21复习微生物的实验室培养+课件

专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养专题2课题1㈠.微生物的类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、衣原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：显微藻类、原生生物（如：草履虫、变形虫等）病毒、类病毒、朊病毒◆微生物的共同特点：一.微生物基础知识㈠.微生物的类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、1.细菌的形态1.细菌的形态拟核，大型环状DNA质粒(小型环状DNA，含抗生素，抗药性，固氮基因)其成分为肽聚糖2.细菌的结构特殊结构（有时包括芽孢）拟核，大型环状DNA质粒(小型环状DNA，含抗生素，抗药性芽孢

有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。（抗逆性极强）注：不是繁殖体芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）3.细菌的繁殖4.细菌的菌落⑴.定义：单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。⑵.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。⑶.功能：每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）3.细菌的繁殖4.几种菌落及其形态几种菌落及其形态几种菌落及其形态几种菌落及其形态5.病毒的结构:由核酸和蛋白质构成。5.病毒的结构:由核酸和蛋白质构成。病毒的结构病毒的结构吸附注入合成释放组装6.病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五个阶段，即：吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白质→组装→释放6.病毒的营养方式：寄生吸附注入合成释放组装6.病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五个阶段微生物需要的五大类营养要素物质是：㈡.微生物需要的营养物质及功能1.水2.碳源3.氮源4.无机盐5.生长因子微生物需要的五大类营养要素物质是：㈡.微生物需要的营养物质及1.碳源：为微生物提供碳元素。无机碳化合物——CO2、NaHCO3等有机碳化合物糖类（最常用的碳源，尤其是葡萄糖）烃类、醇类、脂肪酸蛋白质、脂质、核酸等（有机大分子）牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、石油（天然）1.碳源：为微生物提供碳元素。无机碳化合物——CO2、NaH2.氮源:N2NH3等有机物中的氮（还有尿素）无机氮牛肉膏、蛋白胨为微生物提供氮元素。圆褐固氮菌、硝化细菌和大肠杆菌氨盐、硝酸盐等是常用的氮源氮源主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物2.氮源:N2NH3等有机物中的氮（还有尿素）无机氮牛肉膏、自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是()A．碳源B．氮源C．无机盐D．特殊营养物质A自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是()3.生长因子⑶.常见的生长因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可为微生物提供生长因子（4）来源：3.生长因子⑶.常见的生长因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生注意：最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖最常用的氮源是铵盐、硝酸盐对异养生物而言，含C、H、O、N的化合物既是碳源，也是氮源，如蛋白质之所以补充生长因子，是由于缺少合成这些物质的酶或合成能力有限注意：最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖思考：C思考：C（三）培养基

培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。1.培养基的类型及用途（三）培养基培养基（培养液）是由人工方法种类是否含凝固剂用途固体培养基液体培养基按物理性质分是否分离、计数等工业生产种类是否含凝用途固体培养基液体培养基按物理性质分是否分离、计固体培养基：菌落固体培养基：菌落半固体培养基：无动力有动力(弥散)观察微生物的运动、鉴定菌种等半固体培养基：无动力有动力(弥散)观察微生物液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长按化学成分分种类化学成分是否明确用途天然培养基合成培养基否是主要用于工业生产分类、鉴定按化学成分分种类化学成分是否明确用途天然培养基合成培养基否是按培养基的功能（用途）分种类制备方法原理用途举例选择培养基鉴别培养基加入某种化学物质加入某种试剂或化学药品依据某些微生物对某些物质的抗性依据微生物的代谢产物与特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化从众多微生物中分离所需的微生物鉴别不同种类的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌伊红和美蓝培养基可鉴别大肠杆菌按培养基的功能（用途）分种类制备方法原理用途举例选择培养基鉴选择培养基加入青霉素的培养基加入高浓度食盐的培养基不加氮源的无氮培养基不加含碳有机物的无碳培养基分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离自养型微生物jkzyw选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色（三）培养基

（1）按物理状态分：（2）按功能分：（3）按成分分：总结：1.培养基的类型固体培养基液体培养基半固体培养基选择培养基鉴别培养基天然培养基合成培养基（三）培养基（1）按物理状态分：总结：1.培养基的类型固体2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不管哪种培养基，一般都含有水、无机盐、碳源和氮源等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．3.培养基的成分2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不管哪种培养基，血清中含有：①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）②多种金属离子；③激素；④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。⑤各种生长因子⑥转移蛋白⑦不明成分人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。血清中含有：人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和（四）无菌技术1.无菌技术的概念

无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。

（四）无菌技术1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物2.消毒与灭菌的概念及两者的区别

3.常用的消毒与灭菌的方法比较项目理化因素的作用强度消灭微生物的程度芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能2.消毒与灭菌的概念及两者的区别3.常用的消毒与灭菌的方法①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。④紫外线消毒。消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。消毒的方法：3.常用（1）日常生活经常用到的是

煮沸

消毒法

；（2）对一些不耐高温的液体，则使用

巴氏

消毒法（例如牛奶）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用

紫外线

进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；（5）饮水水源用氯气进行消毒。消毒的方法（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；消毒的方法21复习微生物的实验室培养+课件1、灼烧灭菌灭菌的方法：接种环、接种针、试管口等的灭菌1、灼烧灭菌灭菌的方法：接种环、接种针、试管口等的灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.如玻璃器皿、金属用具等的灭菌如培养基、无菌水等的灭菌2、干热灭菌：如玻璃器皿、金属用具等的灭菌如培养基、无菌水高压蒸气灭菌的原理是（）A．高压使细菌DNA变性B．高压使细菌蛋白质凝固变性C．高温烫死细菌D．高温使细菌DNA变性B高压蒸气灭菌的原理是（）B灭菌的方法：

1、灼烧灭菌2、干热灭菌3、高压蒸气灭菌4、紫外线灭菌如表面灭菌和空气灭菌等，所用器械是紫外灯

。灭菌的方法：关于灭菌和消毒的不正确的理解是A．消毒和灭菌实质上是相同的B．灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子C．接种环用烧灼的方法灭菌D．常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法A关于灭菌和消毒的不正确的理解是A1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外二、微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存二、微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌21复习微生物的实验室培养+课件涂布器接种环接种针涂布器接种环接种针21复习微生物的实验室培养+课件a.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）配方：a.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）配方：1．计算、称量2．溶化3．调pH：pH7．6

4．过滤：这一步可以省去。5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6．加塞7．包扎操作步骤1．计算、称量操作步骤8．灭菌:

将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。

9．倒平板:

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.

10．无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。8．灭菌:倒平板操作倒平板操作1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。⑴培养细菌用的培养基与培养皿⑵玻棒、试管、烧瓶和吸管⑶实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。问题讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如b.纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：b.纯化大肠杆菌接种方法有：微生物的接种技术：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法

平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面.

在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.接种方法有：平板划线法:通过接种环在琼脂固体培平板划线的操作平板划线的操作21复习微生物的实验室培养+课件一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；21复习微生物的实验室培养+课件1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.2.划线首尾不能相接3.划线后,培养皿倒置培养划线分离法注意事项:其他画线分离图：1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.划21复习微生物的实验室培养+课件答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。问题讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免稀释涂布平板的操作方法稀释涂布平板的操作方法21复习微生物的实验室培养+课件21复习微生物的实验室培养+课件21复习微生物的实验室培养+课件答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养

伊红—美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈黑色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。例如：鉴别大肠杆菌培养基大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽伊红—美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠菌种的保存1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。2、长期保存：甘油冷冻管藏法菌种的保存1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长结果分析与评价㈠.培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。㈡.接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。㈢.是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。结果分析与评价㈠.培养基的制作是否合格本课题知识小结:本课题知识小结:【典例解析】例:关于微生物营养物质的叙述中，正确的是()A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。D【典例解析】例:关于微生物营养物质的叙述中，正确的是(编号成分含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml例2．右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类型是

。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入

.（提示：金黄色葡萄球菌具耐盐性）自养型微生物

含碳有机物

编号成分含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养

。（4）表中营养成分共有

类。（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是

。固氮微生物

3

调整pH

编号成分含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养（6）右表中各成分重量确定的原则是

。（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分

。依微生物的生长需要确定

琼脂（或凝固剂）

编号成分含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml依微生物的生长需要确定琼脂（或凝固剂）编号成分含量①粉状谢谢！供娄浪颓蓝辣袄驹靴锯澜互慌仲写绎衰斡染圾明将呆则孰盆瘸砒腥悉漠堑脊髓灰质炎(讲课2019)脊髓灰质炎(讲课2019)谢谢！供娄浪颓蓝辣袄驹靴锯澜互慌仲写绎衰斡染圾明将呆则孰盆瘸78专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养专题2课题1㈠.微生物的类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、衣原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：显微藻类、原生生物（如：草履虫、变形虫等）病毒、类病毒、朊病毒◆微生物的共同特点：一.微生物基础知识㈠.微生物的类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、1.细菌的形态1.细菌的形态拟核，大型环状DNA质粒(小型环状DNA，含抗生素，抗药性，固氮基因)其成分为肽聚糖2.细菌的结构特殊结构（有时包括芽孢）拟核，大型环状DNA质粒(小型环状DNA，含抗生素，抗药性芽孢

有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。（抗逆性极强）注：不是繁殖体芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）3.细菌的繁殖4.细菌的菌落⑴.定义：单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。⑵.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。⑶.功能：每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）3.细菌的繁殖4.几种菌落及其形态几种菌落及其形态几种菌落及其形态几种菌落及其形态5.病毒的结构:由核酸和蛋白质构成。5.病毒的结构:由核酸和蛋白质构成。病毒的结构病毒的结构吸附注入合成释放组装6.病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五个阶段，即：吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白质→组装→释放6.病毒的营养方式：寄生吸附注入合成释放组装6.病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五个阶段微生物需要的五大类营养要素物质是：㈡.微生物需要的营养物质及功能1.水2.碳源3.氮源4.无机盐5.生长因子微生物需要的五大类营养要素物质是：㈡.微生物需要的营养物质及1.碳源：为微生物提供碳元素。无机碳化合物——CO2、NaHCO3等有机碳化合物糖类（最常用的碳源，尤其是葡萄糖）烃类、醇类、脂肪酸蛋白质、脂质、核酸等（有机大分子）牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、石油（天然）1.碳源：为微生物提供碳元素。无机碳化合物——CO2、NaH2.氮源:N2NH3等有机物中的氮（还有尿素）无机氮牛肉膏、蛋白胨为微生物提供氮元素。圆褐固氮菌、硝化细菌和大肠杆菌氨盐、硝酸盐等是常用的氮源氮源主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物2.氮源:N2NH3等有机物中的氮（还有尿素）无机氮牛肉膏、自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是()A．碳源B．氮源C．无机盐D．特殊营养物质A自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是()3.生长因子⑶.常见的生长因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可为微生物提供生长因子（4）来源：3.生长因子⑶.常见的生长因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生注意：最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖最常用的氮源是铵盐、硝酸盐对异养生物而言，含C、H、O、N的化合物既是碳源，也是氮源，如蛋白质之所以补充生长因子，是由于缺少合成这些物质的酶或合成能力有限注意：最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖思考：C思考：C（三）培养基

培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。1.培养基的类型及用途（三）培养基培养基（培养液）是由人工方法种类是否含凝固剂用途固体培养基液体培养基按物理性质分是否分离、计数等工业生产种类是否含凝用途固体培养基液体培养基按物理性质分是否分离、计固体培养基：菌落固体培养基：菌落半固体培养基：无动力有动力(弥散)观察微生物的运动、鉴定菌种等半固体培养基：无动力有动力(弥散)观察微生物液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长按化学成分分种类化学成分是否明确用途天然培养基合成培养基否是主要用于工业生产分类、鉴定按化学成分分种类化学成分是否明确用途天然培养基合成培养基否是按培养基的功能（用途）分种类制备方法原理用途举例选择培养基鉴别培养基加入某种化学物质加入某种试剂或化学药品依据某些微生物对某些物质的抗性依据微生物的代谢产物与特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化从众多微生物中分离所需的微生物鉴别不同种类的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌伊红和美蓝培养基可鉴别大肠杆菌按培养基的功能（用途）分种类制备方法原理用途举例选择培养基鉴选择培养基加入青霉素的培养基加入高浓度食盐的培养基不加氮源的无氮培养基不加含碳有机物的无碳培养基分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离自养型微生物jkzyw选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色（三）培养基

（1）按物理状态分：（2）按功能分：（3）按成分分：总结：1.培养基的类型固体培养基液体培养基半固体培养基选择培养基鉴别培养基天然培养基合成培养基（三）培养基（1）按物理状态分：总结：1.培养基的类型固体2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不管哪种培养基，一般都含有水、无机盐、碳源和氮源等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．3.培养基的成分2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不管哪种培养基，血清中含有：①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）②多种金属离子；③激素；④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。⑤各种生长因子⑥转移蛋白⑦不明成分人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。血清中含有：人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和（四）无菌技术1.无菌技术的概念

无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。

（四）无菌技术1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物2.消毒与灭菌的概念及两者的区别

3.常用的消毒与灭菌的方法比较项目理化因素的作用强度消灭微生物的程度芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能2.消毒与灭菌的概念及两者的区别3.常用的消毒与灭菌的方法①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。④紫外线消毒。消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。消毒的方法：3.常用（1）日常生活经常用到的是

煮沸

消毒法

；（2）对一些不耐高温的液体，则使用

巴氏

消毒法（例如牛奶）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用

紫外线

进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；（5）饮水水源用氯气进行消毒。消毒的方法（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；消毒的方法21复习微生物的实验室培养+课件1、灼烧灭菌灭菌的方法：接种环、接种针、试管口等的灭菌1、灼烧灭菌灭菌的方法：接种环、接种针、试管口等的灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.如玻璃器皿、金属用具等的灭菌如培养基、无菌水等的灭菌2、干热灭菌：如玻璃器皿、金属用具等的灭菌如培养基、无菌水高压蒸气灭菌的原理是（）A．高压使细菌DNA变性B．高压使细菌蛋白质凝固变性C．高温烫死细菌D．高温使细菌DNA变性B高压蒸气灭菌的原理是（）B灭菌的方法：

1、灼烧灭菌2、干热灭菌3、高压蒸气灭菌4、紫外线灭菌如表面灭菌和空气灭菌等，所用器械是紫外灯

。灭菌的方法：关于灭菌和消毒的不正确的理解是A．消毒和灭菌实质上是相同的B．灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子C．接种环用烧灼的方法灭菌D．常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法A关于灭菌和消毒的不正确的理解是A1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外二、微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存二、微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌21复习微生物的实验室培养+课件涂布器接种环接种针涂布器接种环接种针21复习微生物的实验室培养+课件a.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）配方：a.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）配方：1．计算、称量2．溶化3．调pH：pH7．6

4．过滤：这一步可以省去。5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6．加塞7．包扎操作步骤1．计算、称量操作步骤8．灭菌:

将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。

9．倒平板:

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.

10．无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。8．灭菌:倒平板操作倒平板操作1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。⑴培养细菌用的培养基与培养皿⑵玻棒、试管、烧瓶和吸管⑶实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。问题讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如b.纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：b.纯化大肠杆菌接种方法有：微生物的接种技术：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法

平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面.

在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.接种方法有：平板划线法:通过接种环在琼脂固体培平板划线的操作平板划线的操作21复习微生物的实验室培养+课件一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；21复习微生物的实验室培养+课件1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.2.划线首尾不能相接3.划线后,培养皿倒置培养划线分离法注意事项:其他画线分离图：1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.划21复习微生物的实验室培养+课件答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。问题讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免稀释涂布平板的操作方法稀释涂布平板的操作方法21复习微生物的实验室培养+课件21复习微生物的实验室培养+课件21复习微生物的实验室培养+课件答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养

伊红—美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈黑色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。例如：鉴别大肠杆菌培养基大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽伊红—美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠菌种的保存