DNA重组技术的基本工具5

据WTO调查：全球每年共有7万人死于狂犬病，同时全球每年因狂犬病而耗资40亿美元。

中国卫生部通报：中国狂犬病死亡人数位居全球第二能产生狂犬病抗体蛋白的转基因烟草基因工程

基因工程，又叫DNA重组技术或基因拼接技术，就是指按照人们的愿望，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。问题探讨：苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。

想一想需要做哪些关键工作？普通棉花抗虫棉普通棉花(无抗虫特性)苏云金芽孢杆菌提取抗虫基因棉花细胞(含抗虫基因)棉花植株(有抗虫特性)上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？重组DNA导入形成基因工程培育抗虫棉的简要过程基因工程培育抗虫棉的关键步骤关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来关键步骤二：目的基因与运载体结合，形成重组DNA关键步骤三：重组DNA导入受体(棉花)细胞基因的“剪刀”——

限制性核酸内切酶基因的“针线”——DNA连接酶基因的“运载体”——

基因进入受体细胞的载体基因的“剪刀”——

限制性核酸内切酶

现在已经从约300种微生物中分离出多种限制性内切酶(限制酶)。EcoRⅠSmaⅠ粘质沙雷氏杆菌（Serratia

marcesens）大肠杆菌（Escherichia

coli

R）练习：流感嗜血杆菌的d菌株(Haemophilusinfluenzaed)中先后分离到3种限制酶，则分别命名为:HindⅠ、HindⅡ和HindⅢAG限制性内内切酶作作用过程程点击播放EcoRⅠ黏性末端端黏性末端端SmaⅠⅠ平末端平平末端基因的针针线---DNA连接酶点击播放生物A基因片段段生物B基因片段段EcoRⅠEcoRⅠDNA连接酶可把黏性性末端之之间的缝隙“缝合”起来，DNA连接酶即恢复被限限制酶切切开的两两个核苷苷酸之间间的磷酸酸二酯键键DNA连接酶与与DNA聚合酶是是一回事事吗？DNA连接酶还可把平末端之之间的缝缝隙“缝合”起来，但但效率较较低DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链连接部位相同点双链单链在两DNA片段之间间形成磷酸二二酯键将单个核核苷酸之间形成成磷酸二酯键都能形成成磷酸二二酯键二者都是是蛋白质质类化合合物基因的“运载体”—基因进入入受体细细胞的载载体1.作用：2.常用的种种类：质粒、噬菌体体和动植植物病毒毒。将外源基基因送入入受体细细胞。质粒粒3.质粒的的特点点：一种裸裸露的的、结结构简简单、、独立立于细细菌拟拟核DNA分子外外并能能自我复复制的小型型双链环环状DNA分子。。4.作为运运载体体的必必要条条件:a、能在在宿主主细胞胞内复复制并并稳定定地保保存b、有一一个或或多个个酶切切割位位点c、具有某些些标记记基因因d、对受体体细胞胞无害害(便于进进行鉴鉴定和和筛选选)(以便外外源基基因插插入)基因工工程的工具具限制酶酶主要存存在于于原核核生物物中具有特特异性性切开DNA分子的的磷酸酸二酯酯键DNA连接酶连接磷磷酸二二酯键键运载体体具备的的条件质粒、、噬菌菌体、、动植植物病病毒种类能自我我复制制有一个个或多多个酶酶切割割位点点有标记记基因因对受体体细胞胞无害害基因工工程操操作的的基本本步骤骤1、提取取目的的基因因从供体体细胞胞的DNA中直接接分离离基因因人工合合成基基因会出现现三种种情况况：目的基基因与与目的的基因因结合合目的基基因与与质粒粒结合合质粒与与质粒粒结合合2、目的的基因因与运运载体体结合合3、将目目的基基因导导入受受体细细胞导入的的方法法：借借鉴细细菌或或病毒毒侵染染细胞胞的途途径4、目的的基因因的检检测和和鉴定定a、检测测：通通过过检测测标记记基因因的有有无，，来判判断目目的基基因是是否导导入b、鉴定：通过过特定定性状状的产产生与与否来来确定定目的的基因因是否否表达达1.在基因因工程程中，，切割割运载载体和和含有有目的的基因因的DNA片段，，需使使用（（））同种限限制酶酶B.两种限限制酶酶同种连连接酶酶D.两种连连接酶酶A练习2.不属于于质粒粒被选选为基基因运运载体体的理理由是是A、能复复制（（））B、有多多个限限制酶酶切点点C、具有有标记记基因因D、它是是环状状DNAD3.基因工工程是是在DNA分子水水平上上进行行设计计施工工的。。在基基因操操作的的基本本步骤骤中，，不进进行碱碱基互互补配配对的的步骤骤是（（）