正交试验报告课件

“救命仙草"石斛ShihuDENDROBIICAULIS石斛简介

我石斛属兰科石斛属多年生草本植物，全世界约有1400种，其中铁皮石斛(DendrobiumcandidumWal.lexLind.l)是我国常见的石斛品种之一。铁皮石斛具有抗肿瘤、抗氧化、降血糖和降血脂等多种功效，现代药理学研究表明，石斛多糖是石斛中的主要功能成分。

产地：主产于广西、贵州、广东、云南、四川等省区。制剂开发

目前市场上已研制开发出了铁皮枫斗、铁皮石斛冲剂（颗粒）、铁皮石斛饮料、铁皮石斛微粉、铁皮石斛酒、铁皮石斛茶、复方天人百合铁皮石斛、复方鲜石斛胶囊、复方鲜石斛片、复方鲜石斛丸、纳米石斛明目制剂药物、鲜石斛晶、纳米石斛夜光制剂药物、铁皮石斛复方制剂等系列保健产品。更多的产品有待于进一步的研究与开发。国内石斛研究热点分析铁皮石斛原球茎多糖提取最佳工艺研究超声法提取铁皮石斛多糖工艺的研究正交试验优选铁皮石斛类原球茎多糖的提取纯化工艺石斛中石斛多糖的提取工艺研究棒节石斛中的多糖分布及提取工艺研究超声波辅助提取金钗石斛多糖工艺优化研究基于正交试验法的铁皮石斛原球茎生长和多糖合成研究闪式提取铁皮石斛多糖石斛多糖提取工艺稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的研究霍山石斛原球茎液体培养条件的优化大苞鞘石斛胚组织培养及植株再生研究金钗石斛类原球茎诱导及增殖的正交试验3种石斛兰以茎段为外植体的离体快繁技术霍山石斛细胞悬浮培养及条件优化春石斛离体培养条件优化及其试管开花研究金属离子对霍山石斛类原球茎增殖及植株再生的影响不同激素浓度对铁皮石斛高效快繁体系的影响正交试验优选环草石斛不同氮磷钾营养水平对铁皮石斛组培苗生长的影响大苞鞘石斛组织培养快繁研究不同因素对大苞鞘石斛原球茎分化的影响金钗石斛原生质体的制备与融合铁皮石斛组培苗生根条件优化研究石斛ISSR-PCR体系的优化春石斛和铁皮石斛试管苗壮苗生根条件的优化石斛明目胶囊药材水煎醇沉工艺的正交试验石斛快繁技术石斛多糖提取工艺优化考查指标及方法多糖得率=提取得到的多糖质量/原料质量×100%多糖含量：多糖含量=总糖-还原糖。石斛多糖含量的测定方法：苯酚硫酸法苯酚制取:取苯酚200g，加铝片O.2g和碳酸氢钠O.1g，蒸馏，收集182摄氏度馏分，称取一定量重蒸苯酚，加入蒸馏水混匀，溶解即得。置棕色瓶中，放冰箱内备用。多糖工艺流程热水法回流提取多糖工艺流程：原料→称重→回流去杂质→热水浸提→过滤→滤液浓缩→80％乙醇（4～5倍）沉淀→过滤→烘干→复溶→Sevage法除蛋白（多糖粗品的纯化过程）→醇沉→烘干→铁皮石斛类原球茎多糖。影响因素：加水量、水温、浸提时间、提取次数优缺点：是传统的多糖的提取方法，成本低，取材方便，提取条件易于控制，经济适用，操作方法相对简单但是繁杂，重复提取次数较多，提取时间过长，提取效率相对较低。采用L8(24)正交设计，试验重复2次，各处理内容见表1。多糖提取条件的确立何铁光,杨丽涛,李扬瑞等.(2006).铁皮石斛原球茎多糖提取最佳工艺研究.西北农业学报,15(5),240-243.次数较少时间提取次数温度加水量整体含量小结果分析：影响响大小顺序是:提取次数>溶剂用量>提取温度>提取时间，各因素的最佳水平为A1B2C1D2。2h4h1次3次80℃100℃10倍20倍

根据多糖性能，选用水煎煮工艺，选择提取时的加水量、提取时间、提取次数、药材粉碎度4个试验因素，每个因素3个水平进行优选,采用L9(34)表对石斛进行石斛多糖的提取和测定，并作为考察指标。因素水平表见表1。钱叶,&吕不望.(2005).石斛中石斛多糖的提取工艺研究.中国现代应用药学,22(4),293-294.结果分析：影响石斛多糖含量的因素依次为粉碎度>提取次数>加水量>提取时间。最佳提取条件为A1B3C3D3,但根据计算，A因素2，3水平间几乎在同一数量级，从省时节能，降低成本的角度考虑，选择A2B1C2D3，即石斛中石斛多糖的最佳提取条件为将药材粉碎至粗粉，加水20倍量,提取3次,每次4h。4h6h8h10倍20倍30倍2次3次4次饮片小段粗粉多糖粗品的纯化原理：石斛多糖粗品中含有蛋白质,为进一步纯化多糖粗品需经脱蛋白处理。常用Sevage法即将多糖粗品的水溶液与氯仿和正丁醇混合,使蛋白质变性成为不溶性聚集在氯仿和水的界面上,经离心后可将蛋白质去除。粗多糖脱蛋白时,样品/氯仿+正丁醇(v/v)为1B0.35,氯仿/正丁醇(v/v)为1B0.4,反应时间以5min最佳。

粗多糖脱蛋白时,样品/氯仿+正丁醇(v/v)为1：0.35,氯仿/正丁醇(v/v)为1：0.4,反应时间以5min最佳。总结

通