。(1)四、思(一)(二显微镜的粗调焦手轮、微调焦手轮如何协调使用？如微调焦手轮不显微镜术数值孔径在决定聚光器和物镜的效率时，是个重要的因素。它用公式表示：N.A.=nsinαn表示物镜和标本间媒介的折光率（空气=1，油≈1.5）10倍，目镜视场直径18mm实际视/焦焦深（μm）=nλ/(2×N.A.)+n×1000/(7×M×N.A.)上式为假定人眼辨率为2时，焦深的近似值。M实验二一、目的与要二、材料与用洋葱鳞茎紫鸭跖草叶片红辣椒(或胡萝卜)马铃薯块茎花生(或神经节制片、大白鼠肝脏制片、马蛔虫制片、柿胚乳细胞的永久制片。蒸馏水、碘一碘化钾溶液、苏丹Ⅲ溶液、牙签、0.1%甲基蓝染液、0.9%氯化钠溶液、0.02%B染液、甘油、载玻片、盖玻片、吸詹纳斯绿B50mgB5ml（30－40℃）1％。三、实验操作与观(一)植物细胞的基本结1~2发现有的细胞核位于细胞的，仔细思考这是为什么？在观察过程中，有染色0.盖玻片一侧，从另一侧用小片吸水纸吸引，将染液引到标本上，1~2（1钾溶液染色，染色后，细胞核呈深黄色，细胞质呈淡黄色。叶绿体：是含有叶绿素的绿色，能进行光合作用，主要存在于植物体的绿色部分，尤其叶片中。取玉簪叶片片横切，取叶肉部分做同，而呈黄色、橙色或橙红色，常存在于成果肉细胞或黄红色花瓣里。白色体：是不含色素的最小，无色，多存在于细胞或不细胞壁明显增厚而细胞腔很小，其内的原生往往被染成深色或在制片的为胞间连丝。它们把相邻两细胞的原生联系起来。撕去辣椒果实的表皮一块，并从果肉一侧面刀片刮取果肉细胞，制(二)植物细胞的后含细胞在生长发育以及成过程中，由于代谢活动而产生的一些代谢产用徒手切片法（119页）将马铃薯块茎切成小薄片，在载玻片上制成临视野中可以看到不同大小的颗粒团，选择颗粒稀疏而且互不处，用高倍镜观察。淀粉粒卵圆形，大小不等并且有偏心轮纹（图3，需要调节光亮度取花生(或向日葵)去皮用徒手切的方法切成小薄片制成临时脂肪滴可被染成橙红色（4许多种类的果实和中常含有贮藏的蛋白质，常以无定形或结晶状态取蓖麻去皮，切成小薄片，浸入盛有蒸馏水的培养皿中，用镊子选临时装片。观察时，仍先用低倍镜，选择较薄的地方移至视野。观察菜？，（图5，在糊粉粒中可以看到圆形的或晶体的结构。为清楚地区分糊粉粒和20分钟，待组织透明，片切成小片制成装片，在显微镜下观察可见闪亮的立方形晶体。pH值十分敏感，在酸性条件下呈红色，碱性时呈蓝色，可使植物的者在镜下可见有色颗粒，而前者是均一的。紫皮的洋葱鳞茎，则更为方(三)动物细胞的结力过猛)0.9%氯化钠0.1%甲基蓝染液染色，方法同前。如此，可将细胞染成浅蓝色，核染色较深。注意染液不可加得太多，以免妨碍观察（2用滴管吸取10%詹纳斯绿B染液，滴1－2滴于干净的载玻片，同前刮取口腔上皮细胞置于染液中，3710－15min，然后加上盖玻片，高尔基体（示范取脊神经节镀银法制片，在低倍镜下可见淡黄色神经细胞有一的网状结构，这便是高尔基体（图6，在没有看到细胞核的细胞中，高尔基中心体（示范中心体包括中心球及中心粒，取马蛔虫制片，在低倍镜上观察可见有许多图象，在有丝中期，细胞长轴两极各有一个不的球形透两极均看不见(8)。肝糖原（示范1-2个核，细胞质内有许多红色颗粒，即肝糖原，肝糖原有时偏于细胞一侧(9)五、作2-32-32-3六、思实验三一、目的与二、材料与用片、神经细胞分离装片、哺乳动物切片及涂片、人血涂片以及高尔三、实验操作与观（一）分生组织具有细胞的能力，它们位于植物体生长的部位，如根尖、同构成了根尖的分生区。分生组织细胞能力强，细胞体积小，多为等直薄壁组织细胞的特点是：细胞较大，壁薄，原生中有大液泡，一般另一种是成对的肾形细（组成气孔器有明显的叶绿体也有细胞核。输导组织的功能是水分、有机物质。输导组织的细胞往往集在一起筛管旁有小形长细胞为伴胞，筛管作用为营养物质。机械组织的作用主要是支持，它使植物有机体及其更具坚固性和稳（二）上皮组织细胞（单层扁平上皮（H·E染色单层柱状上皮（青蛙小肠、H·E染色纤毛上皮（气管内皮、平滑肌分离装片（小肠壁平滑肌细胞呈长梭形，细胞核椭圆形，位于纤维的最宽部份，大细胞全长的中段，不同的平滑肌纤维长度差异较大，20－500m不等。骨胳肌（铁矾苏木精肌纤维内有大量卵圆形细胞核（可多至几十个，上百个）上闰盘折光强，，是心肌纤维相互嵌合的连接线。猪（猫）肝细胞多边形的较大细胞，胞有一圆形核，有时可见2、3核的多核现象1／40。色素细胞（鱼鳞不规则形细胞，有数个短而粗的突起，内有圆形核（不易看清软骨组织细胞（透明软骨装片：观察切片及装片，有短粗的头（核物质于四、示四、作(一)(二)五、思(一)(二)实验四一、目的与要（一）了解双子叶植物及叶植物根的初生结构和次生结构（二）了解双叶子植物及叶植物茎的初生结构和次生结构二、材料与用(一)取蚕豆幼根横切制片(10)上占有较大比例；皮层最外层细胞与表接，排列整齐，为外皮层；靠近1～2（二）太明显。注意中柱鞘的形成层产生的射线比较宽。根毛区域残余的表皮下，可看到2-3层皮层细胞，细胞壁被栓质，(三)(13)：髓：在茎，由一些较大的薄壁细胞组成，具有细胞间隙(四)化形成次生木质部细胞，但后者要比前者分化形成的多。（五）叶植物根的结再加粗，所以只有初生构造。取玉米根横切制片由外向内观察(11)：导管口径较大。在维管柱有薄壁细胞构成的髓(六)叶植物茎的结制片(14)，在低倍镜下由外向内观察可见：胞是细胞，旁边的较大细胞为副卫细胞。若选新鲜材料，可以直接刮取束较小；在茎的部分分布较少，但每个束较大，在横切片中，皮层、维管柱及髓之间没有明显界限。每个维管束由三部分组成（153～4个导管组成，染成红色。四、示（一）（二）取椴树或木槿茎横切制片从外向内观察，可见如下结构(②木栓形成层细胞由外皮层细胞恢复能力以后形成的木栓形成层细胞在横切面上扁平，细胞质浓，只有一层细胞。向外分化形成木栓层，向内分化形成栓内层。1～2层，细胞质较浓，一般染色较深。变化不大所以看上去象有4～5层之多形成层细胞均较小近方形。髓：在茎的，由薄壁细胞构成，有时某些细胞中亦能看到晶体(三)被染成红色，导管的螺纹清晰可见，注意螺纹形状(17)。五、作(一)1/4(二)1/4(三)1/4(四)1/4六、思(一)(二)双子叶植物根与叶植物根、茎在结构上有何区别(三)（四）双子叶植物茎 叶植物茎在结构上有何主要区别实验五植物常规压片技验目观察有丝过程中的动态变化验原具有自我能力是生命的一个基本特征。单细胞生物可以通过细胞分裂直接自身，而多细胞生物从卵开始，经过有丝使细胞不断增殖并经过一系列复杂的分化过程形成新一代。对于多细胞生物来说，无论是体细胞还是生殖细胞一般都是通过有丝实现细胞增殖的，而生殖细胞在形成配子时才经历减数的细胞形式。一般来说，只要是能够进行细胞的植物组织或是单个细胞都可以作织内不断进行着细胞。只要我们适时取材、并加以固定、解离、染色等处理后制成玻片标本，即可以利用显微镜对有丝分离和进行观验用具及验方球茎接触水面，26℃1-2cm死，使蛋白质沉淀，并尽量使其保持原有状态。将生活的细胞固定义在实践中，人们摸索出不同植物的根尖在某时刻会出现有丝高峰，在期取材效果最佳。下表列出了若干植物根尖取材的最佳时间表 几种植物根尖的最佳取材时数目玉米(Zea豌豆(Pisum10:00-蚕豆(Vicia小麦(Triticum10:00-水稻(Oryza15:00-洋葱(Allium10:00-11:00,15:00-大蒜(A.10:00-11:00,15:00-莴苣(Lactuca10:30-牡丹(Paeonia9:00-芍药(P.14:30-8:00-①carnoy：1+315-20min1h24h，70%乙醇中保存，4℃冰箱放置可以长期保存。固定后的根尖是保存在70%乙醇中的解离时先用吸管吸出70%乙醇℃10min。Schiff试剂是孚尔根反应（Feulgenreaction）的染色剂。他的基本原DNA嘌呤除去从而使脱氧核糖的醛基游离游离的醛基再与Schiff试剂反Schiff试剂的配制方法：将0.5g的碱性品红溶于100ml煮沸的蒸馏水中，充分搅12-24h一般情况下经过固定的材料马上染色效果较好染色清晰而且易于分散。若经体积分数70%的乙醇长期保存后，细胞质也容易，并且染试剂，室温下暗反应10-15min。具体的染色时间要视根尖程度而定。需要在实验中摸索我们推荐法供大家参考用一个双面刀片插到一般来说在制成的玻片标本中染色清晰而且分散较好的中 ①在一张制片中有较多的处于期的细胞②分散而不④较深，细胞质不或很浅，背景清晰无过多杂质有丝各期观有丝的全过程可分为间期、前期、中期、后期和末期等阶段， ，（胞核内出现了不均匀的状态（即细微的的丝以后出现的小块或颗粒（丝缩短变粗逐渐成为形态清楚的但成对现象不易观察到。同时核膜、核仁存在或。，（，③中期：纺锤丝明显可见到细胞，着丝点排列在赤道板上，常呈弯曲状，并纵裂为两个染色单体。此时，仅着丝点连接，彼此松开，这时是观察的形态和数目的最好时机。， 间 前 前中 中 后后 末 末细胞的两极移动成为两组于是每个染色单体就成为独立的因此，每组仍具有与母细胞数目相同的。⑤末期移到两极后的成为密集的一团并逐渐变成细长而离散，的过程结束了。五、思洋葱根尖细胞有几条？各的长短和着丝点位置是否有丝哪个阶段对观察数目和形态最为有利参考文杨继等，植物生物学实验，：高等教育，2000张贵友等，普通遗传学实验指导，：，2003实验六一、目的与要二、材料与用三、实验操作及观(一)叶的初生保护组织——在表皮细胞之间有气孔器，气孔器是由成对的细胞和它们之间的开口共同组成的。细胞呈肾形（禾本科植物呈肾形，有细胞核，也有叶绿体，细胞的内壁略厚，两侧细胞之间的窄缝构成气孔器的开口。细皮细胞呈纵向排列，细胞整齐；气孔器除有细胞外，有时在其外侧还有(二)等几部分基本结构(20)，然后再转换高倍镜观察其详细结构。的细胞相对较小。在气孔器的下方，有较大的细胞间隙，称孔下室。2～3侧脉和细脉。先在低倍镜下观察叶脉的分布状况，高倍镜仔细观察主脉韧皮部。有的地方还可以观察到叶脉的纵切面,为什么？如何判断？(三)C4取玉米叶横切制片，观察如下结构(环”状结构，这种结构是C4植物的特征。C3图(四)针叶植物叶的结构（示范针叶植物具有早生植物的特征，取松叶横切制片观察(小的细胞。冬季取材松叶制片还可观察到气孔为树脂所闭塞，其作用是壁向内折陷，形成许多，增加了细胞壁表面积，有利于光合作用，细胞它们是子植物特有的组织。在维管束和内皮层之间的细胞为转输组织，由间的有关。五、作（一）（二）六、思（一）双子叶植物和叶植物叶的结构有何不同（二）C3植物和C4（三）实验七Ⅰ．提一、实验目二、实验原叶绿体中含有绿色素（ab）和黄色素（包括胡萝类色素都不溶于水，而溶于，故可用乙醇、乙酸乙酯等提三、实验材料与用仪器设备天平、研钵，漏斗、三角瓶、剪刀，薄层色谱硅胶预制（V/V四、实验步（一）2研钵中加入少量CaCO3（绿豆粒大小2~3ml95%乙醇，研磨至糊状，再加5ml95%乙醇。取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，残渣再用5ml95%乙醇冲洗，直至滤纸和残渣中无绿色为如无新鲜叶片，也可用事先制好的叶干粉提取，先用105℃杀青，再在80℃下烘干研成粉末密闭用时称叶粉1g放入小烧杯中加95%10-15ml（二）0.5cm到分离的各种色素；叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶黄素为鲜并计算出各色素的Rf值。Rf图1实验装 图2实验结一、实验目

II.二、实验原

+H

+CH3OH+20

叶绿素中的镁易被环境中的H+三、实验材料和用醋酸-50%100ml6g，再加蒸馏水4倍稀释而成。KOH-甲醇溶液：20gKOH100ml甲醇中，过滤后盛于塞有橡皮四、实验步（一）11140min（二）110ml3ml浓的叶绿体色素乙醇提取液，在直射光（三）皂化作用（绿色素与黄色素的分离在做过荧光现象观察的叶绿体色素乙醇提液的试管中，加入1.0ml20%KOH-（2）加入3ml苯，摇匀，再沿试管壁慢慢加入1ml左右蒸溜水，轻轻混ab（以（四）H+和Cu2+对叶绿素分子中Mg2+的取代作5ml5ml5%l变化。水浴加热，5分钟左右观察并记录叶片颜色的变化，半小时后再次观察，直III叶绿素含量的测一、实验目二、实验原根据Beer-Lambert定律，一束单色光透过溶液时，光被吸收。吸收的程度即吸光度A与其中溶质浓度CL成正比，即：A=式中：E为吸收系数。吸收系数常用两种方式表示，即摩尔吸收系数和混合液在某一特定波长下的总吸光度等于其各吸光组分在此波长下吸光度的综合，即吸光度具有加和性。所以，只要在三个特定波长下测定叶绿A、b卜素的干扰。根据Arnon法，叶绿素a、b的80%提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的吸光系数分别为82.049.27，在波长645nm下分别为16.7545.60，可根A663=82.04Ca+ A645=16.75Ca+ （1的吸光度，Ca、Cbab的浓度，以mg/L为单位。Ca=12.72A663- Cb=22.88A645- 将CaCbCT=Ca+Cb=20.29A645+ Lichtenthaler等对上述Arnon法进行了修正，提出了80%提取液中Ca=12.21A663–2.81 Cb=20.13A646–5.03 1000A470–3.27Ca–CX·C 式中：Ca、Cbab的浓度；CX·C为类胡萝卜素的总浓度；A663、A646和A470分别为叶绿体色素提取液在波长663nm、646nm470nm下的吸光度。有差异，计算公式也有所不同。叶绿素a、b在95%乙醇中最大吸收峰的波长分别为665nm和649nm，类胡萝卜素为470nm，可按上述方法列出以下关系Ca=13.95A665– Cb=24.96A649– CX·C

1000A470–2.05Ca–

三、实验材料与用0.01g95%乙醇（或80%四、实验步1g波长665nm649nm和470nm下测定吸光度光光度计适合测定的吸光度值0.4-0.8，超出范围时需对样品进行稀释。五、实验结果计算与（mg/L

仪器型号 量量吸光度 123注意事1在低温下发生皂化反应的叶绿体色素溶液易而出现白色絮状物，溶液浑浊，且不分层。可激烈摇匀，放在30~40℃水浴中加热，溶液很快分层，絮状物，溶液变得清澈透明。3、叶绿体色素提取液不能混浊。可在710nm或750nm波长下测量吸光a5%，否则应重新过六、思用不含水的如无水乙醇、无水等提取植物材料，特别CaCO3实验八一、目的与学习用生长调节剂对植物发生的诱导方法二、实验原（或细胞的技术植物组织培养的理论依据是植物细胞具有全能性。生脱分化成为重新具有能力的细胞并能重新生长发育成完整的植株。愈伤组织是指一个离体的细胞、一块组织或一个的细胞，通过脱分化不断、增生子细胞，这些细胞快，结构疏松，颜色浅而透明，逐 三、材料和30ml500ml100ml培养瓶、平皿膜、高压橡皮筋、试纸（PH5.4-7，报纸等。试剂：MS培养基、0.5mol/LNaOH、1mol/LHCl。0.1mg/mlNAA、0.1mg/ml6-BA、0.1mg/ml2,4-D四、操作步（一）诱导培养基配制（见表MS储液（储液配置见附表建议加完大量元素后先加水（3/444瓶培养基（1组）的配置方案。 表 诱导培养基配制 成 实际称取大量元素 蒸馏 微量元素 有机成分 铁盐 蔗

pH 琼 （3%（m/v实验设计中包括1个对照组和3个处理组对照组（t0）30mlMS。诱导生根组（t1）30m+0.03ml6-BA储液+0.15mlNAA储液。诱导生芽组(t2)30m+0.15ml6-BA储液+0.03mlNAA储液。诱导生愈伤组(t3)30MS+0.03ml2,4-D促进植物生长；乙烯抑制植物生长；脱落酸促进成熟NAA2，4-D属于人工合成的生长素类。6-BA属于人工合成的细胞素类NAA可用1-2ml0.1mol/LNaOH助溶，加水至终浓度为0.1mg/ml。高温高压下稳定，4-5℃暗处保存于棕色瓶。细胞素6-BA先加0.5或1mol/L的HCl助溶，加水定容至终浓度调pH=5.8pH（0.8%（m/v）（二）12015min30min用肥皂洗手和手腕。进入无菌间，先用70%或新洁尔灭喷手。ba 图 不同生长调节剂对烟草叶片生长的诱导结a、接种一周时的生长情况；b、接种4周诱导生根组；c4周诱导生芽组；d4周诱导愈（三）接坐在超净工作台前用70%棉球擦拭双手培养瓶和超净台面待手上的干了，点燃灯将镊子剪刀在灯外焰上灼烧冷却后剪取叶片约1平方厘米，注意：无菌操作时不要，以免污染。用对双手时，务必待彻底挥发后再靠近4周，25℃，16870%-80%3六思考题6-BA、NAA实验九的解一、目的与要1、认识的内部结构，从而了解两栖纲动物的一般特征2、学习解剖动物的方法进而了解动物体各系统的整体和局部的关二、材料与用、、三、实验操作及观(一)取(Bufobufo)观察体分为头躯干和四肢体表皮肤露，

70四肢：前肢四指，雄第1~3指基部有黑色椭圆形婚疣，交配时处死之前可观察背侧两腿基部有一对后淋巴心在微微跳（图淋巴心属淋巴系统。(二)穿刺法，即用解剖针从的枕骨大孔插入，破坏其延脑致死。具体左手执，以左手食指与中指两前肢，用第四指与小指尖向前插入颅腔，并用针搅动破坏其脑，然后将针抽回,再由枕骨大孔处向10g/LMS-222（鱼安宁）的水溶液，将10-15(三)将处死后放在解剖蜡盘中，用剪刀沿腹壁中线稍偏右侧剪开腹壁，官系统（72囊中，与体腔完全。心脏可分为以下四部分：①心室：一个，，壁较厚④静脉窦：在心脏背面；为一呈三角形的囊，两前角各接受一前大静为左右三支，由内向外为（73脉窦进入右心房（74肝静脉：，从肝脏通出，开口于后大静脉接近静脉窦的部位。4~6根，每根各自通入后大静脉。生殖静脉：雌体为静脉，于一对。雄体为静脉，于一对③前点的地方，便与腹静脉汇合流入肝。成年为肺皮呼吸，肺呼吸的有鼻腔、口腔、喉气管室和肺（77：鼻腔与口腔呼吸时空气自外鼻孔进入鼻腔经内鼻孔而达口：的消化系统由消化道及其附属的组成，消化道包括口腔、食道、胃、肠和泄殖腔等；包括肝脏和胰腺。(1)①口腔：用剪刀剪开的口角，使口张大，令口腔全部露出，可观察11对孔，与中耳腔相通。喉门：舌后方腹面隆起部分，有一裂缝即喉门。声囊孔：在多数种类雄的口腔底部，耳咽管稍前方，有1对小孔即④肠：的肠分小肠与大肠。小肠又由十二指肠和回肠组成，起于胃大肠的部分为回肠。大大而陡直，开口于泄殖腔。⑤泄殖腔较大肠短小为汇纳输尿管和(雌)的管道。泄殖腔的腹面有开口。为雌雄异体，观察时可互换不同的解剖材料75①肾脏：为1对暗红色扁平，位于体腔的后部，贴近脊柱的两侧。一条细长之管道，为的。一总输尿管后输入泄殖腔背壁，此管兼充之用。与季节的不同而有差异。自发出的输精小管与输尿管相通。化很大，生殖季节脂肪体的体积很小，冬眠时期，其体积很大。：⑥毕氏管器前方有一绿豆大小，形状不规则的，即毕氏：雌性泄殖系统雌的排泄系统与雄相似但其输尿管只作输送尿液之用。生殖系统包括1对，1对和（图76极度膨大，内有许多黑色球形卵，外壁向外有许多。底的旁边，状似漏斗；后端膨大成囊状，称为 ”开口于泄腔的背面。成熟之卵由壁破裂而出，经体腔从喇叭口送入，在输卵管中包上一种胶质的膜，再输入，俟积累有相当数量时再由送入泄殖腔，排出体外。当产卵时雄性抱住雌性，于水中，进行体外四、示(一)在显微镜下观察的皮肤切片，可见皮肤由表皮和真皮组成，皮肤下(二)取刚刚处死的，剥去皮肤，置于解剖盘内。观察教师用电刺激有关()撕去皮肤的，按图识别每块肌肉，找出坐骨神经的大腿部分。用玻璃针剥离，剪去神经干上的所有分支，然后从脊柱根部将坐骨神经剪下五、作注解剖六、思第二部分选做实验实验十一、目的与要（一）了解动物体各系统的局部与整体的关系（二）二、材料和用三、实验操作及观胎生和哺乳，第二、具有发达的神经系统和感觉，第三、恒温，第四、整个机体代谢系统的水平最高，消化系统分化程度高，发达；呼吸器（一）家兔（Oryctolaguscuniculus(Linnaeus)）的身体分为头、颈、躯干、尾（二），血管充盈明显，然后取注射器吸入10ml空气，沿血管向心方向自耳根，（1）（2）（三）离。若有部位，应及时用棉线结扎或用止血钳止血。的毛，然后用镊子自开口稍前处，提起皮肤，沿腹中线自后向前将皮突，然后沿肋骨后缘向两侧横向剪开，出腹腔，同时观察腹腔内各锁骨及肋骨上的肌肉，完全出胸骨；再沿胸骨一侧用骨剪剪断肋骨；然端剪断，方可打开全部胸腔。注意，剪至第一、二根肋骨时要十分，不大动脉弓为一粗大的血管由伸出向前转至左侧后折向后方。肺动脉：由发出，随后即分为两支，分别进入左右两肺弓由发出，稍前伸即向左弯折后方。在贴近背壁中线，经过胸部86右总颈动脉。右锁骨下动脉：到达腋部时可成为腋动脉，上臂后形成右①2cm③前肠系膜动脉：位于腹腔动脉的下面，由前肠系膜动脉再分支至肠的各部和胰腺等上。④肾动脉一对右肾动脉肠系膜动脉的上方左肾动脉在后肠系⑤动脉：一对，雄性分布到上；雌性分布到上⑥后肠系膜动脉：为背大动脉后端向腹面偏右侧伸出的一支小血管，⑨静脉系统管汇合而成（87内颈静脉：位于，细小，汇集脑颅、舌和颈部的血液流回心脏（此③肝门静脉肝门静脉汇合内脏各的静脉进入肝（收集胰脾、（1）门（88近在两侧下颌的内表面位于下颌的一对肌肉的下面必须将肌肉切开，挖下去才能找到（89、90在环状软骨（中间最大的一块）官，位于心脏两侧的胸腔内（91。的扁圆形的肾上腺，每侧的肾都有一条白色的输尿管通向。为一个囊状体，位于腹腔的后端，雄兔的位于直肠的腹面，雌兔的位于直肠和的腹面有（♀）或尿生殖道（♂）通出体外（图92、93。。雌兔有一对，卵圆形，大小略近于黄豆，位于腹腔背壁两侧开口于的外侧开口处膨大而有的喇叭口前端细小而弯曲，后端膨大而成。兔的胚胎在中发育，左右的后端合并成。的末端与合并而成尿生殖道，开口于的前方雄兔的为一对白色的卵圆形的。在繁殖期下降到阴囊中；非繁殖期则缩入腹腔内。端部及背面紧贴着一些细管盘曲成的，由伸出的白色管即为。经后面进入而通体外。四、思（一）（二）哺乳动物后肢产生的代谢废物通过哪些血管和排出体外（三）绘液循环（双循环）示意实验十一一、目的与要二、材料与用三、实验操作及观(一)25观察完以上部分后，沿花的腹中线将花萼、花冠，或解剖针在培养皿中解剖开，观察群和群。群：串红4条，二强花丝附在花冠上，花药两室，两，此二强呈弧状向下弯曲，这样有利于虫媒传粉。另有两条小而的群：在花的，由子房、花柱和柱头三部分组成。子房上位，24室，称为子房四深裂，在每室内有一个(二)3-4一般为不育花，花形为舌状或近管状，花冠较长；花序一般为可育化，，，冠愈合略有残存；花冠发达全部亦，残存子房、花柱、，，为聚合花药；1个，子房下位，由2个心皮构成，一室一胚珠，基底胎座，柱头二裂。(26)。(三)一小穗解剖观察。(27)2可育花和不可育花：颖片以内有3-5朵互生花，但一般仅基部2-3朵花为可育花，能正常结实；上部的几朵花发育不完全，无雄、，为不可和：在可育花中，每朵可育花有3个和1个，柱头羽毛状。不可育花无雄、。和(四)花的结构类型（示范）两性花：一朵花中的雌都发育，如油菜花单性花一朵花的和只有一个发育如黄瓜花和杨柳花)的类型(分离多数植物的是分离的一般在同一朵花中花丝是等长的，但也有长短不等的。如十字花科植物的是4长2短，叫四强，唇形科和玄参科植物的多2长2短，叫二强。二体；花丝分为两组，9个连合，1个分离，如豌豆、洋槐、紫多体：花丝连合成多束，如蓖麻、金丝桃等的类型(单：由一个心皮向内折合形成。如豆科植物离生由数个心皮形成彼此分离的如草莓牡丹和飞燕合生：由数个心互连合形成的，如棉花、百合等子房的位置((胚珠在子内着生的地方叫胎座。胎座一般都发生在心皮的边缘相结：边缘胎座由单心皮构成子房一室胚珠着生在心皮的腹缝线：：侧膜胎座由两个以上的心皮构成各心皮边缘相互合生胚珠：中轴胎座：由2个以上的心皮构成，各心皮的一部分卷向子房室内在连合形成隔膜分为与心皮数相等的室数胚珠着生在中轴上，特立胎座由两个以上心皮构成可能是由中轴胎座演化而来，隔膜和中轴的上部，子房一室，但中轴下部仍然存在，胚珠着生在(五)花程式（flowerformula）是由简单的符号及数字写成一定公式以表示花P——表示花被，是拉丁文PerianthiumKKelch的缩写（CaCalyx的缩写表示花冠A——表示，是拉丁文Androecium的缩写G——表示，是拉丁文Gynoecium的缩写以数字表示花各部分数目写在代表字母右下方以∞表示数目在十个以上，或数目不定；以0表示区少或；之后，如果有三个123个表示每室胚珠数（12个数字（G；若子房下位，则写在G的上方如G；若子房半下位，则写成G（两性花的符号有时略而不写绍K、C、A、G，并在字母右下方写明数字以表示花各个部分数目。：苹果花*K(5)C5A∞G(5:5:：表示两性花；辐射对称；萼片5枚，合生；花瓣5枚，分离；多数，分离子房下位，由5枚心皮连合形成5个子，每室2个胚珠豌豆花：K(5)C1+2+2A(9)+1G1:1:，表示两性花两侧对称；萼片5枚，合生花瓣5枚分离排成三轮10枚，桑花：♂*P4A4；♀*P4G(21，子房尚未，二心皮合生，一室，1个胚珠。，P♂K♀CAG G：子房半下*或→ 0＋表示轮数或↖︶∞5、5：5:5心皮，5室，每花图式（flowerdiagram）即花横断面的投影图。系按花的各部分排列式，相互位置，形状及数目及胎座类型等实际情况绘制（花图式绘制规则：（六）无限花序(图32)：花序轴下部或周围的花先开放，然后逐渐向上或状排列。如天竺葵、葱、等。()，如玉米的雄花、水稻和珍珠梅等。复穗状花有限花序(图33)：即聚伞花序类，花序顶端或的花先成熟、先六、思何凤仙等，植物学实验，：高等教育，2000沈显生等，植物生物学实验，合肥：中国科学技术大 ，2003实验十二植物的结构及胚的形成和发一、目的与要(一)了解植物的结构(二)二、材料与用三、实验操作及观(一)双子叶植物无胚乳取浸泡过的蚕豆先观察外形（挤，可看到种孔，为珠孔发育而来。观察完外形将种皮剥落。双子叶植物无胚乳实验材料还可用花生。花生种皮薄，土红色；两片子叶肥大，胚位于基部，夹在两片子叶之间，胚也由胚根、胚轴和胚(二)双子叶植物有胚乳取浸泡过的蓖麻观察(图38)色海绵状突起，为种阜，可吸水，有利于萌发，种阜内侧就是种脐。种(三)叶植物有胚乳取小麦颖果()纵切制片在显微镜下观察(图39)下面为胚芽及其生长锥；胚的是胚轴；下部是突出的胚根；胚根外有一(四)1室在两心连的腹缝线处伸出一隔膜由于此隔膜不是心皮弯折形成的，串胚珠，为侧膜胎座(40)。，2荠菜幼胚纵切制片的观察荠菜幼胚内的两串胚珠将来要形成，为“反足细胞实际应认为是珠心增生组织的合子即在珠孔处开始发育，寻找不同发育时期的胚珠，观察荠菜胚的发育过程(41)，3基细胞为大型细胞以后又形成一列小细胞共同组成胚柄可将顶细胞经过多次细胞先形成球形原胚，以后继续分化出子叶和两片大的子叶；子叶之间有一小突起为胚芽。随着胚的形成，胚乳，被发育为种皮，整个胚珠形成四、示(一)取百合花药横切制片观察花药结构和花粉粒的形成(1、花药结构：成花药一般由4个花粉囊组成，左右各半，中间有：1-3绒毡层：是花药壁最内层细胞，细胞长柱状，核大，质浓，如同腺2体，形成花粉母细胞；花粉母细胞以后再进行第一次减数，形成二分孢子之后再进行第二次减数形成四分孢子体分离后形成单核花粉粒。质化加厚，所以又称为纤维层。绒毡层细胞随着花药的发育，一般逐渐。(二)取百合子房横切制片观察百合子房结构及胚囊发育(43)3胚囊的形成胚囊母细胞连续两次形成4个细胞随后近珠孔3个细胞，里边的一个形成大个单核细胞，即胚囊胚囊核此胚囊细胞连续进行三次细胞核而细胞质并不分2核、48核的大胚囊。胚囊的成熟8核胚囊两端各有4个核以后两端各有1核移至成为极核；近合点端的3核形成反足细胞；近珠孔的3核中间一个较大，发以后通过双作用，两个精细胞核及营养核进入胚囊，营养核；五、作(一)绘蚕豆纵切图(二)六、思(一)双子叶植物与叶植物在结构上有何异同(二)实验十三植物营养的一、目的与要（一）认识各种根、茎、叶的不同类（二）了解植物根、茎、叶后的形态结构及生理功能二、材料与用三、实验操作及观一些植物的营养——根、茎、叶，为适应环境条件在形态、构造或生理功能上都发生一些很大的变化，称为，这种的性状形成后，一（一）根的气生根：为不定根，生长在空气中，有多种不同功能攀缘根：常春藤长出的不定根，能分泌粘液，有固着作用呼吸根：海边红树林茎下部长出的不定根功能，兼有固着作用。吊兰气生根也功能。(二)茎的茎上面顶芽及螺旋排列的芽迹，说明它们是的茎。鳞茎是扁平或圆盘状的茎节间极度缩短顶端有一个顶芽、不定根及的鳞片，主要用于贮藏营养物质。根状茎：匍匐生长于土壤中，是很象根的一种茎。藕、芦苇、竹根状茎，具有节、节间及的鳞片，节间上还有芽，用于贮藏营养茎卷须：葡萄、黄瓜茎端，形成茎卷须，用于攀缘其它物体枝刺由茎成具有保护功能的刺如山楂皂荚等的枝刺(三)叶的2～3对小叶捕虫叶：猪笼草叶呈瓶状，顶部还有一小盖，用于捕食昆虫叶柄：新鲜水葫芦(凤眼莲)叶柄呈囊状，用于贮藏空气四、作将本实验所观察的营养类型按下表进行总五、思(一)营养的有何意义(二)举例说明什么是“同源”？什么是“同功实验十四一、目的与要二、材料与用实、果实、油菜果实、白菜果实、荠菜果实、独行菜果实、向日葵、荞三、实验操作及观皮为木质化硬壳；果皮内为，由胚珠发育而来，种皮由珠被发育而来。，房与花被或花托等一起形成的果实，如苹果、梨等。取苹果纵切观察，食用部分主要是花筒肉质化膨大部分，三层果皮被包在在里面(图，(二)苹果(5心皮合生)。2、聚合果：一朵花中有许多分离的心皮（，以后每个心皮均形成单个瘦果（图35，所以从本质上看，草莓果也是假果；从结构上看，称其为3()(36)，无花果，以肉质化的凹陷的花序轴为可食部分。(三)第一类为裂果，果实成熟实开裂开裂如豆科类植物的但荚果也有特殊情况有时不开裂如落花生；蒴果由两个或两个以上心皮组成的果实是合生发育而来的孔裂：在果实心皮顶部仅裂一小孔，如。第二类为闭果：果实成熟实不开裂瘦果：果皮与种皮分离，果内只含一枚，如向日葵、荞麦颖果：果皮与种皮愈合，果亦只含一枚，如玉米、稻、麦坚果果皮坚硬内含一枚如板粟外边为褐色坚硬的果皮四、作五、思(一)(二)实验十五一、目的与1、2二、实验原血细胞计数板由一块长约7.5cm、宽3.5cm的厚玻璃制成，在中部1/3面积处有4条槽，内侧两条槽之间还有1条横槽相通，在中部构成2块长方0.1mm。平台中部各有一个计数室，每1mm1mm2四角的大格被划分为16个中方格一般用作白细胞血小板及组织培养的细胞计数。的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为4.1血细胞计数板10mV＝4/3ab2（ab）可求出细20－21mm10mm，10101004.2目镜测微尺的种类刻度的标尺，为直线式标尺，全长1mm，分为10大格，每大格又分10小格，1000.01mm10m。4.3物镜测微尺三、材料和用75％四、操作与观①用1mL移液器准确吸取0.38mL白细胞稀释液放入一支干净的小试管内，加塞备用。用5mL移液器准确吸取3.98mL红细胞稀释液，放入一支干净用棉球蘸75％乙醇左手无名指或耳垂边缘，待挥发后用采血针刺入皮肤2-3mm深让血液自然流出（注意必须待挥发后才能采血否则流出的血液不成滴无法吸取用干棉球拭去第1滴血220l10l1－2min以免产生。泡，应洗净计数板和盖玻片，干燥后重新8数红细胞时发现各中方格的红细胞相差

图 红细胞数：将大方格的四角和共五个中方格内数得的红10000，即得每立方毫米血液内的红细胞总数。为什么？按目前临血细胞计数采用的通用单位，将以上结果换算为123412345124.54.568/50×10=13.6m。代入公式求体积。测量完毕后取下目镜测微尺，包装后放回盒内。形，其体积V＝4/3R3（R为半径。为减少误差，同一标本需测5个细胞的思考参考文1、黄诗笺等动物生物学实验指导高等教育2001，2 赵刚等医学细胞生物学实验与习题科学，1999，3 沈显生等，植物生物学实验，中国科学技术大 ，2003实验十六一、目的与学习血涂片，观察血液的基本有形成分ABO二、实验原采用最基本的红细胞凝集实验鉴定ABO血型系统中最常见的四种表型ABA型、B型和O这四种血型分型的主要依据是红细胞上A、B两种抗原的存在与否，而三、材料和号笔,移液器。75％乙醇、瑞氏、KH2PO4-Na2HPO4缓冲液、标准A、B、蒸四、操作与（一）血液的涂片方法先用75％棉球手指或耳垂待挥发后采血针刺入皮肤2－3mm深让血液自然流（注意必须待挥发后才能玻片的边缘与血滴接触，使血液展成线状，再将玻片以45可，染3一4分钟，此时，液面上可浮现一层金黄色的金属样物质。用蒸馏红细胞呈双凹圆盘状，无核，细胞的部分比边缘透明有粒细胞又因颗粒不同分为三种4—5叶，叶间有细丝相连。24％，胞质内充满粗大圆58％，体积大，胞质呈淡蓝色，核有圆25％，细胞大小不一，核呈紫色，很大。有， 为碎片状颗粒，体积很小有小的嗜碱性颗粒，染成紫，5.11.23.4.5.6.（二）ABO用记号笔在一双凹载玻片左上角写AB将标准 滴一滴于双凹载玻片左端，标准 滴一滴于平面上，然后置室温下5min后观察结果。如果室温较高，可将一培养皿倒扣五、思考参考文黄诗笺等，动物生物学实验指导，：高等教育，2001赵刚等，医学细胞生物学实验与习题，：科学，1999缓冲液(pH6.4)：KH2PO46.63g，Na2HPO42.56g1L实验十七一、目的与要二、实验原胞外，所以液体很快进入细胞，使细胞，血红蛋白逸出，即发生溶血。三、材料和（一）材料：10%5mL乙醇、0.32M、蒸馏水。四、操作与取一干净的试管向其中加入4ml红细胞悬观察发现红细胞悬液观察红细胞在低渗溶液中的溶血现象。在0试管中加入0.3mL红细胞悬液，再加入3mL蒸馏水，轻轻摇匀，注意溶液颜色的变化，隔着试管10.3mL3mL0.17M20.3mL3mL0.17M分别在另外8种等渗溶液中进行同样实验，步骤同（20123456789五、思考填表记录溶血实验的结果并分析原因，哪些溶液中含有非通透参考文赵刚等，医学细胞生物学实验与习题，科学，1999杨汉民等，细胞生物学实验（第二版，高等教 ，1997实验十八一、目的与二、实验原织吸水从而使外液浓度变大，增加；反之，若植物组织的水势高于外液的渗透势，则组织失水使得外液浓度变小，降低；若两者相等，则水分交换保持动态平衡外液浓度保持不变因此要测定植物组织的水势，放入植物组织前后不变则可认为其与植物组织之间水分保持动态平衡，（ψπW）(waterpotential)。ψW=ψπ=-P=-因为原生还有细胞壁限制原生的膨胀，同时细胞内的亲水胶体又有吸水的本领，因此典型细胞水势ψWψW=ψπ+ψP其中ψπP（质壁分离时（剧烈蒸腾时ψM可忽略不计。ψPψMψπ（ψπ（一）（二）带塞青霉素小瓶30个、带针头的注射器、镊子、打孔器、记号笔、培养（三）（1）1mol/L608034.2g,70ml100ml，1M（2）0.03%1mol/L蔗糖水溶液依C1V1=C2V2公式配制不同浓度的蔗糖溶液（具体范围可根据材0.55mol/L、0.60mol/L、0.65mol/L、0.70四、实验步（一）取干燥洁净的青霉素瓶60.100.60mol/L蔗糖溶液约4ml（约为青霉素瓶的2/3处6个干燥洁净的青霉素瓶为乙组，各瓶中分别加入0.100.60mol/L蔗糖溶液4ml和微取待测样品的功能叶数片，用打孔器打取约50片，放至培养皿中，混合均匀。用镊子分别夹入58个到盛有不同浓度的甲烯蓝蔗40min，为加速水分平衡，应经常摇动小瓶。（入对应浓度甲组青霉素瓶溶液中部，地放出少量液流，观察蓝色液流的升降每次测定均要用待测浓度的甲烯蓝蔗糖溶液几次注射针头如此方法检查各瓶中液流的升降。若液流上升，说明浸过的蔗糖（ψW=ψπ=-式中：ψW（MPa）；ψπ（MPa）C为溶液浓度(mol/L)；R为气体常数，0.008314L·MPa/(mol·K);T对温度(K)；i（蔗糖=1，CaCl2=2.60。注意事项管中溶液的均加大。（二）用镊子剥取供试材料下表皮或片刮取洋葱表皮，大小0.5cm2为宜。吸去切片表面水分，立即浸入上述不同浓度的蔗糖溶液中，450.03%5min2030min，同时记录室温，取出放于载玻片50%以上细胞发生初始质壁分离（即原生刚从细胞壁的角隅分离）的浓度，每一制片观察的细胞不应少于100个。如果在两个相邻浓度的切片中，一个切50%，则这两（ψπψπ=ψπ0=-=1，CaCl2=2.60五、思123参考文杨继等，植物生物学实验 ：高等教 ，2000实验十九一、实验目二、实验原重要特征就是其正的花，被子植物因此也被称为有花植物。开花、传粉和是被子植物生命史中重要的生理过程。在被子植物的有性繁殖过程中，当花粉落到柱头上后，花粉开始萌发并且生长出花粉管。花粉管穿其中一个与卵细胞融合为卵，另一个与极核融合形成极核。这个过程被称为双，双是被子植物特有的生理过程。花粉萌发和花粉管生三、材料和Thunb.，称量纸空气恒温振荡器锥形瓶玻璃棒培养皿纸移液（5ml，1ml，50ul，（三）试剂：Ca(NO3)2，乙二胺四乙酸二钠(EthyleneDiamineTetraaceticAcidDisodiumsalt,EDTA•Na2)，硼酸，蔗糖。四、实验步花粉每日清晨尚未开裂的百合花药，阳光照射约1小时，放入干燥器中过夜。次日，花药完全开裂并明显萎缩，花粉全部在外。用干箱中（Lietal.,1983将活花粉放入-80℃环境中可长期保持其。为了使花粉从-80℃2按照5mg/ml的比例将花粉加入到液体培养用玻璃棒搅拌去除54ml100rpm25℃下振5100mMCa(NO3)2、100mMEDTA•Na21%在花粉培养液中加入适量储液以配制各种培养条件。每个培养条件做两个平行样品。培养条件下的花粉管萌况。在某些培养条件下可以观察到有花粉聚微镜4倍或者10倍物镜下观察花粉的萌况（不要用40倍物镜，这百合花粉液体培养基（Dickinson1968） 1.29mM 0.99 0.16mM(~0.01%10%的蔗糖。五、作一、目的与二、验原能清晰地显示出细胞结构。番红为碱性，能使细胞核及木质化的细胞壁染成红色；固绿为酸性，能使细胞质及纤维素的细胞壁染成绿色。三、料和用100%FAA==50%乙醇89ml+冰醋酸5ml+6ml四、实验步取材取大小百合将花被花柄剥去只留下子房切成6-8固定：将FAA5-7（第一天工作结束50%30.5-1（如果固定好的较50%乙醇中保存备用。（无水乙醇两次1透明：1/2+1/2，1.5，1（1：1/2（第二天工作结束5-10粘片：片切下合适的蜡片，用镊子夹着，放入水槽，用载玻片捞起，在放入44度的温水中展片，注意不要颠倒蜡片的上下面。一面）靠近蜡片，注意调整位置，让蜡片正对载玻片，然后快是恰巧没有切到，较完整的样品应有3-6个胚珠保留，过胚囊的横切有的能看到顶细胞、卵细胞、反足细胞、2。烤片：选择较好的样品，置于烤片机上，65，101/2纯乙醇+1/2经无水乙醇、95%、90%、80%、70%、50%、30%5min；5min；1%101/2纯乙醇+1/2二甲苯，5min自然风干玻片后镜检观察切片，选择出切得较正较好的子房胚囊发育阶段。百合子房横切（40倍 百合子房横切（100倍百合子房横切（400倍 百合子房纵切（40倍五、作（一）六、思（四）（五）（六）参考资王灶安植物显微技术农业李正理植物组织制片 1996徐 植物石蜡切片双重染色技术的改 农学院学报（2）1999实验二十一PCR扩增的方法鉴别不同物种来源的肌、目的与要掌握PCRDNA学习琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR二、PCR扩增DNA片片段的法，为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由（1）高温变性（2）（3）合适的复性温度下分别与目的两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结DNA聚合酶（Taq酶）72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新PCR能快速特异扩增任何已知目的或DNA片段，并能轻易在皮克（pg）仅可以用于的分离、克隆和核苷酸序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，表达调控的研究，多态性的分析，遗传病和传染病的诊断，肿瘤机制的探索，法医鉴定等诸多方面。通常，PCRDNA分析中有着以下多DNA由少量mRNAcDNA从cDNA中克隆某些DNARAPD、AFLP、RFLPDNA近年来，在物种鉴定方面，PCR技术的应用也得到了长足的发展，已经成为物DNA鉴定方法包括：限制性长度（RFLP（RAPDRP是根据DNA序列上不同限制性内切酶的酶切位点分布的相对位置不同以及位点之间的序列同源性，将大分子量的DNARAD以PCRDNADNARAD重复性欠佳。ALP是在RLP和RAPD的基础上发展起来的序列中碱基的插入和缺失会引起酶切位点的改变用内切酶酶切会产生不同的片段，从而出现多态性。AFP通过PCR的方法将这种多态性的信号放大，通过凝胶电泳ALP克服了RFLP和RADPCR-RFLP也是将限制性酶切用PCR改进的法，该方法首先通过PCR的方法得到某一段序列，再将扩增产物进行限制性酶切，酶切图谱可显示出物种差别。目前比较常用的扩增片段是细胞色素b(Cytb)片段和12SrRNA片段。物种特异性引物扩增是依据各物种的序列存在一定的差异某种动物中存在某一段特异序列再根据此序直接法是直接测定样品中某部分的序列通过比对该序列确定具体物种的方法该方法用于物种的鉴定可操作性强，与CR技术相结合可用于微量样品的检测，对于未知样品只需用通用引物扩增，再进序就可获得相应的序列片段但是设备昂贵且只能测定样品的一段或几段序列仅凭这些序列的分析比对来确定物种容易出现差错。DNA为模板，用物种特异性的引物进行PCR扩增，只有在模板DNA成分。DNA模板（DNA、牛肉DNA、兔肉Pork1：Pork2：Beef1：Beef2：10×PCRTris-HCl(pH20020010020dNTPmix(2.5mM无菌PCRPCR按以积将各成分分别加入一做好标记的无菌PCR管中，配制50μlPCR反应体系，注意酶要最后加，加完后将PCR管放置在冰上。10×PCR555555dNTPmix（2.5mM444444DNA22------22------222-2-2-2-2-2--2-2-2-2-2-20.250.250.250.250.250.2534.75设定好PCR仪的反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，盖预变性 变性 退火50℃ 循环30次延伸72℃ 后延伸 反应结束后，终止程序，将PCR管从PCR4℃待电泳检三、琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产(pH8.0-8.3)中，其1×TAE 40 26× 30甘 36%溴酚 0.05核酸GoldenDNA分子量marker100bpDNA水平电泳仪及水平凝胶模2.4g250ml120ml1×TAE缓冲液，40s直至煮沸，摇动锥形瓶使琼脂糖分散，2次，直到溶液清澈透明，看不到琼脂糖颗粒。60℃左，琼脂糖凝胶完全凝固之后，轻轻地垂直拔出梳子不要将胶孔破坏，，10μlPCR2μl6×上样缓冲液混合均匀，加入到凝胶样品孔中，要先记下加样的顺序)5μl的marker。180V，样品由负极(黑色)向正极1/3时，停止电泳。电泳完毕后，取出凝胶，在紫外灯下观察，DNA存在则显示出绿色荧光条试剂或样品准备过程中都要使用灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤虽未发现GoldenView有作用，但各种核酸的作用学术界一直存在争议，且GoldenView对皮肤和眼睛有一定的刺激作用，为安全起见，强烈建议在操附：各动物组织组DNA的提DNAEasyPureTMGenomicDNAKit将≤25mg切碎的动物组织（去除脂肪组织）1.5ml离2-3次如果需要去除RNA20μlRNaseA212000rpm510μl10%SDS5