病理发展与临床

病理发展与临床陈莉

南通大学基础医学院

病理学：疾病的病因（etiology）发病机制（pathogenesis）病理改变（pathologicalchanges)（代谢、机能和形态结构、临床表现和转归）目的：认识和掌握疾病的本质和发生发展的规律，为防治疾病提供必要的理论基础和实践依据。第一节病理学诊断

病理诊断是对疾病的最后诊断，它关系到病人尤其是肿瘤病人治疗方案的选择，并可提示病人的预后。病理诊断的差错可能会延误病情，造成误截肢、摘除脏器等不可挽回的严重后果，并负有法律责任。长期以来，病理诊断被认为是“金标准”，在医疗工作中发挥着举足轻重的作用，具有其它任何检查都不可替代的权威性，医院病理科被认为是反映大型医院综合诊治水平高低的重要窗口。到目前为止还没有一项检查手段或方法可以完全代替病理诊断，因此一个医院病理诊断水平的高低，无疑对一个医院医疗质量的高低起着重要的作用。病理学并不是病变组织形态学的同义词，这是一个过时的概念。病理学包括了从病变分子水平到机体出现疾病中的功能和结构变化的知识和理解。病理学正在不断的改变，修正和扩展。应用新科学方法进一步认识疾病。一、病理诊断的意义

在临床诊断中不管临床医生有多少把握，缺乏组织学的诊断既不安全，也不能最终确定（除了极少数例外的情况）。病理诊断在临床诊断中起决定作用，坚持病理诊断正是大多数医院的规章与共识。

1、提供临床正确的病理诊断肿瘤病理诊断的内容是要对疾病的全面描述（如肿瘤起源，分类、分型、分化、侵袭、转移、激素受体表达、特异性酶活性、核分裂像、在S期的细胞百分比等）。2、正确的病理诊断为患者临床治疗提供进一步依据以足够综合的诊断提供给临床，以使临床医生能为患者采取最佳的治疗方案（如术后肺鳞癌宜放疗，腺癌宜化疗，小细胞癌宜放疗加化疗；乳腺癌ER、PR阳性者辅以内分泌治疗，多药耐药基因（MDR）的检测有助于选择合理的化疗药物等）。3、病理诊断提供肿瘤患者预后信息

现已知许多因素均能影响肿瘤的预后。如肿瘤各种病理学因素和临床分期等与患者预后有关，许多癌基因、抑癌基因、DNA修复基因、细胞周期蛋白、及各种酶类均能影响肿瘤的预后有关。二、病理申请单的内容与意义

1、年龄几乎每种肿瘤均有其好发年龄(儿童母细胞瘤，中老年癌,<20岁无恶纤组，骨Ewing肉瘤5-19岁，骨巨细胞瘤多在20-39岁，多发性骨髓瘤和转移癌绝大多数>40岁，而Paget病<40岁）。相同类型的肿瘤发生在婴儿和成人时表现不一致，其诊断标准与预后也不一致（幼年性黑色素瘤、胎儿型横纹肌瘤、儿童睾丸或卵巢的未成熟畸胎瘤。鳞状上皮乳头状瘤发生在外耳道、声带、阴茎等处，年轻人一般考虑为良性，而中老年则较多考虑恶性。2、性别

如腹膜播散性平滑肌瘤几乎都发生于女性。诊断男性乳腺发育，性别是诊断的主要依据。

3、部位平滑肌瘤常见于皮肤竖毛肌、血管、子宫等。神经母细胞瘤好发于肾上腺髓质及颅底至骨盆中线的两侧（与交感神经链有关）。副神经节瘤好发于颈部（颈动脉体及迷走神经）、眼眶（睫状神经节）、腹膜后（腹膜后体）、大腿中部内收肌管中（股动脉体）、外耳道（颈静脉球）等，生殖细胞来源的肿瘤好发于生殖腺及中线（松果体、纵隔、后腹膜及骶尾部）。胚横在头颈部、胆囊、阴囊、阴道、宫颈及后腹膜，而四肢少见。粘膜相关淋巴组织淋巴瘤好发于胃、乳腺、甲状腺、肺等，弹力纤维瘤几乎都发生于老年人背部、肩胛下区。血管球瘤以四肢末端，尤其是脂（趾）甲下，其他部位罕见。（1）相相同的肿肿瘤在不不同的部部位有不不同的诊诊断标准准，如圆柱柱瘤与腺腺样囊腺腺癌、平平滑肌肉肉瘤在皮皮肤核分分裂≥1个/10HF，胃肠肠道≥4个/10HF，后腹腹膜≥5个/10HF，子宫宫≥5-10个个/10HF。。（2）发发生肿瘤瘤部位的的深浅与与肿瘤诊诊断有关关，如脂肪肪组织肿肿瘤，肉肉瘤样组组织学在在浅表为为多形性性脂肪瘤瘤，深部部为脂肪肪肉瘤。。纤组在在浅表的的肉瘤样样结构为为非典型型性纤维维黄色瘤瘤，深部部恶纤组组，浅表表纤维肉肉瘤罕见见。（3）同同类肿瘤瘤在不同同部位其其生物学学行为和和预后不不同，如副节节瘤于横横膈上生生物学行行为好，，横膈下下差，发发生于腹腹膜及腹腹膜后恶恶性者多多见；类类癌在阑阑尾相对对良性，，而在小小肠、胃胃较恶性性。4、病史史与临床床症状与外伤有有关的病病变:骨骨折后骨骨痂--骨肉瘤瘤，术后后梭形细细胞结节节--梭梭形细胞胞肉瘤，，骨化性性肌炎--骨旁旁骨肉瘤瘤。有疼痛的的良性肿肿瘤:竖竖毛肌或或血管平平滑肌瘤瘤、血管管球瘤、、神经鞘鞘瘤、血血管脂肪肪瘤；因用药后后的宫内内膜改变变与月经经周期不不吻合，，宫内膜膜上皮出出现假恶恶性改变变易误诊诊为癌。。Ackerman（1997）指出出“对病病变淋巴巴结的组组织学诊诊断相当当困难，，在淋巴巴结上作作出错误误诊断要要比任何何器官都都高，最最常见的的是将淋淋巴结良良性病变变误诊为为恶性淋淋巴瘤。。”有些病变变的诊断断标准是是“双标标准”，，即临床床标准与与病理标标准，如如在骨肿肿瘤、脑脑肿瘤的的诊断中中特别强强调了临临床、病病理、X线密切切结合。。三、病理理诊断报报告1、病理理诊断包包括内容容病理报告告的格式式尚无统统一规范范，原则则上应该该尽可能能用描写写性、可可理解性性与标准准化术语语，报告告中的信信息能使使临床医医生跟上上病理医医生的思思维，使使病理实实验室的的信息更更有意义义、更完完整地传传达给临临床医师师，而且且当组织织学切片片从某一一医院转转送到另另一医院院时也能能增进病病理学实实验室之之间的交交流。作为病理理报告的的主要内内容应包包括肉眼眼检查所所见、显显微镜检检查所见见和病理理诊断三三部分。。2、病理理诊断报报告组成成（1）主主要部分分可独立存存在的诊诊断。（2）辅辅助部分分对主要诊诊断的进进一步补补充说明明，一般般不能独独立存在在，依附附于主要要诊断之之前后。。（3）附附注、补补充说明明或讨论论如果术中中报告与与最后诊诊断不符符，应将将这些不不符记录录以附注注形式补补充说明明或加以以讨论，，以利于于临床医医生进一一步了解解病理诊诊断。（4）建建议如果对病病人有益益，可能能在病理理报告中中补充一一些建议议，进行行另外的的研究或或检查。。（5）报报告应即即时送发发，让病人人尽快得得到合理理治疗或或解除病病人的焦焦虑。临床医生生应该了了解并不不是所有有的病理理报告都都是金标标准。病病理诊断断有时因因为组织织取材范范围的限限制，不不可能完完全反映映疾病的的实际情情况，再再加上疾疾病的千千变万化化和个人人经验的的限制，，使病理理诊断具具有不同同程度的的相对性性。病理医师师应实事事求是，，为了做做到不过过诊也不不漏诊，，病理医医生一般般采取不不同等级级的病理理报告形形式。3、病理理报告与与书写形形式（1）完完全肯定定的病理理报告如对胃癌癌手术标标本：胃胃小弯溃溃疡型管管状腺癌癌，部分分为粘液液腺癌，，浸润胃胃壁全层层，脉管管内癌栓栓。断端端切除干干净；小小弯肿块块旁淋巴巴结转移移(2／／8)、、大弯侧侧淋巴结结未见转转移(0／4)。这类报告一般般需要临床医医生提供必要要可靠的临床床资料和完整整的病理标本本。完全肯定的报报告是病理诊诊断中最完整整准确的诊断断，也是病理理诊断的主要要形式，是对对病人进行合合理的治疗和和判断预后的的依据。如果果诊断有误，，给病人造成成了伤害，病病理医生应负负相应的责任任。（2）不完全全肯定的病理理报告送检标本没有有取到肿瘤的的部分，或者者坏死组织太太多，肿瘤细细胞受挤压等等，致使所见见病变不典型型、不明显或或无特异性时时，不能给予予明确、肯定定的诊断。此此类诊断的书书写形式可有有不同的用词词，其可信度度略有差异，，仅供参考。。如果临床医医生根据这种种不肯定的病病理报告，采采取了过手术术或过治疗等等情况，病理理医生没有任任何责任。不完全肯定报报告包括以下下几种类型：(1)有保留留的诊断：无无十分把握，，可在病名前前冠以“考虑虑为””或“可能为为”，“首选选……，请除除外……”。。例如：考虑为为鳞状细胞癌癌；可能为小小细胞癌。(2)可疑的的诊断：多系系因材料不足足．不能肯定定，根据实际际情况可写““怀疑为………”或“高度度怀疑为………”。例如：怀疑为为腺癌。(3)如果既既不能肯定又又不能否定临临床诊断，则则可写“不能能排除……””。例如：“慢性性淋巴结炎，，不能排除结结核”。(4)缺少典典型的特异性性病变者可写写成符合”临临床诊断。例如：“符合合白斑”或““可符合白斑斑”。值得强调的是是，由于目前前医疗法规和和保护措施尚尚不健全，再再加上媒体宣宣传等原因，，病理医生的的心理压力有有所增加，因因此，这类不不肯定的病理理报告有可能能增多。特别别是手术中冰冰冻快速诊断断，病理医生生担负更大的的责任，对少少数疑难病例例，更为小心心谨慎，如果果没有百分之之百的把握，，往往采取低低诊断的方式式，发出不肯肯定的病理报报告。鉴于上上述情况，病病理与临床医医生之间需要要更多的理解解和沟通，默默契配合。（3）描写性性病理报告描写性病理报报告如：(腹腹膜后)纤维维结缔组织内内有炎细胞浸浸润；(吻合合口)炎性肉肉芽组织中可可见少数异型型细胞。描写性病理报报告是作不出出肯定或倾向向性诊断的一一种病理报告告形式。看到到什么写什么么，不带有判判断性意见。。（4）阴性病病理报告：送检标本达不不到做病理检检查的条件，，如组织太小小，没有加固固定液或固定定液太少等情情况，或未见见病理改变时时发阴性病理理报告。四、病理诊断断的质量保证证与质量控制制病理诊断的每每一环节中都都应规范化操操作以保证质质量，即质量保证（QualityAssurauceQA）），进而由本科科室或相关机机构进行质量量检查，通过过系内会诊、、术中会诊、、随机病例复复查、系内与与系间的讨论论会、医院间间的复检、标标本满意程度度的记录、丢丢失标本的记记录、个别事事件的报告、、对病理报告告周转时间、、尸检报告的的周转时间、、标本的正确确性等提出明明确的要求，，以控制其质质量水平，即即质量控制（QualityControlQC）。通过质量保保证和质量控控制要求病理理报告必须准确性、完整整性和及时性，因此质量量保证和质量量控制都是监监督病理诊断断质量的重要要方法。五、病理会诊诊与读片会1、病理会诊诊病理会诊包括括个人会诊（（personalconsultation）和医院院会诊（institutionalconsultation）），前者常是是因为未能明明确病理诊断断或因同部门门病理医师意意见不统一。。患者或临床床医师要求得得到另一位医医师的意见。。后者常是病病人转院治疗疗时需要新单单位的病理医医师复查有关关病理报告与与切片，或是是质控中心出出于质量保证证的需要检查查切片。病理理会诊单上要要表明会诊的的原因，要保保证提供切片片具有代表性性，能够充分分显示出有疑疑问的病变，，对严重的有有分歧的病例例要及时进行行讨论，进行行相关研究，，以尽早明确确病理诊断。。2、病理读片片会读片会是继续续教学的重要要环节:病理理医师从本科科或研究生毕毕业后，除国国内、外进修修外，主要以以日常工作及及参加病理读读片会来进行行学术交流和和提高业务。。读片会的内内容可以是疑疑难病理、典典型病理、新新发现的病理理等，通过读读片不断总结结经验教训。。在病理读片上上结合具体病病例进行临床床讨论，及时时传达病理新新分类、新分分型、新动态态和诊断标准准的变更，及及本学科新的的学术与研究究热点。五、病理诊断断的局限性（1）一次活活检的病理诊诊断是反映疾疾病某一阶段段的病理变化化，当一种疾疾病处于非特特征性病变时时期，病理检检查难以作出出确切的诊断断。（2）当病理理检查和临床床取材不到部部位时，也会会造成误诊和和漏诊。（3）只反映映当时对某种种疾病的诊断断标准，随着着认识的加深深，诊断标准准会有所变化化。（4）病理诊诊断标准虽是是客观的，但但病理医师对对标准的掌握握带有主观性性和经验性，，一张切片经经不同专家会会诊会出现几几种诊断。（5）病理诊诊断中的疑难难问题可借助助一些新技术术、新方法辅辅助，但我国国多数病理科科技术装备发发展滞后，对对于一些“同同形异病”难难以作出区别别诊断。（6）术中快快速冰冻切片片的诊断局限限性更大。第二节病病理与临床的的关系一、病理医师师与临床医师师的关系1、临床医生生活检标本取取材原则⑴取材要取取最可疑的病病灶；⑵应在病变变与正常组织织的交界处取取材；⑶避免坏死死组织及明显显继发感染区区；⑷不要沿病病灶做水平切切取，应垂直直切取且有一一定的深度；；⑸活检取材材应避免挤压压或用无齿镊镊钳夹；⑹大的标本本宜对解剖位位置标记；⑺淋巴结活活检应切除完完整的淋巴结结送检。2、临床医生生病理送检注注意事项⑴活检标本本要有代表性性；对送检的的各种病理标标本应在取出出后保持完整整，有必要先先送病理医生生进行全面检检查。⑵正确填写检检查申请单；；⑶病理标本及及时送检与固固定：注意同同一病人的不不同标本应分分别置于不同同的容器中；；⑷熟悉各种病病理诊断方法法的适应范围围及其局限性性。⑸了解病理诊诊断的种类；；⑹了解并掌握握好冰冻切片片或快速石蜡蜡切片的适应应症，不同组组织准确率有有所不同。⑺临床医生应应有一定的病病理知识。3、外科医生生与病理医生生的密切合作作1968年RamonCabanas对阴茎茎癌患者进行行淋巴结造影影检查找到原原发肿瘤引流流到达的第一一个淋巴结，，他将这个淋淋巴结命名为为“前哨淋巴巴结”（sentinellymphnode），即原原发肿瘤引流流区域淋巴结结发生转移必必经的第一个个淋巴结，肿肿瘤以此进一一步转移至远远处淋巴结。。前哨淋巴结结作为有效的的屏障，可以以暂时阻止肿肿瘤细胞在淋淋巴道的进一一步扩散，如如前哨淋巴结结无肿瘤转移移，理论上讲讲原发肿瘤引引流区域的其其它淋巴结就就不会发生肿肿瘤转移（少少数情况下有有跳跃式转移移的可能）。。4、组织标本本的协调与处处理病理诊断方法法还包括脱落落细胞、细针针穿刺吸取细细胞学、微生生物培养、流流式细胞仪、、生化学、免免疫学、遗传传学等特殊的的实验室检查查。为了进行行这些补充性性的研究，标标本在新鲜时时就应该进行行分门别类的的处理，病理理医生的职责责是协调这些些工作，并结结合每项工作作提供的信息息，最后作出出综合性诊断断，为临床医医生提供尽可可能多的信息息。5、学习与应应用新技术病理工作者迎迎接挑战的方方法，一是学学习，应用新新技术以丰富富和充实学科科内容和面貌貌。学习、研研究、应用分分子生物学新新技术的任务务，病理工作作者应责无旁旁贷地担负起起来。二是共共享经验，病病理医生应力力争把新技术术、新成果推推广到日常工工作中，使临临床医生更好好地利用这些些有价值的资资料，使病理理医生真正能能成为“医生的医生生”（pathologistsare““doctors’doctors”），在临床医生生诊断治疗病病人的过程中中病理医生应应该是他们最最好的咨询者者和合作者。。现代病理学的的迅速发展，，使病理医生生和临床医生生的联系更加加紧密。高明明的临床医生生应具有病理理观念并掌握握相关病理知知识和时刻依依靠病理，优优秀的病理医医生应全面了了解病人的临临床情况及临临床医生的判判断，对不能能确定的病例例应与临床医医生进行了解解讨论，作必必要的解释，，以避免不必必要的误解。。二、病理工作作与社会的关关系尽管病理学作作为专业性很很强的实践课课程，但对疾疾病的认识和和医学知识的的发展，对病病因，伤残和和死亡的观点点均对社会产产生广泛的影影响。有时对对疾病病因的的争论是与社社会和政治相相关。有批评评家们认为，，病理学这门门学科，只是是确定某些疾疾病的动因，，而不是实际际的病因。如如结核杆菌是是导致结核感感染的动因，，因为很多人人暴露于该细细菌并未发生生该病，社会会权利的剥夺夺和营养不良良（两者都是是流行病学上上与结核风险险有关的因素素）可能被认认为是实际病病因。03年年的非典暴露露出政府部门门对公共卫生生的忽视与重重大疫情应急急能力的缺陷陷。毫无疑问问，20世纪纪很多严重感感染性疾病的的发生率显著著降低，至少少有一部分是是由于住房，，卫生，营养养和排水系统统得到很大的的改善，环境境得到了保护护，同时也包包括针对病原原体的特殊免免疫和抗生素素的发展。评估一个国家家的健康状况况，运用病理理学的方法无无论在活体活活检或死后尸尸检中都是最最可靠的，这这门学科在计计算人群某种种疾病的发生生率上起着重重要的作用，，并根据病人人所能得到的的最大利益来来部署预防和和治疗资源。。当癌症统计计数据是根据据组织学所提提供诊断作为为基础时，其其结论最为可可靠。病理学的很多多方法都能用用于人群中疾疾病筛查的早早期发现。疾疾病越早发现现治疗效果越越好。通过落落实国家筛查查项目，在很很多城市，妇妇女定期作宫宫颈刮片检查查，脱落细胞胞镜检，以判判定有无与癌癌症发生有关关的最早期改改变，使宫颈颈癌的死亡率率下降。尽管管筛查乳房癌癌主要通过乳乳房X－线影影像，但任何何异常都将通通过从可疑部部位抽取细胞胞检查或通过过对组织本身身的组织学检检查来进行进进一步确诊。。第三节病病理工作的基基本流程一、临床病理理科的业务范范围1、活体标本本、手术标本本、脱落细胞学的病理冷冻或或快速石蜡切切片诊断，开开展组织化学学、免疫组织织化学、原位位杂交、超微微病理、其他他分子病理学学技术等工作作，判断疑难难病变的性质质，为临床提提供可靠的治治疗依据，为为科研打下良良好的基础。。2、定期开展展临床病理讨讨论会（包括括手术前后临临床病例讨论论会、疑难病病案讨论会和和尸检后的临临床病理讨论论会）或举办办专题读书报报告会及学术术讲座。加强强病理医师与与临床医师间间的沟通与共共识。3、开展临床床常规尸体解解剖，探讨死死亡原因，提提高临床对疾疾病的认识，，促进诊疗水水平的提高。。4、承担病理理教学和科研研任务，病理理会诊及其他他工作。二、病理标本本的大体观察察与取材病理医生必须须对活检组织织标本，尤其其是切除标本本，即时验收收送检标本，，注意查对姓姓名、编号、、标本与送检检单记载是否否相符。病理理医生要了解解有关临床病病史、相关的的实验室检查查结果，根据据外科医生送送检的标本所所应用的钳夹夹、缝合或涂涂墨水的方法法标明解剖学学位置，特别别对标明组织织学的切缘要要仔细观察，，详细描述在在病理报告中中。1、组织及时固定定：固定液为组织织体积的10倍以上。最最常用的固定定液为10%formalin，其渗透组织的能能力为1mm/小时，大大标本一般需需6-12小小时。胃肠等腔道器器官应剪开，，用大头针钉钉在硬纸板上上，面朝下固固定，肺固定定时其上应加加上脱脂棉，，防止肺表面面干燥，利于于固定液渗入入。钙化组织织与骨组织应应脱钙处理，，骨标本一般般需2-3周周固定。结核核病变应加长长固定时间。。固定标本不能能冻存。若若当时无合适适的固定液，，可将标本浸浸泡于生理盐盐水中冰箱内内保存。若需要特殊处处理标本，如如微生物培养养、免疫组织织化学、电镜镜观察等，外外科医生在手手术前就应与与病理医生联联系来确定组组织特殊的固固定方法。2、取材：应详细记录大大体标本的外外观与特征、、病灶大小、、病变边缘与与组织切缘的的距离及对淋淋巴结的检查查情况，对于于肉眼上无法法观察的病变变可以用相应应样本的X光光片对照观察察，切取每一一薄片或将组组织切取薄片片卷成面包卷卷样以防止漏漏诊，必要时时应画简图示示意，取材数数量不宜过少少，有时肿瘤瘤为混合类型型，只取少数数瘤块不能代代表肿瘤的全全部成分，或或导致隐匿性性癌的漏诊。。瘤周淋巴结结应全部取材材，多发性肿肿瘤结节也应应编号逐一取取材。避免免取材刀来回回拖拉，避免免使用有齿镊镊。取肿瘤组组织标本时应应该取瘤组织织、瘤与非瘤瘤交界处组织织及手术切缘缘或管道断端端。取病灶组组织块一般1.5*2*0.2cm3。取材厚厚度不宜超过过3mm。在在切取纤维组组织、肌肉组组织时尽可能能按纤维平行行走向切取，，小组织如胃胃粘膜、肾活活检组织、肝肝活检等应用用滤纸包裹或或用伊红标记记。三、病理切片片1、冰冻切片片冰冻切片可以以在病人术中中进行，以便便外科医生决决定下一步的的治疗方案。。对病理医生生来说诊断冰冰冻切片要求求快、准、可可靠。但冰冻冻切片质量不不如石蜡切片片，取材亦有有限。2、石蜡切片片石蜡切片虽需需较长的制备备时间（大约约12-24h），但石石蜡切片的优优点恰是冰冻冻切片所不具具备的，可以以多取材、多多切片，可以以避免冰冻切切片中的形成成冰晶、造成成的细胞肿大大等。某些组组织如脂肪、、骨等冰冻切切片难以切取取，而石蜡切切片可以获得得满意的结果果，特别是有有些软组织的的肿瘤最好用用石蜡切片来来诊断。石蜡蜡切片也有利利于永久性的的保存。根据据需要针对特特定的组织成成分如粘液、、糖原、胞浆浆内颗粒、色色素、胶原、、细菌、真菌菌等可采用特特殊的组织化化学染色。3、切片的制制作过程⑴水洗将固定液甲醛醛尽量洗脱。⑵脱水和透明明（室温18℃℃）从70%、75％、、80%、85％、90%、95%、95％％，每次2-3h，无水水酒精两道，，各0.5－－1h。胃肠肠、宫颈等活活检小块组织织只需80%-100%酒精各30-45m。。脱水后，用用两道二甲苯苯使组织透明明，每道各30-40m。⑶浸蜡在熔化的石蜡蜡内浸渍，蜡蜡的熔点在52-56℃℃之间，室温温低，用稍低低熔点蜡，室室温高，应用用高熔点硬蜡蜡。浸蜡温度度控制在60-62℃左左右，每道1.5-2h，共两道，，总浸蜡时间间不宜超过4h。⑷包埋石蜡包埋，将将熔化的石蜡蜡（熔点58-62℃））倒入包埋框框，用加温的的镊子将浸蜡蜡的组织块放放入，注意特特殊包埋面，，用镊子轻压压组织使之平平贴于底部，，小块多颗组组织尽量放在在一起在一个个平面上。包包埋完毕，蜡蜡块稍凝后，，用冷水冲洗洗，待其凝固固，取出蜡块块，修整切面面，置冰室冷冷冻使之加速速凝固。⑸切片切片厚度一般般为4-6um，切下的的蜡片要求完完整、薄、均均匀。正面向向上铺在温水水中（水温应应低于蜡熔点点10-12℃）。夏天天切片应准备备冰块，以冷冷却蜡块与刀刀片。⑹展片与捞片片展片水温应在在42-45℃之间。捞捞片时载玻片片应干净，选选择完整、无无皱褶的蜡片片，贴覆于玻玻片1/3处处，皮肤组织织表面向上，，胃肠等应将将浆膜面向上上铺片。⑺烤片一般在60℃℃的温箱内烤烤片0.5-1小时左右右，血凝块、、皮肤组织应应即时烤片，，脑组织应待待晾干后烤片片。（8）脱蜡经二甲苯两道道，分别20分钟和15分钟，无水水乙醇5-10分钟，95%、90%、85%酒精各两分分钟，自来水水洗两分钟。。（9）HE染染色苏木素染色1-5m，经经水略洗1m，用1%盐盐酸酒精分化化20s，充充分水洗10m，可用自自来水或弱碱碱液（稀氨水水1%反蓝30s）蓝化化并流水冲洗洗5m以上，，最后入伊红红复染1m左左右。（10）脱水水和封片脱水时，80%酒精一道道，85%、、90%、95%各两道道，各1m，，无水酒精两两道各2m，，二甲苯三道道各2m，随随后用中性树树胶封固，盖盖上盖玻片，，不能留有气气泡，最后粘粘贴标签，做做好标记。三、镜下观察察与诊断病理医生在阅阅片前应根据据肉眼取材记记录，查对组组织块是否相相符，避免漏漏诊，阅片时时务必全面、、细致，从低低倍镜到高倍倍镜观察，要要客观，不可可先入为主迎迎合临床诊断断，有时肿瘤瘤引起广泛的的炎症反应，，要注意寻找找淹没在炎症症细胞中的癌癌细胞，有些些不典型增生生与原位癌很很难区别，肿肿瘤诊断与分分类目前推荐荐世界卫生组组织的标准，，这将有利于于与国际接轨轨，而且使病病理诊疗工作作与学术交流流更加规范。。第四节细细胞病理学一、细针穿刺刺吸取细胞学学（FNAB）概述FNAB所取取到的细胞是是活细胞，其其方法不造成成过多的创伤伤，可适用于于全身从体表表到内脏几乎乎所有部位。。吸取的细胞胞除了可进行行诊断外，还还可以通过对对活细胞进行行一系列有意意义的检查，，如细胞化学学染色、细胞胞免疫组化、、电镜下超微微结构观察细细胞器、测定定DNA含量量、进行细胞胞培养建立细细胞株、检测测细胞标记、、肝细胞中糖糖原定量及荧荧光免疫检查查，今后还将将在形态学、、组织结构和和功能学方面面进一步扩展展。FNAB的成成败在于（1）穿刺医医生能击中目目标；（2）制成的的一张薄而均均匀的涂片；；（3）病理医医生对细胞学学的经验。FNAB检查查唯一的禁忌忌症是有出血血性素质或出出血倾向的病病人。FNAB检查查的并发症主主要是考虑有有无使癌细胞胞转移或沿针针道扩散的问问题，极少发发生这种并发发症。FNAB检检查的局限限性在于吸吸取组织较较少，有时时为诊断带带来困难，，可以在重重复针吸复复查中加以以解决。FNAB与与病理组织织学切片有有所不同，，对肿瘤生生长的组织织特异性与与分型及判判断转移癌癌的组织起起源尚有局局限性。在在FNAB操作的过过程中任何何一个环节节均会影响响诊断的正正确性，当当操作不当当时吸取物物主要是血血液或病变变组织碎块块太少而无无法诊断，，又因为肿肿瘤病变不不均匀未获获得本质性性病变细胞胞而漏诊或或误诊，临临床医生应应该了解该该项技术的的优点与缺缺点。二、主要脏脏器的FNAB检查查简介及意意义1．甲状腺腺甲状腺炎的的病例通过过FNAB明确诊断断免于手术2．乳腺仅以细胞学学诊断进行行手术及放放、化疗者者均不多病理组织学学核对。3．肺对肺部良恶恶性肿瘤诊诊断的准确确率很高，只报癌细胞胞类型，不不报分化程度。对未分化癌癌直接报小小细胞型或或大细胞型型。4．淋巴结结转移与原发5．肝病变性质的的判断，在B超、CT引导下下准确的针针吸。6．胰在经皮B超、经经皮肝穿刺刺胆管造影影（PTC）、逆行行胰胆管造造影（ERCP）等影像像学引导下下穿刺可达达50-80%的阳阳性率，术术中直接穿穿刺的阳性率率为89-100%，一般无无假阳性，，是胰腺癌癌早期诊断断的重要手段。对壶腹部肿肿瘤及胰腺腺内分泌肿肿瘤均可明明确诊断，在胰腺癌和胰腺腺炎鉴别诊诊断中尤为为适用。7．肾各种种肾肾病病与与肿肿瘤瘤、、移移植植肾肾等等8．．前前列列腺腺诊断断肿瘤瘤、、结核核或或特特殊殊病病原原体体感感染染等等，，监监测测前前列列腺腺癌癌对对雌激激素素治治疗疗反反应应和和对对放放疗疗反反应应9.睾睾丸丸主要要适适应应症症是是男男性性不不育育和和占占位位性性病病变变定定性性第五五节节术术中中病病理理诊诊断断手术术中中病病理理诊诊断断的的方方法法包包括括冰冰冻冻切切片片、、快快速速石石蜡蜡切切片片和和手手术术中中细细胞胞学学诊诊断断。。其其中中以以冰冰冻冻切切片片应应用用较较广广,约约占占各各医医院院病病理理活活检检标标本本的的5%。。1818年年PieterdeRiemer首首创创冰冰冻冻切切片片技技术术，，1891年年Halsted和和Accarty将将冰冰冻冻切切片片技技术术列列为为正正式式诊诊断断方方法法。。目目前前在在国国内内外外普普遍遍应应用用冰冰冻冻切切片片技技术术和和其其它它快快速速诊诊断断技技术术来来解解决决手手术术台台上上的的诊诊断断问问题题，，称称为为手手术术中中病病理理诊诊断断(IntraoperativePathologicDiagnosis)。。国国外外医医院院的的常常规规冰冰冻冻切切片片室室一一般般都都设设在在手手术术室室旁旁，，临临床床医医生生和和病病理理医医生生在在手手术术中中讨讨论论诊诊断断问问题题极极为为方方便便。。为为提提高高手手术术中中诊诊断断的的精精确确率率提提供供了了条条件件。。一、、冰冰冻冻切切片片的的用用途途1、、决决定定病病变变的的性性质质2、、确确定定切切除除边边缘缘是是否否有有残残留留的的癌癌组组织织3、、辨辨认认组组织织4、、确确定定有有无无淋淋巴巴转转移移癌癌正如如Ackerman所所说说：：冰冰冻冻切切片片是是为为外外科科医医生生确确定定治治疗疗的的决决心心所所必必需需。。二、、冰冰冻冻切切片片诊诊断断的的局局限限性性1、、冰冰冻冻切切片片技技术术的的缺缺陷陷是是切切片片质质量量差差。很多多著著名名的的病病理理学学家家，，如如Ewing、、Brewer和和Simpson，，在在1920～～1940年年期期间间很很怀怀疑疑冰冰冻冻切切片片诊诊断断的的准准确确性性。。1960年年Cryostat冰冰冻冻切切片片机机在在外外科科病病理理中中应应用用以以后后，，冰冰冻冻切切片片质质量量明明显显提提高高。。2、、在在作作冰冰冻冻切切片片采采取取活活检检组组织织时时易易造造成成肿肿瘤瘤的的种种植植，3、、冰冰冻冻切切片片技技术术不不适适用用于于骨骨组组织织和和脂脂肪肪组组织织。4、、冰冰冻冻切切片片取取材材局局限限。5、、冰冰冻冻切切片片诊诊断断要要求求有有一一定定经经验验的的病病理理医医生生承承担担。三、、冰冰冻冻切切片片诊诊断断的的准准确确性性目前前，，从从大大量量的的冰冰冻冻切切片片诊诊断断的的资资料料看看，，冰冰冻冻切切片片诊诊断断的的准准确确性性一一般般可可达达97％％～～98％％。。不不同同的的组组织织其其诊诊断断的的准准确确性性不不完完全全一一样样，，如如Kaufman（（1986））统统计计，，乳乳腺腺疾疾病病诊诊断断的的准准确确率率为为97.9％％，，淋淋巴巴结结为为96.2％。。四、、冰冰冻冻切切片片误误诊诊原原因因的的分分析析(一一)临临床床医医生生方方面面临床床医医生生提提供供的的临临床床资资料料不不全全，，如如性性别别、、年年龄龄、、肿肿瘤瘤确确切切部部位位等等不不准准确确。。在在脑脑外外科科手手术术中中肿肿瘤瘤位位于于髓髓内内还还是是髓髓外外，，病病理理诊诊断断大大不不相相同同。。在在冰冰冻冻切切片片诊诊断断时时，，如如果果病病理理申申请请单单上上填填写写不不全全，，病病理理医医生生一一定定要要不不怕怕麻麻烦烦，，向向临临床床医医生生问问清清楚楚以以后后再再下下诊诊断断。。有有时时临临床床医医生生开开始始取取材材未未取取到到病病变变组组织织，，而而是是病病变变周周围围组组织织，，结结果果会会出出现现冰冰冻冻切切片片组组织织与与后后送送做做石石蜡蜡切切片片的的组组织织不不同同，，导导致致诊诊断断前前后后不不一一致致。。故故在在手手术术中中一一次次取取材材不不能能肯肯定定诊诊断断时时，，应应要要求求临临床床医医生生再再次次取取材材，，以以明明确确诊诊断断。。对对于于大大手手术术如如截截肢肢、、胰胰十十二二指指肠肠根根治治术术等等，，要要采采取取十十分分谨谨慎慎的的态态度度，，没没有有百百分分之之百百的的把把握握，，切切忌忌作作出出肯肯定定诊诊断断。。但但是是，，也也要要尽尽量量减减少少假假阴阴性性诊诊断断，，因因为为再再次次手手术术会会给给病病人人增增加加痛痛苦苦。。(二二)病病理理医医生生方方面面1．．主主要要误误诊诊原原因因主要要是是对对冰冰冻冻切切片片造造成成的的人人为为假假像像不不熟熟悉悉。。与与石石蜡蜡切切片片对对照照，，冰冰冻冻切切片片有有以以下下特特点点：：(1)细细胞胞形形态态改改变变(2)切切片片质质量量差差，，细细胞胞结结构构模模糊糊，，辨辨认认病病变变较较困困难难。。(3)细细胞胞内内出出现现大大量量空空泡泡。。需需做做冰冰冻冻切切片片的的组组织织不不宜宜浸浸水水，，最最好好用用干干纱纱布布包包裹裹组组织织送送检检。。(4)冰冰冻冻切切片片由由于于胞胞浆浆境境界界不不清清，，多多核核巨巨细细胞胞较较难难辨辨认认。。(5)胞胞浆浆内内嗜嗜酸酸性性颗颗粒粒亦亦不不甚甚清清楚楚，，在在诊诊断断时时必必须须注注意意。。(6)血血窦窦丰丰富富的的组组织织或或肿肿瘤瘤误误诊诊为为肝肝癌癌、、腺腺泡泡状状软软组组织织肉肉瘤瘤；；肾肾透透明明细细胞胞癌癌等等。。2．．基基本本病病变变辨辨认认错错误误需需要要注注意意的的有有以以下下几几点点：：(1)细细胞胞形形态态浆细细胞胞浸浸润润是是一一个个““陷陷井井””要要特特别别注注意意(2)间间皮皮细细胞胞增增生生，易易误误诊诊为为腺腺癌癌细细胞胞。。(3)上上皮皮细细胞胞的的变变异异：癌癌放放疗疗和和化化疗疗后后细细胞胞异异型型性性。。(4)对对一一些些腔腔隙隙结结构构辨辨认认不不清清，①把把血血管管腔腔隙隙误误认认为为腺腺管管，，②把把转转移移性性腺腺癌癌或或血血管管肿肿瘤瘤的的腔腔隙隙误误认认为为血血管管腔腔隙隙。。(5)淋淋巴巴结结一一般般不不作作冰冰冻冻切切片片，淋淋巴巴瘤瘤在在手手术术中中不不涉涉及及扩扩大大手手术术问问题题。。需需要要手手术术中中确确诊诊的的主主要要是是决决定定淋淋巴巴结结有有无无癌癌转转移移，，这这对对于于手手术术范范围围是是重重要要的的。。（6））骨基基质质与与透透明明变变性性区区别别神经鞘瘤间质质透明变性，，误认为是骨骨基质，而误误诊为骨肉瘤瘤。五、冰冻切片片诊断的注意意事项1、临床资料与病病理所见相结结合2、检查大体标本本要仔细，也要避免看了了大体标本就就下结论。3、要注意各各部位可能发发生的异位或或胚胎残留组组织。4、镜检中如如看到可疑肿肿瘤组织不能能确诊时，可可将冰冻组织织深切一张，，或重切一块块组织再做。5、观察切片片要有顺序六、冰冻切片片标本的组织织部位临床送检的冰冰冻切片组织织，几乎包括括人体的各种种组织，但其其数量差别甚甚大。Ackerman(1959)报告告的1269例中，乳腺组织440例(34.7％)，占第一位位；Holaday(1974)报报告10000例，乳腺腺组织1616例(16％)，占第第一位；上海第一医学学院朱世能等等(1979)报告6850例中，，乳腺组织有有2368例例(34-45％)；解解放军总医院院(1999)报告的7190例冰冰冻切片中乳乳腺组织1236例(17.19％％)，占第二二位，而甲状腺组织有1801例例(25.05％)，占占第一位，此此外，神经组织亦较多，有686例(9.54％)，居第三位位。七、手术中细细胞学诊断手术中细胞印印片或涂片与与冰冻切片诊诊断互为补充充，有助于确确保手术中快快速病理诊断断的准确性。。早在1927年Dudgeon首先开创了““手术中细胞胞学诊断”，，近年来，文文献报道越来来越多。大家家认为，细胞学检查是是冰冻切片诊诊断重要的助助手，而不是是竞争对手，它是具有无无可置疑的实实用价值。手手术中细胞学学诊断的总准准确率(97％～98％)，比冰冻切片片准确率略低低。1．细胞学诊诊断的优点(1)适合于于基层医院。。制片速度快快。（2)细胞的的细微结构清清晰，由于细细胞固定及时时，细胞核结结构清晰，可可辅助冰冻切切片中良性与与恶性肿瘤的的鉴别诊断。。胞浆内黑色色素沉积在涂涂片或印片上上都能见到，，有助于黑色色素瘤的诊断断。软斑症的的诊断，胞浆浆内的软斑小小体比组织切切片清楚。(3)适用于于难以切片的的组织如脂肝肝、骨组织和和钙化组织。。小活检标本本与液体标本本。(4)适用用于传染性疾疾病的诊断，，避免恒冷切切片机的污染染和消毒。如如结核的大量量坏死，冰冻冻切片困难，，可经涂片检检查，未见恶恶性肿瘤细胞胞，可以初步步排除恶性肿肿瘤之可能。。组织中见霉霉菌，寄生虫虫等，涂片中中均清晰可见见，同时可作作快速PAS法，可确诊诊霉菌感染。。2．细胞学诊诊断缺点(1)细胞印印片或涂片没没有组织结构构。(2)炎症或或其它原因可可引起细胞异异质性改变。。(3)内分泌泌肿瘤的良恶恶性诊断，不不能以细胞异异型性来区别别，在细胞印印片或涂片中中见一些大细细胞，很容易易误认为恶性性肿瘤细胞。。(4)细胞涂片不均均匀，质量差差，印片中细细胞成分少，，均影响细胞胞学诊断的准准确性。第六节尸尸检的作用尸体剖验（autopsy）简称尸尸检，是检验验治疗失败和和成功的“金金标准”。通通过尸检除验验证诊断和治治疗外，也常常是医疗纠纷纷、医疗差错错、事故、医医学上“不可可避免的错误误”判定和处处理的直接依依据，许多新新的病变通过过尸检来认识识，如艾滋病病。在发达国国家明文规定定尸检率低于于15%的医医院不能承担担教学任务。。我国尸检率不不高的原因分分析尸检的作用：1、判定死因因2、审查临床床诊断的准确确性3、本科生和和研究生的教教学4、研究疾病病的病因和机机制5、收集有关关疾病发生率率的确切统计计数字对医学研究生生来说，尸检检是学习病理理的重要媒介介。这是一个个将临床体征征和病理解释释联系的机会会。尸检工作对认认识疾病、提提高医疗水平平仍然是相当当重要的。尸尸检结果是支支持还是悖于于临床诊断，，确定残余病病变的程度、、评价治疗是是否充分、新新疗法是否有有效，确认死死亡原因。若若临床医生肯肯花时间参与与病理医生的的尸检过程，，病理医生能能够针对问题题作出及时并并令临床医生生满意的结论论，或用尸检检照片整理总总结尸检报告告，那么尸检检的作用就会会大大提高。。事实上临床床病理等方面面的技术进步步并没有改变变尸检可以发发现意料之外外的有临床意意义的情况，，而意料之外外的尸检发现现导致医学诉诉讼是很少见见的，何况如如果给病人诊诊断中出现了了严重错误，，难道医学专专家不应该揭揭示它吗？临床病理讨论论会（clinicalpathologicalcoferencingCPC）对提高临床诊诊断和治疗水水平，对医学学发展有重要要的意义，从从某种意义上上讲是尸检的的延伸，是从从更深的层次次上探讨临床床对患者进行行治疗的成功功或失败，使使尸检工作结结果上升为理理性认识。探探讨我们工作作中忽视的现现象，吸取教教训，学会辨辨证地分析客客观观察的方方法，这是其其它方法无法法代替的，无无论哪一科哪哪一级医生都都一样，当然然也包括病理理医生。第七节病病理学发展概概要一、大体病理理学（Grosspathology）在显微镜技术术未用于医学学前（1800年），对对疾病的观察察仅限于肉眼眼，由此也积积累了许多关关于疾病的知知识。这种研研究疾病的方方法称之为大大体(gross)或宏宏观病理学(macroscopicpathology)。特别别是尸检仍然然是一种重要要的研究方法法。很多疾病病的大体病理理学很具有特特征性。二、光镜技术术（lightmicroscopy）RudlfVirchow(1821—1902),德德国的病理学学家，细胞病病理学的创始始者。这并不不意味着Virchow的细胞病病理学理论不不可改变。事事实上当今科科技的发展在在分子水平上上变革了我们们对许多疾病病的理解，和和疾病中细胞胞改变与临床床表现的解释释。三、组织化学学技术（Histochemistry）组化技术对通通常组织切片片用特殊组织织化学技术处处理，使其细细胞的化学特特征能在显微微镜下观察到到。四、免疫组化化和免疫荧光光法（Imunohistochemistryandimunofluoresence）利用抗体（免免疫球蛋白及及其特异性抗抗原）来观察察组织切片或或细胞渗出液液中的成分;免疫荧光光技术需要特特殊的荧光显显微镜，其染染色液不可长长久保留易退退色。因此免免疫组化技术术变得更加普普及。随着单单克隆抗体技技术的发展，，增加了免疫疫组化技术的的范围。五、电子显微微镜技术（Electronmicroscopy）在细胞器水平平上研究疾病病的病理变化化，并可发现现病毒。六、生化技术术（Biochemicaltechniques）七、血液学技技术（Haematologicaltechniques）血液病理学诊诊断中的骨髓髓活检。八、细胞培养养（Cellcultures））细胞培养广泛泛用于科研和和诊断。肿瘤瘤药敏九、医学微生生物学（Medicalmicrobiology）十、分子病理理学（Molecularpathology）病理学发展中中分子病理学学揭示了由于于基因组错误误引起的分子子化学结构缺缺陷和指导氨氨基酸合成的的碱基序列的的错误等疾病病基础。利用用原位杂交技技术，在组织织切片中，可可以看到一些些特殊基因和和他们的mRNA的存在在。极小量的的核酸可用PCR扩增研研究基因特异异性。分子病理学的的作用已证明明在各种疾病病的诊断中。。例如，异常常血红蛋白分分子的镰形红红细胞疾病、、骨化不全疾疾病中的异常常胶原分子、、调控细胞和和组织生长的的基因改变、、肿瘤发生、、发展中的作作用等。1、流式细胞胞术（flowcytometryFCM））可以快速定量量细胞内DNA，用于测测定肿瘤细胞胞DNA的倍倍体类型和肿肿瘤组织中S+G2/M期的细胞所所占的细胞比比例（生长分分数）。恶性肿瘤细胞胞中DNA含含量不规则增增多，主要为为多倍体（polyploid）和和非整倍体（（aneuploid）），良性肿瘤瘤多为二倍体体。生长快的恶性性肿瘤生长分分数较高，检检测DNA倍倍体和生长分分数不仅可作作为恶性肿瘤瘤诊断的参考考指标，而且且可反映肿瘤瘤的恶性程度度和生物学行行为，并可用用于细胞免疫疫分型等。2、生物芯片片在病理中的的应用随着人类基因因组计划（HumanGenomeprojectHGP）即全部核苷苷酸序列（编编码人类全部部染色体的约约10万条基因）的的完成，人类类基因组研究究的重心逐渐渐进入后基因因组时代（postgenomeEra），向基因的的功能调控机机制及基因的的多样性倾斜斜。对基因组组的表达全貌貌进行扫描或或是对具有大大量多态性的的人群基因组组进行真正的的了解，从而而阐明人类的的整个生命活活动。生物芯片技术术是通过缩微微技术，根据据分子间特异异性地相互作作用原理，将将生命科学领领域中不连续续的分析过程程集成于硅芯芯片或玻璃芯芯片表面的微微型生物化学学分析系统，，以实现对细细胞、蛋白质质、基因及其其它生物组分分的准确、快快速、大信息息量的检测。。生物芯片的本本质是进行生生物信号的平平行分析，它它利用微点阵阵技术将成千千上万的生物物信息密码集集中到一小片片固相基质上上，从而使一一些传统的生生物学分析手手段能够在尽尽量小的空间间范围内，以以尽量快的速速度完成。生生物芯片技术术与传统的仪仪器检测方法法相比具有高高通量、微型型化、自动化化、成本低、、防污染等特特点。鉴于生生物芯片技术术领域的飞速速发展，美国国科学促进会会将生物芯片片评为1998年的十大大科技突破之之一，认为生生物芯片技术术将是继大规规模集成电路路之后的又一一次具有深远远意义的科学学技术革命。。通过基基因芯芯片技技术对对肿瘤瘤的研研究可可以发发现大大量差差异表表达基基因，，即研研究与与肿瘤瘤相关关的基基因群群，既既可以以发现现更多多的肿肿瘤标标记蛋蛋白，，用于于临床床诊断断与治治疗，，亦有有大规规模研研究新新基因因的初初步功功能。。从基基因学学上进进行肿肿瘤分分类，，从判判断肿肿瘤细细胞分分子异异质性性上解解释肿肿瘤患患者临临床表表现的的差异异。同同时芯芯片提提供了了对未未来评评价肿肿瘤治治疗的的新手手段。。由于于发现现在肿肿瘤基基因谱谱中成成百上上千的的基因因参与与肿瘤瘤恶性性表型型，提提示新新的肿肿瘤基基因治治疗或或功能能治疗疗手段段将是是瞄准准信号号传递递的上上游分分子。。组织芯芯片是是继基基因芯芯片和和蛋白白芯片片之后后生物物芯片片家庭庭的又又一新新成员员。它它的出出现无无疑将将给病病理学学研究究开辟辟出一一片新新天地地。有人预预言：：生物物芯片片将为为整个个生命命期中中疾病病预防防提供供永久久性““线路路图””，该该项技技术的的应用用前景景看好好，不不仅将将用于于许多多创新新性的的研究究，如如肿瘤瘤发生生机制制的研研究等等，而而且还还将代代替传传统体体格检检查和和疾病病诊断断方法法，尽尽早预预知疾疾病。。当代代与信信息产产业相相伴随随的计计算机机、精精密机机械等等科学学技术术是大大规模模解析析基因因信息息的基基础，，而基基因芯芯片从从实验验室走走向工工业化化却是是直接接得益益于探探针影影象原原位合合成技技术和和照相相平板板印刷刷技术术的有有机结结合、、双色色荧光光探针针杂交交系统统的建建立以以及激激光共共聚焦焦显微微技术术的引引入。。它使使合成成、固固定高高密度度的数数以万万计的的探针针分子子切实实可行行，而而且借借助激激光共共聚焦焦显微微扫描描技术术使得得可以以对杂杂交信信号进进行实实时、、灵敏敏、准准确的的检测测和分分析。。3、原原位杂杂交技技术（（insituhybridization））原位杂杂交是是组织织化学学和免免疫组组化两两种方方法的的革命命性突突破，，用已已知碱碱基序序列并并带有有标记记的核核酸探探针与与组织织或细细胞中中待检检测核核酸，，按碱碱基配配对的的原则则进行行特异异性结结合形形成杂杂交体体，然然后用用与标标记物物相应应的检检测系系统通通过组组化或或免疫疫组化化方法法在被被检测测的核核酸原原位形形成带带颜色色的杂杂交信信号，，在显显微镜镜下进进行细细胞内内定位位，这这一技技术为为研究究单一一细胞胞中DNA和编编码各各种蛋蛋白质质、多多肽的的相应应mRNA的定定位提提供了了可能能，为为分子子水平平研究究的细细胞内内基因因表达达及相相关基基因调调控提提供了了有效效的工工具。。临床应应用于于细胞胞遗传传学、、产前前诊断断、肿肿瘤和和传染染病诊诊断、、病原原学诊诊断等等，可可以原原位杂杂交与与免疫疫组化化并检检或多多重RNA的原原位杂杂交、、双重重原位位杂交交、原原位杂杂交的的PCR增增敏等等，预预测该该技术术将会会为生生命科科学开开拓新新的领领域。。十一、、远程程