土壤微生物量碳测定方法

土壤微生物量碳测定方法(总3页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-CompanyOne1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除PAGEPAGE6土壤微生物量碳测定方法及应用土壤微生物量碳（Soilmicrobialbiomass）作用，同时是一个重要活性养分库，直接调控着土壤养分（如氮、磷和硫等）40（Fumigation-incubation,FI）和熏蒸提取法（Fumigation-extraction,FE）。熏蒸提取法法）由于熏蒸培养法测定土壤微生物量碳不仅需要较长的时间而且不适合于强酸性土壤、加入新鲜有机底物的土壤以及水田土壤。Voroney(1983)发现熏蒸土壤用·L-1KSO2 4的碳量与生物微生物量有很好的相关性。Vance等(1987)建立了熏蒸提取法测定土壤微生物碳的基本方法：该方法用·L-1KSO（1：4）直接提取熏蒸和不熏蒸土壤，提2 4取液中有机碳含量用重铬酸钾氧化法测定；以熏蒸与不熏蒸土壤提取的有机碳增加量除以转换系数K(取值来计算土壤微生物碳。ECWu等（1990）通过采用熏蒸培养法和熏蒸提取法比较研究，建立了熏蒸提取——碳自动一起法测定土壤微生物碳。该方法大幅度提高提取液中有机碳的测定速度和测定结果的准确度。林启美等（1999）对熏蒸提取-重铬酸钾氧化法中提取液的水土比以及氧化剂进行了改进，以提高该方法的测定结果的重复性和准确性。对于熏蒸提取法测定土壤微生物生物碳的转换系数K的取值，有很多研究进行了大量ECK值的实验方法有：直接法（14C）EC和间接法（与熏蒸培养法、显微镜观测法、ATP法及底物诱导呼吸法比较）。提取液中有机碳的测定方法不同（如氧化法和仪器法），那么转换系数K取值也不同，如采用氧化法和ECK值分别为（Vance，1987）和（Wu，1990）。不同类型土壤（表层）K值EC EC有较大不同，其值变化为（Sparling等，1988，1990；Bremer等，1990）。Dictor等（1998）研究表明同一土壤剖面中不同浓度土层土壤的转换系数KEC

有较大的差异，从表层0-20cm土壤的K为，逐步降低到180-220cm土壤的K为。EC EC一、基本原理熏蒸提取法测定微生物碳的基本原理是：氯仿熏蒸土壤时由于微生物的细胞膜被氯仿破KSO2 4取成分（Joergensen,1996）。采用重铬酸钾氧化法或碳-自动分析仪器法测定提取液中的碳含量，以熏蒸与不熏蒸土壤中提取碳增量除以转换系数K来估计土壤微生物碳。EC二、试剂配制硫酸钾提取剂（·L-1）：10L20L（60-100rev·min-1）12可完全溶解。mol·L-1（1/6KCrO）130℃2-3KCrO（分析纯）1L2 27 2 271L。KCrO2 27mol·L-1（1/6KCrO）130℃2-32 271L。邻啡罗啉指示剂：取邻啡罗啉指溶于含有分析纯硫酸亚铁（FeSO·7HO）100ml4 2馏水中，此溶液易变质，应密闭保存于棕色瓶中。硫酸亚铁标准溶液（mol·L-1）：称取分析纯硫酸亚铁（FeSO·7HO），800ml4 25ml（防止水解），1L，保存于棕色瓶中。此溶液易被空气氧化，每次使用时必须标定其准确浓度：硫酸亚铁溶液标定方法：吸取mol·L-1（1/6KCrO）标准溶液（浓度为mol·L-1，2 271/6KCrO），150ml5ml22 27溶液滴定，滴至溶液由蓝绿色变为棕红色即为终点。根据滴到终点消耗的硫酸亚铁溶液量计C=(C*V)/V2 1 1 2式中：C1——重铬酸钾标准溶液浓度（mol·L-1）C2——硫酸亚铁标准溶液浓度（mol·L-1）V1——吸取的重铬酸钾标准溶液体积（5ml）V2——滴到终点时消耗硫酸亚铁溶液体积（ml）1：2（V:V）加入分液漏斗13钙出去氯仿中的水分，于试剂瓶中在低温（4℃）黑暗状态可保存几周（Williamss三、仪器设备：Phoenix8000，50ml（300rev·min-1），50ml50ml，125ml，150ml（24*295mm），250ml瓶，50ml（2mm），22cmpH-滴定仪。四、操作方法：土样前处理：新鲜土壤应立即处理或保存于4℃冰箱中，测定前仔细除去土样中可见植物残体（如根、茎和叶）及土壤动物（蚯蚓等），过筛（孔径2mm），彻底混匀。处理过程应尽量避免破坏土壤结构，土壤含水量过高应在室内适当风干，以手感湿润疏松但不结块为宜（约为饱和持水量的40%）。土壤湿度不够可以用蒸馏水调节至饱和持水量的40%。次样品即可用于土壤实时测定。开展其他研究（如培养试验）可将土壤置于密闭的大塑料桶内培养7-15天，桶内应有适量水以保持湿度，内放一小杯1mol·L-1NaOH溶液吸收土壤呼吸产生的CO25℃.4℃的冷藏2箱中，下次使用前需要在上述条件下至少培养24小时。这些过程为消除土壤水分限制对微生物的影响，及植物残体组织对测定的干扰。土壤饱和持水量测定可按Shaw（1958）的方法：在圆形漏斗茎上装一带夹子的橡皮管50g50ml3030土壤熏蒸称取经前处理的新鲜土壤（40%）3（烘干基重）烧杯中，用去乙醇氯仿熏蒸，方法是将其置于底部有少量水（200ml）和去乙醇氯仿（40ml）的真空干燥器中，氯仿加入烧杯中，并在其中放入经浓硫酸处理的碎瓷片（大小，防爆）3-525℃24复抽真空（）63（定有较大的影响）。3125ml（为不熏蒸对照）244℃条件下保存。土壤提取125ml50ml加入·L-1KSO1：4，32 42：；1·L-1KSO2 4振荡（300rev·min-1）提取30分钟，再用定量中速滤纸过滤于50ml塑料瓶中，贮藏于-18℃冷冻柜中，待测。经贮藏的土壤提取液解冻后会有一些白色沉淀，据推测为CaSO和4KSO（Brookes42 41985）。提取液中有机碳含量测定和土壤微生物碳计算：方法Ⅰ：重铬酸钾氧化法（1999；Vance1987）吸取10ml上述土壤提取液于经过仔细检查的150ml消化管（24*295mm）中，加入mol·L-1KCrOHSO（3mm），混2 27 2 4175±1℃10150ml80ml，1mol·L-1硫棕红色，即到达终点。结果计算：提取的土壤有机碳（mgCkg-1土）=[4*106*M*(V-V)*f]/W0式中：M——为FeSO溶液浓度（mol·L-1）；4V0、V——分别为滴定空白和样品消耗的FeSO溶液体积（ml）；4f——为稀释倍数；W——为烘干土重（g）；——为碳毫摩尔质量（g）；106——为换算系数。土壤微生物碳：Bc=Ec/Kc式中：Bc代表土壤微生物碳（mgCkg-1）；EcmgCkg-1；Kc（Vance，1987）。方法Ⅱ：碳-自动分析仪器法（Wu等，1990）10ml40ml10ml，5%六偏磷酸钠溶液（），使提取液中的沉淀（CaSOKSO）2mm（5-4 42 410），COPhoenix80002取液中的有机碳在硫酸钾溶液作用下于紫外氧化室中氧化为CO，该仪器可自动测定有机碳2氧化放出的CO量，通过工作曲线即可计算出提取液中的碳含量。工作曲线制备：分别吸取20、、1、2、3、4ml1000mgCL-150ml去离子水定容，即为0、10、20、