肠道腺病毒的检测和临床意义课件

一、定义及血清型1一、定义及血清型1

肠道感染病毒主要包括肠道病毒和急性胃肠炎病毒

肠道病毒

(小RNA病毒科)

轮状病毒肠道腺病毒呼肠病毒科杯状病毒星状病毒2肠道感染病毒2腺病毒起源20世纪50年代初期，一位科学家对手术切除的人扁桃体增殖腺小块进行细胞培养时意外发现在培养的腺样组织内潜伏着一种未知的病毒，这种病毒可引起培养的单层细胞发生病变。由于这种病毒被首先发现于腺样组织中，1956年国际病毒命名委员会将这类病毒命名为腺病毒，1962年正式命名为腺病毒科3腺病毒起源20世纪50年代初期，一位科学家对手术切除的人扁桃腺病毒血清型目前，已经发现有100多种类型的腺病毒可以感染人、哺乳动物和禽类，其中能感染人类的腺病毒（人腺病毒）就有50多型，把人腺病毒的41个血清型分为A-F6个组：A-E组：各型病毒均能在人的组织细胞(如肾细胞)常规培养中增殖，称为普通腺病毒；F组（40和41型）：是从粪便中发现，用常规细胞培养不能增殖的腺病毒，仅在选择性细胞上生长，称为肠道腺病毒。

4腺病毒血清型目前，已经发现有100多种类型的腺病毒可以感染人流行性腺病毒胃肠炎广泛分布于世界各地，在小儿，发病情况仅次于轮状病毒性肠炎。最小发病年龄为1月，绝大多数发生于3岁以下的婴幼儿。Ad-40主要感染1岁左右婴儿，Ad-41则感染稍大的幼儿，全年均可发病，但腺病毒性胃肠炎一般呈散发性。5流行性5肠道腺病毒通过消化道传播，主要原因是因为树突状细胞缺乏腺病毒受体，不能感染附近淋巴结。流行性6肠道腺病毒通过消化道传播，主要原因是因为树突状细胞缺乏腺病毒腺病毒胃肠炎的潜伏期约10天，主要表现为腹泻，量少或多，呈水样便或稀便，少数可排出粘液，病程4-8天，常伴呕吐。部分患者有呼吸道症状，少数患者发热，病程多自限，排毒时间约1周。某些患者失水较严重，个别重度失水者可死亡。流行性7腺病毒胃肠炎的潜伏期约10天，主要表现为腹泻，量少或多，呈水各型腺病毒所致腹泻持续时间不等，以肠腺病毒胃肠炎腹泻时间最长，大多患者有呕吐，持续1-2天，少数有发热。非肠型腺病毒腹泻患者发热较多。约20％腺病毒肠炎患者有呼吸道症状。流行性8各型腺病毒所致腹泻持续时间不等，以肠腺病毒胃肠炎腹泻时间最长二、生物学性状9二、生物学性状9双链DNA病毒，二十面体立体对称，无包膜。引起婴儿病毒性腹泻。

腺病毒电镜图腺病毒模式图10双链DNA病毒，二十面体立体对称，无包膜。引起婴儿病毒性腹培养特性：人类腺病毒无敏感动物，也不能在鸡胚中生长。但能在来源于人的多种细胞培养中增殖，引起明显CPE：细胞肿胀变圆、集聚成葡萄串状，并可在感染的细胞核内形成嗜碱性包涵体。

生物学性状11培养特性：生物学性状11抵抗力

腺病毒外膜无类脂质包膜，故能耐乙醚和氯仿等脂溶剂；并能耐受蛋白酶及胆汁的作用。但不耐热在室温中可存活10d以上，56℃30min灭活。生物学性状12抵抗力

生物学性状12腺病毒的复制----严格按照日程表复制的病毒突出小结和六邻体都必须插入细胞表面的受体分子，病毒才能被细胞摄入，被内体包裹。在内体的酸性环境中降解，进入细胞质，将DNA释放到细胞核内。腺病毒利用自身的DNA聚合酶进行复制，先对一条亲代链进行互补复制，取代第二条亲代链，然后DNA聚合酶再对第二条亲代链进行复制，因此，病毒DNA的两条链都是连续的。13腺病毒的复制----严格按照日程表复制的病毒突出小结和六邻体三、致病性与免疫性14三、致病性与免疫性14对宿主防御的逃逸因为腺病毒复制缓慢，感染细胞容易受到宿主防御系统的攻击，因此腺病毒有1/4的基因组用来对付宿主的防御系统。通过释放两种E1B蛋白来抑制细胞的凋亡，使受感染的细胞能支持到病毒完成复制。致病性和免疫性15对宿主防御的逃逸因为腺病毒复制缓慢，感染细胞容易受到宿主防御感染后期病毒复制组装完成时，腺病毒产生病毒死亡蛋白给细胞致命一击彻底释放病毒。腺病毒制造VARNA来免遭干扰素的破坏，通过结合PKR，使之失活，使病毒蛋白质合成。16感染后期病毒复制组装完成时，腺病毒产生病毒死亡蛋白给细胞致命阻止MHC-I类分子在病毒感染细胞上表达以阻止CTL的攻击。腺病毒合成RID蛋白结合病毒感染细胞的死亡受体以逃避天然杀伤细胞的攻击。病毒利用自身的聚合酶进行基因组复制，增加了抗原漂移的机会。17阻止MHC-I类分子在病毒感染细胞上表达以阻止CTL的攻击。腺病毒对呼吸道、胃肠道、尿道和膀胱、眼、肝脏等均可感染，人腺病毒约1/3的已知血清型通常与人类疾病相关，但一种血清型可引起不同的临床疾患；相反，不同血清型也可引起同一种疾患。18腺病毒对呼吸道、胃肠道、尿道和膀胱、眼、肝脏等均可感染，人腺呼吸道感染呼吸道感染的典型症状是咳嗽、鼻塞和咽炎，同时伴有发热、寒战、头痛和肌肉痛等，包括以下4种不同的综合征：1．急性发热性咽喉炎由C组病毒引起，出现咳嗽，鼻塞、发热和咽喉部溃疡等症状，这些表现难以与其他病毒引起的轻型呼吸道感染鉴别2．咽结膜热多由B组腺病毒3和7型所致，愈后尚好，一般无后遗症。3．急性呼吸道疾病多由腺病毒4、7型引起，也可见于3型4、肺炎腺病毒肺炎约占儿童期肺炎的10%，多由腺病毒3、7型引起；在青年人腺病毒肺炎的病死率为8%～10%19呼吸道感染呼吸道感染的典型症状是咳嗽、鼻塞和咽炎，同时伴有发眼部感染

腺病毒致轻型眼部感染是呼吸道感染和咽喉炎的并发症。滤泡性结膜炎可由许多型腺病毒引起，类似于衣原体性结膜炎，而且为自限性。由腺病毒8、19和37型引起的角结膜炎为重型感染，具高传染性，以急性结膜炎开始，扩至耳前淋巴结，随后发生角膜炎。胃肠炎许多腺病毒在肠道细胞中复制，随粪便排出，但大多血清型与胃肠道疾病无关。而40型和41型腺病毒可引起婴幼儿与年少（4岁以下）儿童的胃肠炎，致腹痛、腹泻。C组腺病毒能引起某些婴幼儿肠套叠。

20眼部感染20其它疾病腺病毒11、12型能引起儿童急性出血性膀胱炎，尿中出现病毒。37型可引起女性宫颈炎和男性尿道炎，常由性传播感染。在免疫功能低下者可引起偶发或严重的病毒感染，尤其在器官移植病人中发生严重呼吸道感染和病毒性肝炎，多由1、5和7型腺病毒引起。艾滋病患者可感染多种血清型腺病毒，并能出现抗原性介于中间的杂合型毒株，而且常为致死性腺病毒感染。主要原因是腺病毒的E1A蛋白可反式激活HIV的转录，加速HIV的复制。临床发现37%的艾滋病患者病毒性腹泻是由腺病毒所致。

21其它疾病21免疫性腺病毒感染后，产生特异性抗体，对同型病毒的感染有保护作用，免疫力持久。

致病性和免疫性22免疫性致病性和免疫性22

四、肠道腺病毒诊断23

四、肠道腺病毒诊断23传统方法病原分离培养后,应用亚属特异的免疫荧光测定法、放射免疫测定、ELISA、DNA杂交等进行腺病毒亚属的鉴定。再应用型特异性血清进行中和试验。缺点：不仅费时费力,结果也不够理想24传统方法病原分离培养后,应用亚属特异的免疫荧光测定法、放射

病毒分离：标本（患者咽喉、眼分泌物、粪便等）敏感细胞CPE分离株为抗原，用抗病毒诊断血清作CF试验，确定是否为腺病毒；用已知腺病毒型特异性免疫血清做NT试验可定型。亦可用直接或间接免疫荧光方法，检测临床诊断疑为腺病毒肺炎的婴幼儿鼻咽部脱落细胞中的腺病毒抗原。微生物学检查法25病毒分离：微生物学检查法25血清学诊断

采取患者早期和恢复期双份血清做CF试验、HI试验及NT试验。恢复期血清抗体滴度比早期增长4倍以上有诊断意义。其中CF试验最为常用。微生物学检查法26血清学诊断

采取患者早期和恢复期双份血清做CF试验、HI试ELISA方法

检测ADV抗原、抗体操作简单、快速、特异性强，有助于临床对疾病的早期明确诊断，结果判定用简单的分光光度计，客观准确，3～4h即可出结果，可大批检测，阳性率远优于病毒分离，亦优于血清学技术，适用于流行病学调查。IgM产生早于IgG，有利于早期诊断，IgG产生稍晚，虽不能早期诊断，但相当一部分在7一14天内检测单份血IgG阳性再结合临床也可诊断。27ELISA方法检测ADV抗原、抗体操作简单、快速、特异胸部X线及CT影像表现

肺内表现以多肺叶受累的肺实变为主要特征，其中团簇状影尤为突出，此类团簇状影有较明显的特征性，常密度较高、边缘模糊、强化均匀。肺外表现以胸膜增厚和少量胸腔积液为主，少数患者出现纵隔气肿或气胸。小气道改变多见。28胸部X线及CT影像表现肺内表现以多肺叶受累的肺实变为主要分子生物学Alland和Saitoh-Inagawa在六邻体基因的β-管状物形成P1区设计了一对引物，应用PCR结合RFLP,即将腺病毒的特定序列用PCR扩增后,其产物再用限制性内切酶进行酶切图谱分析优点：法分辨率高、重复性好、简单快速29分子生物学Alland和Saitoh-Inagawa在浙江萧山医院目前检测方法腺病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）阳性率3.7%（12/322）平均年龄：8月龄，最大15月龄，最小4月龄。北京万泰PCR-荧光探针（EV71、肠道病毒通用引物、柯萨奇病毒）阳性率12.5%（1/8）湖南圣湘30浙江萧山医院目前检测方法腺病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）阳性五、防治原则31五、防治原则31腺病毒感染主要在冬春季流行，通过呼吸道和接触传播，其预防措施和预防其他呼吸道传染病相似，主要是勤洗手，勤消毒，避免接触患者及其呼吸道飞沫；平常多饮水，多吃蔬菜和水果，注意锻炼身体；室内多通风，保持清洁；冬春流行季节尽量少去人员密集的公共场所，外出时戴口罩，以防感染。防治原则

预防32腺病毒感染主要在冬春季流行，通过呼吸道和接触传播，其预防措施正在使用和试用的疫苗有甲醛灭活疫苗和减毒活疫苗。但因腺病毒对新生地鼠有致癌作用，人们对于疫苗的作用难免有疑虑。最近有人研制腺病毒衣壳亚单位疫苗，可解决疫苗的安全性问题。目前尚无特效治疗方法防治原则

疫苗33正在使用和试用的疫苗有甲醛灭活疫苗和减毒活疫苗。但因腺病毒肠炎病情不重，一般不治自愈。主要是对症治疗及必要的支持疗法。有轻度失水可口服补液，中或重度失水宜静脉补液。

防治原则

对症处理34腺病毒肠炎病情不重，一般不治自愈。主要是对症治疗及必要的支持临床意义根据实验室检查及时明确病原微生物，做到病因学诊断；对于肠道病毒性腹泻应及时停用抗菌药物，调整治疗方案，使用肠黏膜保护剂及微生态制剂，避免滥用抗菌药物引起的菌群失调。坚持以切断传播途径为主导的综合性预防措施，加强对水源和食物的监控与管理，可使感染性腹泻的发病率降低35临床意义根据实验室检查及时明确病原微生物，做到病因学诊断；对思考题肠道腺病毒采取了哪些措施来对付宿主防御系统的攻击？36思考题肠道腺病毒采取了哪些措施来对付宿主防御系统的攻击？36一、定义及血清型37一、定义及血清型1

肠道感染病毒主要包括肠道病毒和急性胃肠炎病毒

肠道病毒

(小RNA病毒科)

轮状病毒肠道腺病毒呼肠病毒科杯状病毒星状病毒38肠道感染病毒2腺病毒起源20世纪50年代初期，一位科学家对手术切除的人扁桃体增殖腺小块进行细胞培养时意外发现在培养的腺样组织内潜伏着一种未知的病毒，这种病毒可引起培养的单层细胞发生病变。由于这种病毒被首先发现于腺样组织中，1956年国际病毒命名委员会将这类病毒命名为腺病毒，1962年正式命名为腺病毒科39腺病毒起源20世纪50年代初期，一位科学家对手术切除的人扁桃腺病毒血清型目前，已经发现有100多种类型的腺病毒可以感染人、哺乳动物和禽类，其中能感染人类的腺病毒（人腺病毒）就有50多型，把人腺病毒的41个血清型分为A-F6个组：A-E组：各型病毒均能在人的组织细胞(如肾细胞)常规培养中增殖，称为普通腺病毒；F组（40和41型）：是从粪便中发现，用常规细胞培养不能增殖的腺病毒，仅在选择性细胞上生长，称为肠道腺病毒。

40腺病毒血清型目前，已经发现有100多种类型的腺病毒可以感染人流行性腺病毒胃肠炎广泛分布于世界各地，在小儿，发病情况仅次于轮状病毒性肠炎。最小发病年龄为1月，绝大多数发生于3岁以下的婴幼儿。Ad-40主要感染1岁左右婴儿，Ad-41则感染稍大的幼儿，全年均可发病，但腺病毒性胃肠炎一般呈散发性。41流行性5肠道腺病毒通过消化道传播，主要原因是因为树突状细胞缺乏腺病毒受体，不能感染附近淋巴结。流行性42肠道腺病毒通过消化道传播，主要原因是因为树突状细胞缺乏腺病毒腺病毒胃肠炎的潜伏期约10天，主要表现为腹泻，量少或多，呈水样便或稀便，少数可排出粘液，病程4-8天，常伴呕吐。部分患者有呼吸道症状，少数患者发热，病程多自限，排毒时间约1周。某些患者失水较严重，个别重度失水者可死亡。流行性43腺病毒胃肠炎的潜伏期约10天，主要表现为腹泻，量少或多，呈水各型腺病毒所致腹泻持续时间不等，以肠腺病毒胃肠炎腹泻时间最长，大多患者有呕吐，持续1-2天，少数有发热。非肠型腺病毒腹泻患者发热较多。约20％腺病毒肠炎患者有呼吸道症状。流行性44各型腺病毒所致腹泻持续时间不等，以肠腺病毒胃肠炎腹泻时间最长二、生物学性状45二、生物学性状9双链DNA病毒，二十面体立体对称，无包膜。引起婴儿病毒性腹泻。

腺病毒电镜图腺病毒模式图46双链DNA病毒，二十面体立体对称，无包膜。引起婴儿病毒性腹培养特性：人类腺病毒无敏感动物，也不能在鸡胚中生长。但能在来源于人的多种细胞培养中增殖，引起明显CPE：细胞肿胀变圆、集聚成葡萄串状，并可在感染的细胞核内形成嗜碱性包涵体。

生物学性状47培养特性：生物学性状11抵抗力

腺病毒外膜无类脂质包膜，故能耐乙醚和氯仿等脂溶剂；并能耐受蛋白酶及胆汁的作用。但不耐热在室温中可存活10d以上，56℃30min灭活。生物学性状48抵抗力

生物学性状12腺病毒的复制----严格按照日程表复制的病毒突出小结和六邻体都必须插入细胞表面的受体分子，病毒才能被细胞摄入，被内体包裹。在内体的酸性环境中降解，进入细胞质，将DNA释放到细胞核内。腺病毒利用自身的DNA聚合酶进行复制，先对一条亲代链进行互补复制，取代第二条亲代链，然后DNA聚合酶再对第二条亲代链进行复制，因此，病毒DNA的两条链都是连续的。49腺病毒的复制----严格按照日程表复制的病毒突出小结和六邻体三、致病性与免疫性50三、致病性与免疫性14对宿主防御的逃逸因为腺病毒复制缓慢，感染细胞容易受到宿主防御系统的攻击，因此腺病毒有1/4的基因组用来对付宿主的防御系统。通过释放两种E1B蛋白来抑制细胞的凋亡，使受感染的细胞能支持到病毒完成复制。致病性和免疫性51对宿主防御的逃逸因为腺病毒复制缓慢，感染细胞容易受到宿主防御感染后期病毒复制组装完成时，腺病毒产生病毒死亡蛋白给细胞致命一击彻底释放病毒。腺病毒制造VARNA来免遭干扰素的破坏，通过结合PKR，使之失活，使病毒蛋白质合成。52感染后期病毒复制组装完成时，腺病毒产生病毒死亡蛋白给细胞致命阻止MHC-I类分子在病毒感染细胞上表达以阻止CTL的攻击。腺病毒合成RID蛋白结合病毒感染细胞的死亡受体以逃避天然杀伤细胞的攻击。病毒利用自身的聚合酶进行基因组复制，增加了抗原漂移的机会。53阻止MHC-I类分子在病毒感染细胞上表达以阻止CTL的攻击。腺病毒对呼吸道、胃肠道、尿道和膀胱、眼、肝脏等均可感染，人腺病毒约1/3的已知血清型通常与人类疾病相关，但一种血清型可引起不同的临床疾患；相反，不同血清型也可引起同一种疾患。54腺病毒对呼吸道、胃肠道、尿道和膀胱、眼、肝脏等均可感染，人腺呼吸道感染呼吸道感染的典型症状是咳嗽、鼻塞和咽炎，同时伴有发热、寒战、头痛和肌肉痛等，包括以下4种不同的综合征：1．急性发热性咽喉炎由C组病毒引起，出现咳嗽，鼻塞、发热和咽喉部溃疡等症状，这些表现难以与其他病毒引起的轻型呼吸道感染鉴别2．咽结膜热多由B组腺病毒3和7型所致，愈后尚好，一般无后遗症。3．急性呼吸道疾病多由腺病毒4、7型引起，也可见于3型4、肺炎腺病毒肺炎约占儿童期肺炎的10%，多由腺病毒3、7型引起；在青年人腺病毒肺炎的病死率为8%～10%55呼吸道感染呼吸道感染的典型症状是咳嗽、鼻塞和咽炎，同时伴有发眼部感染

腺病毒致轻型眼部感染是呼吸道感染和咽喉炎的并发症。滤泡性结膜炎可由许多型腺病毒引起，类似于衣原体性结膜炎，而且为自限性。由腺病毒8、19和37型引起的角结膜炎为重型感染，具高传染性，以急性结膜炎开始，扩至耳前淋巴结，随后发生角膜炎。胃肠炎许多腺病毒在肠道细胞中复制，随粪便排出，但大多血清型与胃肠道疾病无关。而40型和41型腺病毒可引起婴幼儿与年少（4岁以下）儿童的胃肠炎，致腹痛、腹泻。C组腺病毒能引起某些婴幼儿肠套叠。

56眼部感染20其它疾病腺病毒11、12型能引起儿童急性出血性膀胱炎，尿中出现病毒。37型可引起女性宫颈炎和男性尿道炎，常由性传播感染。在免疫功能低下者可引起偶发或严重的病毒感染，尤其在器官移植病人中发生严重呼吸道感染和病毒性肝炎，多由1、5和7型腺病毒引起。艾滋病患者可感染多种血清型腺病毒，并能出现抗原性介于中间的杂合型毒株，而且常为致死性腺病毒感染。主要原因是腺病毒的E1A蛋白可反式激活HIV的转录，加速HIV的复制。临床发现37%的艾滋病患者病毒性腹泻是由腺病毒所致。

57其它疾病21免疫性腺病毒感染后，产生特异性抗体，对同型病毒的感染有保护作用，免疫力持久。

致病性和免疫性58免疫性致病性和免疫性22

四、肠道腺病毒诊断59

四、肠道腺病毒诊断23传统方法病原分离培养后,应用亚属特异的免疫荧光测定法、放射免疫测定、ELISA、DNA杂交等进行腺病毒亚属的鉴定。再应用型特异性血清进行中和试验。缺点：不仅费时费力,结果也不够理想60传统方法病原分离培养后,应用亚属特异的免疫荧光测定法、放射

病毒分离：标本（患者咽喉、眼分泌物、粪便等）敏感细胞CPE分离株为抗原，用抗病毒诊断血清作CF试验，确定是否为腺病毒；用已知腺病毒型特异性免疫血清做NT试验可定型。亦可用直接或间接免疫荧光方法，检测临床诊断疑为腺病毒肺炎的婴幼儿鼻咽部脱落细胞中的腺病毒抗原。微生物学检查法61病毒分离：微生物学检查法25血清学诊断

采取患者早期和恢复期双份血清做CF试验、HI试验及NT试验。恢复期血清抗体滴度比早期增长4倍以上有诊断意义。其中CF试验最为常用。微生物学检查法62血清学诊断

采取患者早期和恢复期双份血清做CF试验、HI试ELISA方法

检测ADV抗原、抗体操作简单、快速、特异性强，有助于临床对疾病的早期明确诊断，结果判定用简单的分光光度计，客观准确，3～4h即可出结果，可大批检测，阳性率远优于病毒分离，亦优于血清学技术，适用于流行病学调查。IgM产生早于IgG，有利于早期诊断，IgG产生稍晚，虽不能早期诊断，但相当一部分在7一14天内检测单份血IgG阳性再结合临床也可诊断。63ELISA方法检测ADV抗原、抗体操作简单、快速、特异胸部X线及CT影像表现

肺内表现以多肺叶受累的肺实变为主要特征，其中团簇状影尤为突出，此类团簇状影有较明显的特征性，常密度较高、边缘模糊、强化均匀。肺外表现以胸膜增厚和少量胸腔积液为主，少数患者出现纵隔气肿或气胸。小气道改变多见。64胸部X线及CT影像表现肺内表现以多肺叶受累的肺实变为主要分子生物学Alland和Saitoh-Inagawa在六邻体基因的β-管状物形成P1区设计