GC-MS快速检测酱油中的氯丙醇

GC-MS快速检测酱油中的氯丙醇于杰;李晓玉;隋涛【摘要】利用GC-MS建立了一种快速检测酱油中三种氯丙醇的方法.采用乙酸乙酯提取，经七氟丁酰基咪唑(HFBI)衍生后,GC-MS检测.1,3-DCP、2,3-DCP、3-MCPD的方法检出限分别为0.知g/kg、0.56知g/kg、0.240pg/kg.添加浓度为10pg/kg三种标准物质的回收率均大于93%,标准偏差小于3.2.【期刊名称】《广州化工》【年(卷)，期】2011(039)011【总页数】3页(P106-107,136)【关键词】GC-MS;氯丙醇;1,3-二氯-2-丙醇;2,3-二氯-1-丙醇;3-氯-1,2-丙二醇;酱油【作者】于杰;李晓玉;隋涛【作者单位】烟台出入境检验检疫局,山东烟台264000;烟台出入境检验检疫局,山东烟台264000;烟台出入境检验检疫局仙东烟台264000【正文语种】中文酸水解植物蛋白液(HVP)是近年来蓬勃发展起来的新型调味品或作为调味料的增强剂添加到酱油、豆酱、蚝油及各种复合调味品中。在酸水解植物蛋白的生产过程中富含蛋白质脂肪的原料如大豆、小麦等在高温下经过浓酸处理时，原料中的甘油三酯也同时水解为丙三醇，并与盐酸反应产生了氯丙醇［1］，包括3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)和2-氯-1,3-丙二醇(2-MPCD)以及1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)和2,3-二氯-1-丙醇(2,3-DCP)。因而，在酱油中能够检测出氯丙醇［2-3］，经研究表明1,3-DCP和3-MCPD具有致癌致突变以及其它毒害作用［4］。WuShengFu等［5］所做的关于中国的食品中氯丙醇含量的调查报告显示80%的酸水解植物蛋白食品中的3-MCPD的含量超标。因此关于氯丙醇的分析检测方法研究显得尤为重要。已有的研究多是针对3-MCPD和1,3-DCP［6］，同时检测三种氯丙醇较少见于报道。本文采用乙酸乙酯提取，经七氟丁酰基咪唑(HFBI)衍生，利用GC-MS同时检测酱油中三种氯丙醇。1.1仪器与试剂Angilent6890/5973GC-MS联用仪;BuchiB-400均质器；BuchiR-250旋转蒸发仪;控温烘箱。1,3-DCP、2,3-DCP、3-MCPD氯丙醇单标标准品(Dr.Ehrenstorfer)。衍生剂:七氟丁酰基咪唑(HFBI)(ACORSorganics)。正己烷、乙酸乙酯、乙醚均为色谱纯。无水硫酸钠(于600°C烘烤3h，冷却后备用)、氯化钠(配置成饱和氯化钠溶液)均为分析纯。水为超纯水，由Milli-Q制备。1.2标准溶液配置标准品单标储备溶液配置:分别称取100mg标准品，用乙酸乙酯溶解定容至100mL容量瓶中，得到浓度均为1mg/mL三种氯丙醇标准单标储备液。标准品工作溶液:分别取1mL上述单标准储备液用乙酸乙酯稀释定容至100mL,分别得到浓度为10pg/mL的三种氯丙醇单标准工作液。从三种氯丙醇单标准工作液中各取1mL置于10mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释定容至刻度，得到混合标准工作溶液，其中三种氯丙醇浓度均为1pg/mL。以上标准品溶液均放置在4C冰箱中储存。1.3仪器条件GC条件:DB-35MS色谱柱(30mx0.25mmx0.25pm);进样口温度250C;载气：氦气（纯度大于99.999%）,流速1.5mL/min;色谱程序升温:70°C保持2min,15°C/min升至200C，再以10C/min升至300C，保持5min。不分流进样，进样量1pLoMS条件:EI源，离子源温度280C，接口温度250C，选择离子模式定量分析。1.4实验方法准确称取10.00g样品，加入15g无水硫酸钠，3g氯化钠，60mL乙酸乙酯均质，取上层提取液，经无水硫酸钠过滤，收集滤液。添加30mL乙酸乙酯重复提取两次。合并滤液，在35C旋转蒸发仪上蒸至剩余约2mL,冷却至室温，将液体转入干净的试管，氮气吹干，重新定容。加入100pL七氟丁酰基咪唑，立刻密封放入70C烘箱反应30min。向试管中加入5mL饱和氯化钠溶液，振荡混匀，静置分层，取乙酸乙酯层，过0.2pm滤膜后，GC-MS检测。2.1样品处理方法的选择氯丙醇易溶于水，提取过程中添加无水硫酸钠和氯化钠，一方面去除酱油中的水分，另一方面促使氯丙醇向有机相中转移。酱油中的色素和一部分杂质在均质的过程中吸附到盐颗粒上，在提取的同时起到了一定的净化作用。在前期实验中参照国标方法，分别用正己烷、乙醚、乙酸乙酯对酱油中氯丙醇进行提取，并进行柱层析。发现用弗罗里硅土进行两层法装柱能很好的吸附酱油中的杂质，但其中的氯丙醇也不易被洗脱，回收率较低，这与李拥军等［7］的研究结果一致。若增大洗脱溶剂体积，则色素一同流出，不易去除。用Extrelut⑧NT自制小柱进行提取净化，效果与弗罗里硅土柱类似。乙醚易挥发，作为洗脱液和提取溶剂时对人体有麻醉作用，正己烷作为提取溶剂与样品均质后呈糊状不利于分离。因此，最终本方法选用了乙酸乙酯作为提取溶剂直接提取。2.2氯丙醇的检测结果从色谱分析可知，三种氯丙醇的色谱峰彼此相邻且分离完全，峰形尖锐，并与杂质很好分离，有交攵避免了干扰，提高了仪器分析效率。标准品色谱峰及质谱图见图1。由于三种氯丙醇结构有类似之处，质谱检测的特征离子有重叠，三种氯丙醇的定性定量离子及离子比率见表1。2.3氯丙醇检测方法的确证将1.2中氯丙醇混合标准工作液稀释成项g/L、10pgZL.50pg/L、100pg/L.1pg/mL系列浓度进行仪器分析，以定量离子峰面积Y对标准品质量浓度X做标准曲线。发现三种氯丙醇在1pg/mL~1pg/mL浓度范围内呈线性相关，r2均大于0.999，线性方程见表2。按色谱峰信噪比S/N=3确定LOD,S/N=10确定LOQ,则由表2数据可知采用本方法检测酱油中氯丙醇的检出限均低于pg/kg级，达到0.24~0.56pg/kg。为检验方法的回收率和精密度，分别在10pg/L和50pg/L两个水平添加混合标准品，设置了5个平行实验，三种氯丙醇在两个标准品添加水平下回收率在93%~105%,RSD在2.56~3.18之间（表2）,说明该方法得到的数据是准确可靠的。本文首次报道了利用GC-MS同时检测酱油中三种氯丙醇的分析方法，该方法在分析酱油样品时具有有机溶剂消耗少、回收率高、检测成本低等优点。对酱油样品处理操作简便，实验结果准确可靠，10pg/L标准添加回收率大于93%，标准偏差小于3.2。方法灵敏度达到pg/kg级以下，1,3-DCP、2,3-DCP、3-MCPD的方法检出限分别为0.454pg/kg、0.564pg/kg、0.240pg/kg,极大满足了对酱油中氯丙醇的检测要求。文中所述方法也可推广应用到各种可能添加酸水解植物蛋白液的调味品中，改善食品安全现状。【相关文献】[1]Collier,P.D.,Cromie,D.D.O.,Davies,A.P.Mechanismofformationofchloropropanolspresentinproteinhydrolysates.JournaloftheAmericanOilChemistsSociety,1991,68:785-790.[2]Nyman,P.J.,Diachenko,G.W.,Perfetti,G.A.Surveyofchloropropanolsinsoysaucesandrelatedproducts.FoodAdditivesandContaminants,2003,20:909-915.[3]CommissionRegulation(EC)No.466/2001(2001).Settingmaximumlevelsforcertaincontaminantsinfoodstuff.OfficialJournalofEuropeanCommunities.8thMarch2001.[4]F.Bastos,J.Bessa,C.Pacheco,P.DeMarco,P.M.L.Castro,M.Silva,R.FerreiraJorge,Biodegradation2002,13:211.[5]WuShengFu,YunfengZhao.OccurrenceofchloropropanolsinsoysauceandotherfoodsinChinabetween2002and2004[J].FoodAdditives&Contaminants,2007(24):812-819.[6]Chung,W.,Hui,W.,Cheng,S.Sensitivemethodforthedeterminationof1,3-dichloropropan-2-oland3-chloropropa