ELSD检测器的选择和主要的应用介绍

会计学1ELSD检测器的选择和主要的应用介绍AWENCE从分析到制备的解决方案

HPLC和GC柱，配件和仪器硅胶基色谱填料HPLC毛细柱和微径柱

HPLC柱和小型仪器

制备级和工业级LC柱和装柱服务

生物分离专用HPLC柱和填料

AWENCEHPLC液相系统及输液泵第1页/共86页大纲常规检测器的回顾ELSD的检测原理ELSD与常规检测器的比较ELSD在分析上的优点AlltechELSD的介绍ELSD的维护质量保证总结AWENCE第2页/共86页其它检测器的介绍

紫外可见UV/Vis

示差折光RI

荧光Fluorescence

质谱MassSpectrometry检测器是高效液相色谱（HPLC）的核心部件之一，被喻为HPLC的眼睛。它的作用是将色谱柱流出物中样品含量的变化转换为可供观测的信号，通常是转换为电信号，以便自动记录下来进行定性定量分析。AWENCE第3页/共86页检测器的应用分布紫外可见65%示差和蒸发光10%电化学10%荧光8%质谱4%其它3%AWENCE第4页/共86页紫外/可见检测器UV/VIS优点：易于操作可靠性费用相对低廉溶剂梯度兼容对样品没有破坏性相对灵敏度高局限性：没有好的发光基团的化合物响应较差溶剂的使用上受紫外截止波长的限制AWENCE第5页/共86页荧光检测器Fluorescence优点：很好的灵敏度很好的选择性受流速和温度的变化影响很小局限性：线性范围窄操作复杂-需要对化合物和仪器的变化了解透彻某些物质如氧气会熄灭荧光-必须严格脱气能够自然产生荧光的化合物不是很多衍生方法复杂AWENCE第6页/共86页示差折光检测器RI优点：通用性-对几乎所有的物质具有相应宽的动态线性范围--104易于操作局限性:检测灵敏度不高对于温度和压力的波动敏感平衡慢检测既有正峰也有负峰不能进行梯度洗脱流动相预先混合后的效果好于泵在线混合的AWENCE第7页/共86页质谱MS优点:灵敏度高选择性好提供化学结构信息局限性:购买费用高操作复杂需要经常维护定量分析困难AWENCE第8页/共86页蒸发光散射检测器ELSD发展历史检测原理局限性优点在分析中的应用AWENCE第9页/共86页发展历史:

第一台商业化的产品出现在80年代初期•

最早的应用集中在聚合物的分析上•90年代初期，更多其它方面的应用•

目前,应用在广泛的领域AWENCE第10页/共86页ELSD行业超过26年的领先制造经验:500型2000型800型2000ES型3300型AWENCE第11页/共86页独特的检测方法：检测三部曲:雾化溶剂的蒸发检测ELSD可以对所有挥发性低于流动相的物质作出准确检测，而与被检测物质的化学基团关系不大，物理性质类似的物质响应一致，响应值与样品的质量成正比。AWENCE第12页/共86页第一步：雾化色谱柱流出物通过喷雾器针孔与氮气混合形成均匀的雾状液滴(气溶胶)AWENCE第13页/共86页第二步：溶剂的蒸发液滴通过加热的漂移管流动相蒸发干燥的样品颗粒保留AWENCE第14页/共86页第三步：检测样品颗粒通过流动池激光“撞击”颗粒被散射光电二极管检测散射光检测角度为90℃，避免虚假信号(>90℃折射/衍射光；<90℃反射光)AWENCE第15页/共86页两种类型气溶胶处理方式：A型-所有液滴进入漂移管及流动池(又称为“无气溶胶分流NoAerosolSplitting”)B型-部分液滴分流排掉；只有一部分进入漂移管及流动池(“气溶胶分流AerosolSplitting”)AWENCE第16页/共86页A型ELSD-气溶胶不分流操作所有样品从喷雾器进入漂移管及流动池需要较高温度才能完全蒸发流动相；A型ELSD只有不分流一种操作模式AWENCE第17页/共86页B型ELSD-气溶胶分流操作部分样品被排掉较低的温度已足够蒸发所有溶剂

B型ELSD只有分流一种操作模式AWENCE第18页/共86页Alltech2000(ES)型ELSD唯一提供两种操作模式的ELSD，在任何流动相及样品分析条件下均达到最佳结果AWENCE第19页/共86页一台仪器，两种操作模式：撞击器(Impactor)关-所有液滴进入漂移管及流动池(A型ELSD-无分流)撞击器(Impactor)开-部分液滴被排除，只有一部分进入漂移管及流动池(B型ELSD-气溶胶分流)采用新型专利“气溶胶分流技术”

USPatent#6229605

AWENCE第20页/共86页撞击器关模式撞击器与气溶胶流向平行所有样品流过漂移管到达流通池最适用于非挥发性样品及挥发性溶剂(大部分为有机)DriveShaftNebulizerOpticsImpactor‘Off’NebulizerDriveShaftImpactor‘Off’OpticsExhaustDriftTubeNebulizerImpactorDrainAWENCE第21页/共86页撞击器开模式撞击器垂直于气溶胶流向，部分液滴碰上撞击器从废液管排掉;其余穿过撞击器，经过漂移管到达流动池最适用于半挥发性样品及低挥发性溶剂(大部分为水溶液)DriveShaftNebulizerImpactor‘On’OpticsNebulizerDriveShaftImpactor‘On’NebulizerDrainImpactorDriftTubeExhaustOpticsAWENCE第22页/共86页撞击器关-最适合非挥发性样品Column: Alltech700CHCarbohydrateColumn 10µm,300x6.5mmMobilePhase: 100%WaterFlowrate: 0.5mL/min1.蜜三糖(50µg/mL)2.

乳糖(50µg/mL)3.

葡萄糖(50µg/mL)4.

甘露糖(50µg/mL)Column: Alltech700CHCarbohydrateColumn 10µm,300x6.5mmMobilePhase: 100%WaterFlowrate: 0.5mL/min#9206#9205Impactor‘On’Impactor‘Off’碳水化合物非挥发性样品在撞击器“关”的情况下也不挥发，全部进入流动池，得到最高灵敏度

AWENCE第23页/共86页撞击器关-最适合挥发性溶剂有机溶剂在较低温度蒸发，在撞击器“关”的情况下，也会完全蒸发，B型ELSD任何条件下均分流，造成样品损失，降低检测灵敏度Column: AlltechEconosphere®,C18, 5µm,150x4.6mmMobilePhase: Methanol:Water(90:10)Flowrate: 0.8mL/minColumn: AlltechEconosphere®,C18, 5µm,150x4.6mmMobilePhase: Methanol:Water(90:10)Flowrate: 0.8mL/min1.

n-癸基-b-D-吡喃糖苷(5µg/mL)2.n-辛基-b-D-吡喃糖苷(5µg/mL)3.n-十二烷基-b-D-吡喃糖苷(5µg/mL)葡萄糖苷分析Impactor‘On’Impactor‘Off’#9180#9179AWENCE第24页/共86页撞击器开-最适合半挥发性样品在撞击器开情况下，可以较低温蒸发溶剂，防止半挥发性样品蒸发防腐剂分析Column: AlltechEconosphere®,C18, 5µm,150x4.6mmMobilePhase: Methanol:Water(90:10)Flowrate: 0.8mL/minColumn: AlltechEconosphere®,C18, 5µm,150x4.6mmMobilePhase: Methanol:Water(90:10)Flowrate: 0.8mL/min1.羟基苯甲酸甲酯2.羟基苯甲酸乙酯3.羟基苯甲酸丙酯4.羟基苯甲酸丁酯#9202Impactor‘Off’Impactor‘On’#9201AWENCE第25页/共86页撞击器开-在几乎室温下检测半挥发样品Column: Prevail™CarbohydrateES,5µm,250x4.6mmMobilePhase:Acetonitrile:0.04%AmmoniumHydroxide(80:20)Flowrate: 1.0mL/min1.

Glycerol甘油AWENCE第26页/共86页ELSD的局限性1.只能使用挥发性的流动相2.

样品的挥发性必须要小于流动相3.

检测器响应是非线性的AWENCE第27页/共86页挥发性的流动相改性剂#1VolatileMobilePhaseModifierspKapKbpHRangeBPMPAcidsTrifluoroaceticAcid三氟乙酸0.313.7072.4°CFormicAcid甲酸3.7510.25100.7°CAceticAcid醋酸4.759.25116.0°CCarbonicAcid碳酸6.377.63—BasesAmmonia氨水9.254.75-33.35°CMethylamine甲胺10.813.1916.6°CEthylamine二乙胺10.663.34-6.3°CTriethylamine三乙胺11.012.9989.3°CBuffersAmmoniumFormate甲酸胺3.0-5.0120°CPyridiniumFormate甲酸吡啶翁3.0-5.0AmmoniumAcetate乙酸胺3.8-5.8111°CPyridiniumAcetate乙酸吡啶翁4.0-6.0AmmoniumCarbonate(forreversephase)碳酸胺(用于反相)8.0(adjusted)AmmoniumCarbonate碳酸胺5.5-7.5and9.3-11.3AWENCE第28页/共86页挥发性的流动相改性剂#2VolatileMobilePhaseModifierspKapKbpHRangeBPMPIon-PairReagentsPentafluoropropionicAcid五氟丙酸~0.696-97°CHeptafluorobutyricAcid七氟丁酸~0.6120°CNonafluoropentanoicAcid九氟戊酸140°CPentadecafluoroocatanoicAcid十五氟辛酸~0.6189°CTridecafluoroheptanoicAcid十三氟庚酸~0.6175°CAWENCE第29页/共86页载气流速与漂移管温度载气流速和漂移管温度是ELSD中可以调节的两个重要参数，建立适当的HPLC-ELSD分析方法需要对这两个参数进行优化。优化的原则是降低噪声到可以接受的程度，并尽量提高信噪比。AWENCE第30页/共86页载气流速与漂移管温度漂移管温度对基线水平和噪音的影响并无明显的规律性。低于某一温度，基线水平较高，因为低于这一温度，流动相得不到充分挥发，而盐的加入将会提高这一温度，因为盐的挥发需要更高的温度，但并不是漂移管温度越高越好，因为温度太高会使流动相沸腾，反而会增加背景噪音，同时还有可能导致溶质的部分挥发，降低信噪比。故最优温度应为在流动相（包括其中所含的盐）基本挥发的基础上，产生可接受噪音的最低温度AWENCE第31页/共86页载气流速与漂移管温度一般来说，在其它条件不变的情况下，载气流速越小，形成的物质粒子半径越大，对激光的散射能力越强，相应的响应信号越大。但并不是载气流速越小越好，因为当载气流速太小时，流动相不能完全挥发，背景噪音会增加，信噪比也会降低。最优载气流速应是在可接受噪音的基础上，产生最大检测响应值时的最低流速。AWENCE第32页/共86页如何应对非线性响应的检测器？选择2阶方程或者幂指曲线方程使用曲线的仅仅线性部分使用log/log双对数方法产生线性曲线即:对照品的浓度和面积同时取对数,至少两个点得到直线方程在中国药典2005版中，中药计算采用两点双对数方法,抗生素计算采用三点双对数方法散射光的响应值与粒子质量的关系：

I＝kmb取对数：

lgI＝blgm＋lgkm：待测组分的粒子质量和

I：待测组分所产生的散射光光强

k,b：常数AWENCE第33页/共86页Log-Log线性方程AWENCE第34页/共86页ELSD--功能强大的HPLC检测器通用性高-可检测任何挥发性低于流动相的化合物灵敏度好-比示差及低波长紫外灵敏一致的响应-给出准确的样品浓度用途广泛-梯度相容，改善分离及缩短分析时间AWENCE第35页/共86页ELSD响应因子的一致性不同的物质在蒸发光散射检测器中几乎具有相同的响应因子，这种响应因子的一致性，使纯度分析结果和多组分物质的相对比例测定结果更准确。在无合适对照品的情况下，采用另外一种含量已知的物质作内标，测定未知物含量成为可能。这一点对组合分子库、无紫外发色团物质的新药基准品的建立尤为有用。AWENCE第36页/共86页ELSD比较其它几种检测器的优势示差RI紫外可见UV/Vis荧光Fluorescence质谱MSAWENCE第37页/共86页ELSD相比示差的优势: 示差检测器的限制 ELSD优点温度变化会引起基线不稳定

不受环境温度影响可能出现负峰均是正峰不可以用梯度洗脱梯度洗脱兼容受溶剂峰干扰溶剂无响应，无溶剂峰灵敏度差ng级的检测限AWENCE第38页/共86页ELSD不会出负峰五糖,1.5mg/mLELSD RI RI (反转极性)AWENCE第39页/共86页ELSD相对RI，提高了检测灵敏度和基线稳定性RIELSD10277102781.

Fructose果糖2.

Glucose葡萄糖3.Sucrose蔗糖Column: Prevail™CarbohydrateES,5µm,53x7mm(PartNo.35104)MobilePhase:Acetonitrile:Water(75:25)Flowrate: 2.0mL/minColumnTemp:30°CAWENCE第40页/共86页碳水化合物的梯度洗脱#7576(Isocratic)1.核糖2.木糖3.果糖4.葡萄糖5.蔗糖6.麦芽糖7.乳糖8.棉子糖1.果糖2.葡萄糖3.蔗糖4.麦芽糖5.乳糖#7570(Gradient)CarbohydratesAWENCE第41页/共86页ELSD相比紫外检测器的优势:UV的局限性ELSD的优点

只能检测吸收紫外或可见光 •检测挥发性低于溶剂的任的化合物 何化合物检测基于样品的消光系数

•检测基于样品浓度•低波长紫外检测作梯度洗脱时 •梯度洗脱时基线稳定出现基线漂移 •溶剂峰会干扰

•溶剂没有响应，无溶剂峰•溶剂选择受其紫外末端吸收限制

•可用任何挥发性的溶剂

AWENCE第42页/共86页甾体化合物#79411.雌酮-3-硫酸钠,100ng2.

b-雌二醇-17-b-D-葡萄糖苷酸钠,100ng3.5b-孕烷-3a,20a-二醇-葡萄糖酸苷,220ng#7940

Column: Alltima™C18,5µm,150x2.1mm (PartNo.88370)MobilePhase:

A:0.1%TFAinWater

B:0.1%TFAinMethanolGradient:

Time: 0 10 18

%B: 60 100 100FlowRate: 0.2mL/minAWENCE第43页/共86页10446ELSD显示在UV谱图中未检测到的成分

Lotrimim®AFTopicalSolution1.PEG2.ClotrimazoleColumn: Alltima™C18,5µm,150x4.6mm(PartNo.88302)MobilePhase:

A:Water B:MethanolGradient:

Time: 0 8 10 2025

%B: 30 50 100 100 30FlowRate: 1.0mL/minColumnTemp.: 40°C#10446#10447AWENCE第44页/共86页ELSD比UV更能准确反映样品实际的量1:1混合物1.Ephedrine麻黄素2.Caffeine咖啡因1045010449Column: Alltima™HPEPSC18,5µm,150x4.6mm(PartNo.87715)MobilePhase: 1%AceticAcid:Methanol:Acetonitrile(70:20:10)FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第45页/共86页ELSD检测没有发光团的化合物不需要衍生1.lauricAcid2.MyristicAcid3.PalmiticAcid4.StearicAcid5.ArachidicAcid6.BehenicAcid9539Column: Prevail™OrganicAcid,5µm,150x4.6mm(PartNo.88640)

MobilePhase:(75:25)Acetonitrile:Methanol

FlowRate:1.0mL/min脂肪酸AWENCE第46页/共86页ELSD在分离使用的溶剂选择上有特点1.LGG2.LGL3.LLL4.OGL5.PGL6.OLL7.OGO+PLL8.OOO10047Column: Alltima™C18,5µm,250x4.6mm(PartNo.88056)

MobilePhase:

A:AcetonitrileB:Dichloromethane

Gradient: Time: 0 40

%B: 30 50FlowRate: 1.0mL/minTriglyceridesinEveningPrimoseOil月见草油中的甘油三酯二氯甲烷对于高分子量的甘油三酯溶解度高.AWENCE第47页/共86页荧光检测器的局限性

大多需要柱前或柱後衍生

无需衍生荧光检测器的限制 ELSD的优点AWENCE第48页/共86页柱前衍生法分析氨基酸—紫外&荧光

1. 天门冬氨酸

2. 谷氨酸

3. 丝氨酸

4. 甘氨酸

5. 组氨酸 6. 苏氨酸

7. 丙氨酸 8. 精氨酸

9. 脯氨酸

10. 酪氨酸

11. 蛋氨酸

12. 缬氨酸

13. 半胱氨酸

14. 异亮氨酸

15. 亮氨酸

16. 苯丙氨酸

17. 赖氨酸

#7596#5164AWENCE第49页/共86页

1.Gly2.Ser/Asn3.Asp4.Gln5.Ala/Thr6.Glu7.Cys/Lys8.His9.Pro10.Arg11.Val12.Met13.Tyr14.Ile15.Leu16.Phe17.TrpColumn: Prevail™C18,5µm,250x4.6mm(PartNo.99210)MobilePhase:

A:5mMHeptafluorobutyricAcid,pH1.0w/0.7%TFAB:AcetonitrileGradient:

Time: 0 6 8 25

%B: 0 0 15 35FlowRate: 1.0mL/minELSD对无衍生氨基酸分析AWENCE第50页/共86页虽然MS是通用性的检测器，ELSD也有自己的优势投入和操作的成本低操作容易维护简单定量相比更准确

对于色谱条件的要求在ELSD和MS上是相似的，所以ELSD方法能够方便的应用在MS上不需要修改。在ELSD上进行MS的方法研究，能够节省MS用于实际样品的分析

AWENCE第51页/共86页并联使用UV/ELSD/MS能够得到最多的结构和浓度信息1.Aspartame2.Hydrocortisone3.Reserpine4.TerfenadineColumn: ZORBAX®StableBondC18,3.5µm,50x4.6mm (PartNo.835975-902)MobilePhase:

A:0.025%FormicAcidinWater

B:0.025%FormicAcidinAcetonitrileGradient:

Time: 0 1 5 5.1

%B: 25 0 0 25FlowRate: 1.0mL/minColumnTemp:30°C

Chrom#10456#10458#10457AWENCE第52页/共86页总结:用ELSD替代或补充现有检测器的益处消除衍生简化方法比RI有更好的灵敏度和稳定性给其它检测器作补充，能够看到哪些物质没有检测到能够比UV&MS得到更准确的样品量的信息AWENCE第53页/共86页ELSD更多的优点：通用性的检测器:-可以使用微径柱来提高灵敏度-条件方便放大到制备-在极端的梯度条件下进行快速分离检测没有发光团的化合物的理想选择:-Lipids磷脂-Polymers聚合物-Surfactants表面活性剂-Carbohydrates碳水化合物AWENCE第54页/共86页在ELSD上用微径柱检测1.

VitaminA

(100ngon-column)2.

VitaminE

(160ngon-column)3.

VitaminK1

(130ngon-column)Column: Alltima™C18,3µm,150x1mm(PartNo.88384)MobilePhase:Methanol:Chloroform(90:10)FlowRate: 50µL/min#10279AWENCE第55页/共86页制备时通过ELSD控制馏分收集器，过滤UV无吸收化合物Column: Alltima™C18,5µm,150x10mm(PartNo.81102)MobilePhase:Water:Acetonitrile(55:45)FlowRate: 5.0mL/minColumnTemp.: 25°C1.Ethinamate(5.0mg/mL)#10438AWENCE第56页/共86页ELSD对流动相的组成改变不响应，允许在极端梯度条件下的快速分离1.

Ephedrine

2.

Acetylsalicylicacid

3.

Diphenhydramine

4.

Trimipramine

Column: Alltech®

Alltima™HPC18,3µm,33x7.0mm(PartNo.87671)MobilePhase: A:0.1%TFAinWaterB:0.1%TFAinAcetonitrile

Gradient: Time: 0 3

%B: 10 90

FlowRate: 2.5mL/min

ColumnTemp: 30°C

#10451AWENCE第57页/共86页主要的应用领域Pharmaceuticals药物Non-chromophoricdrugs没有发光团的药品Excipients赋性剂Impurities杂质Aminoacids氨基酸Aminoglycosideantibiotics氨基糖甙类Nutraceuticals

天然产物Ginseng人参AstragalosideIV黄芪甲苷Ginkgolides银杏Glucosamine氨基葡萄糖Polymers/Surfactants聚合物/表面活性剂PEGs Polysorbate聚山梨酸酯Tween PVA聚乙烯醇GPECDimethiconeLipids脂类Phospholipids磷脂Triglycerides甘油三酸酯Fattyacids脂肪酸Carbohydrates碳水化合物Simplesugars单糖Oligomers寡糖Sugaralcohols糖醇AWENCE第58页/共86页2005版中国药典中用ELSD检测的药品名称序号产品名称检测化合物色谱条件药典页码1地肤子地肤子皂苷甲醇－水－冰醋酸=85:15:0.2一部P812路路通路路通酸甲醇－水－冰醋酸=87:13:0.1一部P2053黄芪

黄芪甲苷C18柱，乙腈：水=32：68一部P212

4炙黄芪

黄芪甲苷C18柱，乙腈：水=32：68一部P213

5银杏叶

萜类内酯白果内酯C18柱，甲醇:四氢呋喃：水=25：10：65

一部P220

6银杏叶提取物

萜类内酯白果内酯C18柱，正丙醇：四氢呋喃：水=1：15：84一部P282

7知母

拔契皂苷元

C18柱，甲醇：水=95：5一部P148

8意苡仁

甘油三油酸酯

C18柱，乙腈：二氯甲烷=65：35一部P260

9浙贝母

贝母素

C18柱，乙腈：水：二乙胺=70：30：0.3

一部P205

10乙肝宁颗粒黄芪甲苷甲醇－水=75:25一部P29011玉屏风口服液黄芪甲苷乙腈－水=35:65一部P40912补中益气丸（水丸）黄芪甲苷C18柱，乙腈：水=35：65一部P48013银杏叶片萜类内酯白果内酯C18柱，正丙醇：四氢呋喃：水=1：15：84一部P597AWENCE第59页/共86页2005版中国药典中用ELSD检测的药品名称序号产品名称检测化合物色谱条件药典页码13硫酸卡那霉素卡那霉素

C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=95：5

二部P724

14硫酸庆大霉素

庆大霉素小诺霉素

C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=92：8二部P730

15硫酸依替米星

依替米星奈替米星C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=84：16二部P74016硫酸小诺霉素

小诺霉素/庆大霉素C1aC18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=94：6二部P718AWENCE第60页/共86页ELSD对氨基葡萄糖有比RI和UV更好的响应Column: Prevail™CarbohydrateES,5µm,150x4.6mm(PartNo.35102)MobilePhase:Acetonitrile:Water(65:35)FlowRate: 1.0mL/min1.Glucosamine(1mg/mL)#10412#10413#10411AWENCE第61页/共86页使用ELSD可以梯度洗脱完全分离多种磷脂,灵敏度高

1.

Cholesterol

胆固醇2.

Palmiticacid

棕榈酸3.

Phosphatidylethanolamine磷脂酰乙醇胺4.

Phosphatidylserine

磷脂酰丝氨酸5.

Phosphatidylcholine

卵磷脂6.

Sphingomyelin神经鞘磷脂Column:

Alltech®

Allsphere™Silica,3µm,100x4.6mm(PartNo.778382)MobilePhase:

A:IPAB:HexaneC:WaterGradient:

Time: 0 7 15

%B: 40 40 40

%C: 2 8 8 FlowRate: 1.25mL/minAWENCE第62页/共86页ELSD检测糖醇-高灵敏度和稳定的基线

Column: Prevail™CarbohydrateES,5µm,250x4.6mm(PartNo.35101)MobilePhase: Acetonitrile:Water(70:30)FlowRate: 1.0mL/min1.iso-Erythritol异赤藻糖醇2.Xylitol木糖醇3.Mannitol甘露醇4.Maltitol麦芽糖醇#9352糖醇AWENCE第63页/共86页ELSD轻松检测困难化合物--Tween805%Tween80Column:

Alltech®

Alltima™C18,5µm,250x4.6mm(PartNo.88056)MobilePhase: Water:Methanol(60:40)FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第64页/共86页ELSD梯度洗脱分离玉米糖浆低聚糖

1.Dextrose2.Maltose3.Maltotriose4.Maltotetraose5.Maltopentaose6.Maltohexaose

7.Maltoheptaose8.Maltooctaose9.Maltononaose10.Maltodecaose11.Maltoundecaose12.Maltododecaose13.Maltotridecaose14.Maltotetradecaose15.MaltopentadecaoseColumn:

Alltech®

Prevail™CarbohydratesES300A,5µm,250x4.6mm(PartNo.35101)MobilePhase:

A:AcetonitrileB:WaterGradient:

Time: 0 15

%B: 35 50FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第65页/共86页无需衍生检测橄榄油中的甘油三酯1.

1,2-Dilinoleyl-3-Oleyl-rac-glycerol(LLO)

2.

1,2-Dilinoleyl-3-Palmityl-rac-glycerol(LLP)

3.

1,2-Dioleyl-3-linolein-rac-glycerol(OOL)

4.

1-Palmityl-2-Olein-3-linolein-rac-glycerol(POL)

5.

1,2-Dipalmityl-3-linolein-rac-glycerol(PPL)

6.

Triolein(OOO)

7.

1,2-Dioleyl-3-palmityl-rac-glycerol(OOP)

8.

1,2-Dipalmityl-3-oleyl-rac-glycerol(PPO)

9.

1,2-Dioleyl-3-stearyl-rac-glycerol(OOS)

Column:

Alltech®

Alltima™C18,3µm,150x4.6mm(PartNo.91387)MobilePhase:

A:

Dichloromethane

B:AcetonitrileGradient:

Time: 0 10 18 20

%B: 70 55 70 70FlowRate: 1.5mL/min脂肪和油一般含有特征性的甘油三酯,分析甘油三酯可以鉴定脂肪和油的品种.AWENCE第66页/共86页掺有植物油的橄榄油的鉴定分析1.

LLL2.LLO3.LLP4.OOL5.POL6.

OOO7.OOP8.PPO9.OOSColumn: Alltima™C18,3µm,150x4.6mmMobilePhase: A:Dichloromethane

B:AcetonitrileGradient: Time: 0 10 18 20 %B: 70 55 70 70Flowrate: 1.5mL/minDetector: ELSD2000橄榄油含有大量的油酸甘油三酯,而不含亚麻酸甘油三酯.后者却存在于菜油中,显示于掺有菜油的橄榄油谱图中.AWENCE第67页/共86页生物柴油(BiodieselPoster)生产中的反应和质量监控生物柴油是一种可再生、生物可降解和无毒燃料,它可以通过动植物油的转酯反应来制备.作为天然柴油的替代物.目前国内外学者广泛采用的转酯法,即三甘油酯在酸、碱或酶等催化剂作用下经转酯反应制备生物柴油MAGs,DAGs和未反应的TAGs会造成污染影响生物柴油的品质AWENCE第68页/共86页BiodieselContaminatedwithMono-,Di-andTriacylglycerolsUnreactedTryacylglycerols(豆油SoyOil)

Column: Alltima™HPC18-HL,5µm,250X4.6mmMobilePhase:

A:Acetonitrile

B:DichloromethaneGradient:Time05303235%B01570700Flowrate: 1.0ml/minAWENCE第69页/共86页氨基糖苷类抗生素的ELSD分析(中国药典2005)

Column: ApolloC18,5µm,250x4.6mmMobilePhase:0.2MTrifluoroaceticAcid:Methanol(94:6)FlowRate: 0.6mL/min1.Sulfate2.GentamicinC1a3.GentamicinC24.GentamicinC2b5.GentamicinC2a6.GentamicinC1#10425庆大霉素C组分

*中检所抗生素室AWENCE第70页/共86页银杏叶提出物中内酯含量的ELSD测定(中国药典2005)

银杏叶提出物的内酯类成份决定了其药理作用，HPLC-RI法灵敏度与稳定性均不理想；若采用紫外分析因为内酯类成份吸收差，最大吸收波长在219nm，受试剂末端吸收影响很大。1.银杏苦内酯C2.白果内酯3.银杏苦内酯A4.银杏苦内酯BColumn: PlatinumC18,5µm,250x4.6mmMobilePhase:H2O:MeOH:THF=75:20:10FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第71页/共86页黄芪中黄芪甲苷的ELSD分析(CHP2005)

黄芪甲苷常作为指标性成份用于黄芪药材的质量监控，因为只在220nm有弱的末端吸收，过去未能使用HPLC法定量，ELSD有通用响应，使用HPLC-ELSD法干扰少，分离度高.1.黄芪甲苷Column: ApolloC18,5µm,250x4.6mmMobilePhase:CAN:H2O=(32:68)FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第72页/共86页三七药材及其制剂中

三七皂苷R1,人参皂苷Rg1及Rb1的含量

图三七药材及血塞通注射液HPLC色谱图a.对照品b.三七药材c.血塞通注射液1.三七皂苷R12.人参皂苷Rg13.人参皂苷Rb1Column:

Alltech®

Alltima™C18,5µm,150x4.6mmMobilePhase:

A:WaterB:AcetonitrileGradient:

Time: 0 21

%B: 30 60FlowRate: 0.6mL/minAWENCE第73页/共86页AlltechELSD2000ES光路和电子元件进行更新布儒斯特角光阱,增加光阱尾吹30mW的激光光源光池涂四氟乙烯的抗腐蚀涂层降低背景噪音，比2000ELSD提高一个数量级的灵敏度AWENCE第74页/共86页关于布儒斯特角

当反射光线和折射光线的传播方向互相垂直时,入射光线的偏振角称为布儒斯特角.当透镜只能通过垂直方向的偏振光时,便可挡住部分散射的光线.自然光在两种各向同性媒质分界面上反射、折射时，反射光和折射光都是部分偏振光。反射光中垂直振动多于平行振动，折射光中平行振动多于垂直振动。

AWENCE第75页/共86页ELSD2000ES性能更新灵敏度的挑战一种措施是仅仅增加光强，但是同时会增加基线的噪音，导致LOD和信噪比没有变化。ELSD2000ES克服这种障碍，专利设计的布儒斯特角光阱，当光强增加时，信号的增强远大于噪音的增加。2000ES结合布儒斯特角光阱和30mW的光源为一体。AWENCE第76页/共86页ELSD2000ES灵敏度更新对相同的浓度的样品有多于10倍的信噪比(S/N)增长增强最小检出限(LOD)AWENCE第77页/共86页灵敏度比较–2000ESvs20002000ES对相同量的氢化可的松增加灵敏度1.Hydrocortisone(100ngoncolumn)Column: Alltima™C18,5µm,4.6x250mm (PartNo.88056)MobilePhase:

Water:Acetonitrile(55:45)FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第78页/共86页灵敏度比较表–与其它品牌的