倍之速领跑糖型分析快速试剂盒

5倍之速，领跑糖型分析

——快速糖标记及分析试剂盒2017.03Asn297处有一个N-糖基化位点其变化取决于宿主细胞和表达条件结构多样性:Fuc,Gal,Neu5AC,GlcNAc,Man糖基化会影素:生物活性理化特性ADCC和CDC效应IgG糖基化分析对其重要的研究领域:克隆筛选产品表征批量释放研究IgG糖基化的意义Scanlanetal,PNAS105(2008)4081重组蛋白药的生产过程过程开发表征研究及验证细胞转染/克隆筛选细胞培养克隆生产/生物反应器

纯化糖在细胞功能中具有特殊作用:岩藻糖:ADCC效应N乙酰葡萄糖:ADCC&CDC效应唾液酸:炎症,ADCC效应,半衰期甘露糖:ADCC效应质量源于设计(QbD)了解糖基与功能间的关系(例如核心岩藻糖基化vsADCC)选择正确糖基化的细胞珠恰当的糖分析方法可确保产品具有正确的糖基化及活性

选择合适的糖表征分析方法的重要性挑战:复杂性;结构多样性;无发光基团;大部分糖不带电分析方法:HILIC色谱液质联用（LC-MS）毛细管电泳(CE)高压液相色谱(HPLC)离子交换色谱正相色谱糖分析方法的选择分离时间长分析过程复杂数据分析&糖型鉴定糖基分析和鉴定时间太长！生物制药工业中糖分析面临的挑战货号:B94499PTO糖分离专用胶磁珠GU参照品IgG标准品麦芽糖糊精标准品糖基释放所需试剂

单管磁力架（0.2mL离心管）还包括预装有熔融石英毛细管的卡盒试剂盒包括：SCIEX快速糖标记及分析试剂盒不含：氰基硼氢化钠和糖苷酶AndrasGuttman博士世界顶级专家开发的分析技术背景简介AndrasGuttman具有MTA-PELendulet糖组学方法转移研究领域的教授职位，并领导着潘诺尼亚大学（匈牙利）生物分离学科的HorváthCsaba实验室。

他的工作重点是研究生物医学、细胞生物学及生物医药相关领域的基于毛细管电泳及CESI-MS技术的糖组学及糖蛋白组学分析。Guttman教授发表过290多篇SCI文章,写过35本专业书的章节,编辑过4本教材并持有23项专利。

他是多个国际研究组织的成员，十多个科学期刊的编委，个人获得过众多奖项并被匈牙利科学院的成员所认可。这种快速糖分析技术由于创新性地结合了磁珠法，加快了样品前处理速度而荣获2016生物工艺国际大会（BPI）“最佳技术应用—分析”奖。使用创新的磁珠辅助的样品处理方法，用96孔板1小时内最多可标记96个样品，而且不需要任何离心操作。超速糖分析：使用配有激光检测器的PA800Plus生物制药分析系统，对荧光标记的糖进行分离，每个样品只需数分钟。如待分析样品数量少，可使用试剂盒中配备的单管磁力架手动完成前处理。同时开发了整合BiomekFXP自动化工作站对大量IgG样品进行前处理的方案。该方案也适用于其他品牌的自动化产品。快速糖标记及分离试剂盒的特点APTS=8-AminoPyrene-1,3,6-TriSulfonicAcid使样品带上电荷&荧光简单&高效一步还原-胺化荧光标记效率可达90%以上不选择性标记均一定量分析只标记在还原末端(每个糖基连接一个APTS)高灵敏度激光检测器(激发光波长488nm/发射光波长520nm)CE-LIF分析的带电荷及荧光情况APTS标记N-糖基0.002.004.006.008.00Time(min)1.02.0RFUC)GluNAc(β1→4)nB)Glu(β1→4)nA)Glu(α1→4)n1234567891011234561123456APTS基于电荷/体积的毛细管电泳分离（CZE）

实验步骤时间(分钟)平行步骤准备磁珠&加入样品2准备蛋白变性的溶液样品的变性9准备蛋白变性的溶液PNGase酶切(A)20准备标记试剂糖的捕获(B)2APTS标记(C)20清洗过量的APTS(D)6水洗(E)160MinsN-糖标记前处理只需60分钟!CE-LIF糖基分析的快速样品前处理IgG的N-糖经糖苷酶释放后用APTS标记

CE-LIF超快速、超高分辨率的糖分析快速分离后实时进行糖型鉴定...只有SCIEX毛细管电泳仪可提供精准的温控系统可使GU值的重复性得到严格控制预装好毛细管的卡盒（具有液体温控系统）世界顶级仪器上开发的分析技术CESI8000Plus高效毛细管电泳和电喷雾离子化系统(w/LIF)全配置的PA800Plus

生物制药分析系统?DB7.7110.0188.789.13FA2BG2S2基于GU数据库的糖结构解析IgG糖基结构及对应的GU值糖基结构及名称缩写不同温度下相同结构的糖迁移行为分离温度的重要性20oC50oCA.Guttman,M.Kerekgyarto,G.Jarvas,Anal.Chem87(2015)11630-11634.温度梯度下毛细管电泳对糖的分离图M.SzigetiandA.Guttman,Anal.Chem89(2017)InPress实时糖型鉴定与32karat10.0版本软件兼容（win7）可从SCIEX网站下载安装软件及使用说明用户可自行安装具有编辑功能，可添加新的糖基结构糖型数据库专为32Karat软件开发的GU数据库

快速糖型鉴定报告：糖基分离和鉴定信息

快速糖型鉴定报告：序列中多个样品糖基鉴定总结

主要糖基分析的RSD小于3%快速糖分析的重现性–校准峰面积（CorrectedArea）5分钟完成糖基鉴定HILIC：亲水作用色谱基于液-液分配的色谱，分析物按照极性增大的顺序依次洗脱大多数液相柱生产商都生产HILIC柱HILIC与RPLC洗脱顺相反HILIC分析的关键是保持固定相表面的薄水层来提供分配色谱。样品基质会干扰薄水层的分配而引起:洗脱时间变化峰型变差，损失分辨率破坏相稳定:需要长平衡时间，柱子寿命变短推荐使用固相萃取（SPE）对样品进行前处理清洗，可以减少这些影响。HILIC色谱分析法进行糖基分析样品前处理只需1小时快速分离只需数分钟高分辨分离&自动糖型鉴定

传统方法获得高分辨的糖分离数据需要较长的时间和极大的耐心SCIEX快速糖分析：速度是HILIC的5倍HILIC高效液相

传统毛细管电泳SCIEX快速糖分析样品前处理30分钟到24小时4小时1小时分离时间17到45分钟15到20分钟5分钟实时糖型鉴定——快速糖标记及分析0hrs24hrs12hrsHILIC5个样品的分析时间Rapifluor45–70mingradient-UPLC2-AA;2-AB2DaySampleprep样品前处理分离分析Timetodootherthings100mingradient-LCSCIEX快速糖分析：速度是HILIC的5倍各种糖基分析方法的比较FastGlycanProzymeGlyQ™ThermoGlycanAssureUPLCHILICLC-HILIC分辨率速度成本效益自动糖型鉴定没有温控没有温控系统实用性SCIEX公司N-CHO和FastGlycan两种糖分析试剂盒的区别分辨率毛细管速度糖型鉴定N-CHO试剂盒需手动安装中性涂层毛细管的卡盒手动鉴定快速糖分析试剂盒预装好裸管的卡盒自动鉴定M.Szigeti,C.Lew,K.Roby,A.Guttman,FullyautomatedsamplepreparationwithultrafastN-glycosylationanalysisoftherapeuticantibodies,JALA21(2016)281-286枪头盒盖:减少乙腈蒸发96孔板:用于悬浮的96孔板叠加处样品盘:PA800Plus样品瓶96孔板振荡器:孵育及混匀枪头盒:加少量试剂试剂槽:乙腈和磁珠置于磁力架上的样品盘:样品前处理枪头盒(P1000):加大量试剂样品盘(24孔):单抗样品试剂盘(24孔):糖苷酶和标记试剂全自动化工作站

12341234CE-LIF超快速IgG糖基分析

RawData

Shown.分离时间长快速的分离，单针循环时间短分析过程复杂快速样品前处理预编辑的分离程序数据分析&糖型鉴定糖数据库提供自动化糖型鉴定糖基分析和鉴定时间太长！生物制药工业中糖分析面临的挑战价值定位：与HILIC相比,SCIEX的快速糖分析速度是其5倍，而且可以自动进行糖结构鉴定，成本也只需HILIC的25%。更短的时间更优的数据分辨率更高：分离和鉴