DNA琼脂糖凝胶电泳制备全过程图解课件

DNA琼脂糖凝胶电泳1aDNA琼脂糖凝胶电泳1a实验原理琼脂糖为链状多糖

→绳状琼脂糖束→大网孔型凝胶——分离、鉴定、纯化DNA影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成缓冲液pH>DNAPi，DNA带负电荷，迁移率与分子量对数成反比DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA>线状DNA>开环DNA2a实验原理琼脂糖为链状多糖→绳状琼脂糖束→大网孔型2a不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围琼脂糖浓度（%）分离范围（kb）0.35-600.61-200.70.8-100.90.5-71.20.4-61.50.2-42.00.1-33a不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围琼脂糖浓度（%）琼脂糖凝胶中DNA的观察溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下红色荧光4a琼脂糖凝胶中DNA的观察溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下主要实验器材电泳仪电泳槽缓冲液琼脂糖凝胶槽梳子取液器溴酚蓝5a主要实验器材电泳仪电泳槽缓冲液凝胶槽梳子取液器溴酚蓝5a电泳槽结构6a电泳槽结构6a操作步骤琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB凝胶板的制备：加梳子，倒胶样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝加样：加样端为负极（黑）电泳：5V/cm观察：紫外灯下观察，照相7a操作步骤琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB7a溶胶8a溶胶8a准备胶槽9a准备胶槽9a凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml10a凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml10a铺胶11a铺胶11a凝胶凝固后取出梳子12a凝胶凝固后取出梳子12a加缓冲液13a加缓冲液13a准备样品14a准备样品14a点样15a点样15a电泳16a电泳16a注意观察溴酚蓝染液的迁移17a注意观察溴酚蓝染液的迁移17a紫外灯下观察电泳结果18a紫外灯下观察电泳结果18a照相19a照相19aDNA琼脂糖凝胶电泳20aDNA琼脂糖凝胶电泳1a实验原理琼脂糖为链状多糖

→绳状琼脂糖束→大网孔型凝胶——分离、鉴定、纯化DNA影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成缓冲液pH>DNAPi，DNA带负电荷，迁移率与分子量对数成反比DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA>线状DNA>开环DNA21a实验原理琼脂糖为链状多糖→绳状琼脂糖束→大网孔型2a不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围琼脂糖浓度（%）分离范围（kb）0.35-600.61-200.70.8-100.90.5-71.20.4-61.50.2-42.00.1-322a不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围琼脂糖浓度（%）琼脂糖凝胶中DNA的观察溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下红色荧光23a琼脂糖凝胶中DNA的观察溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下主要实验器材电泳仪电泳槽缓冲液琼脂糖凝胶槽梳子取液器溴酚蓝24a主要实验器材电泳仪电泳槽缓冲液凝胶槽梳子取液器溴酚蓝5a电泳槽结构25a电泳槽结构6a操作步骤琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB凝胶板的制备：加梳子，倒胶样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝加样：加样端为负极（黑）电泳：5V/cm观察：紫外灯下观察，照相26a操作步骤琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB7a溶胶27a溶胶8a准备胶槽28a准备胶槽9a凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml29a凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml10a铺胶30a铺胶11a凝胶凝固后取出梳子31a凝胶凝固后取出梳子12a加缓冲液32a加缓冲液13a准备样品33a准备