2022卵巢上皮性癌组织中lnc-MyD88的表达及其与患者预后的关系

2022卵巢上皮性癌组织中Inc-MyD88的表达及其与患者预后的关系(全文)摘要目的探讨长链非编码RNA-髓样细胞分化因子88(Inc-MyD88)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达及其与患者预后的关系。方法选择2016年1月至2019年1月在四川省肿瘤医院接受初次肿瘤细胞减灭术且术后辅以伯类药物+紫杉醇方案化疗6~8个疗程的卵巢癌患者共70例，收集其新鲜癌组织标本;另收集同期28例因妇科良性疾病行手术治疗患者的新鲜正常卵巢组织标本作为对照。采用逆转录(RD-实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测卵巢癌和正常卵巢组织中Inc-MyD88、髓样细胞分化因子88(MyD88)mRNA 的表达，并采用Pearson相关法分析卵巢癌组织中Inc-MyD88与MyD88mRNA表达的相关性;分析Inc-MyD88表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法计算卵巢癌患者的生存率，单因素生存分析采用log-rank检验，多因素生存分析采用Cox比例风险模型。结果⑴RT-qPCR技术检测显示，卵巢癌组织中Inc-MyD88>MyD88mRNA的中位表达水平分别为0.009(0.000~0.049)、0.001(0.000~0.006),均显著高于正常卵巢组织［分别为0.000(0.000~0.000)0.000(0.000~0.001);P均＜0.01]Pearson相关法分析显示，卵巢癌组织中Inc-MyD88与MyD88mRNA的表达水平呈显著正相关(r2=0.6W,P＜0.01)。⑵有淋巴结转移、远处转移、化疗耐药的卵巢癌患者的Inc-MyD88高表达率(分别为71%、64%、70%)显著高于无淋巴结转移、远处转移、化疗耐药者(分别为41%、40%、35%;P均＜0.05);而不同年龄、病理类型、病理分级、手术病理分期、术后残留灶大小以及腹水有无癌细胞的卵巢癌患者的Inc-MyD88高表达率分别比较，差异则均无统计学意义(P均＞0.05)⑶单因素分析显示,手术病理分期、淋巴结转移、远处转移、术后残留灶大小以及Inc-MyD88和MyD88mRNA高表达均为显著影响卵巢癌患者无进展生存时间PFS)和总生存时间(0S)的危险因素(P均＜0.05),腹水有癌细胞为显著影响卵巢癌患者PFS的危险因素(%0.040);多因素分析显示，手术病理分期以及Inc-MyD88和MyD88mRNA高表达均为影响卵巢癌患者PFS和OS的独立因素(P均＜0.05),术后残留灶大小为影响卵巢癌患者PFS的独立因素(P=0.001)o结论卵巢癌组织中Inc-MyD88的表达水平显著增高，且Inc-MyD88与MyD88mRNA表达呈正相关关系,皿0-1^。88可能参与乂丫口88基因表达的调控，从而影响卵麟患者的预后，有望作为预测卵巢癌不良预后的分子标志物。、Inc-MyD88对卵巢癌MyD88基因表达的潜在调控作用近年来，对卵巢癌紫杉醇耐药及其机制的研究不断深入，但无论是何种机制，均与卵巢癌治疗中的紫杉醇相关靶标分子和信号通路有关口］。卵巢癌细胞通过激活TLR4/MyD88信号通路介导肿瘤细胞逃避凋亡刺激并促进细胞增殖，并增强肿瘤细胞的侵袭、转移能力。基于本课题组的前期临床和基础研究，作为该信号通路重要的驱动因子，MyD88高表达促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭，抑制细胞凋亡，并与患者预后、免疫逃逸以及紫杉醇耐药密切相关［8-9］o但是，卵巢癌中MyD88的转录表达调控机制尚不清楚，有待深入研究。生物信息学研究发现，在同一染色体基因座中距蛋白质编码基因的侧翼10kb之内，存在具有顺式调控该编码基因潜在能力的IncRNA［7］。根据DNA元件百科全书(EncyclopediaofDNAElements,ENCODE)数据库分析，Inc-MyD88位于MyD88蛋白编码基因的上游，按照5:3,方向转录［7］。Inc-MyD88可能通过与MyD88基因启动子上游的顺式元件——碱基CAAT盒子结合，调控MyD88基因的表达；另外，Inc-MyD88还可能与MyD88基因启动子和5'非翻译区的转录因子结合，调控MyD88基因表达。本研究结果显示，MyD88mRNA高表达的卵巢癌患者中69%Inc-MyD88呈高表达，而正常卵巢组织几乎不表达Inc-MyD88和MyD88mRNA,且卵巢癌组织中Inc-MyD88与MyD88mRNA的表达水平呈正相关，进一步提示Inc-MyD88参与了MyD88基因表达的调控。在IncRNA参与调控癌基因或抑癌基因表达的各种复杂机制中，包括乙酰化、甲基化和泛素化在内的组蛋白修饰可能是IncRNA与其相邻蛋白质编码基因之间相互作用的重要调控机制［10-11］o在肝癌细胞中同样证实，lnc~MyD88与MyD88mRNA的表达水平呈明显正相关，且Inc-MyD88通过增加启动子区域组蛋白H3第27位赖氨酸乙酰化(histoneH3lysine27acetylation,H3K27Ac)富集修饰组蛋白调控MyD88的表达［7］。因此，Inc-MyD88对MyD88基因表达存在潜在调控作用，可能是卵巢癌组织中MyD88异常高表达的一个潜在因素。二、Inc-MyD88与卵巢癌不同临床病理特征的关系IncRNA被认为是一种重要的基因表达调控分子，参与多种实体肿瘤包括卵巢癌在内的演变过程［12-13］o本研究分析了Inc-MyD88在卵巢癌组织中的表达及其与患者不同临床病理特征的关系，结果发现，与无淋巴结转移或远处转移的卵巢癌患者相比，有淋巴结转移或远处转移的卵巢癌患者Inc-MyD88表达水平明显增高，提示，Inc-MyD88与卵巢癌的侵袭、转移密切相关。研究表明，过度表达或敲低Inc-MyD88表达可显著影响肝癌细胞的增殖和凋亡能力。体外侵袭实验证明，过度表达Inc-MyD88明显增强肝癌细胞的侵袭能力;相反，敲低Inc-MyD88表达后肝癌细胞的侵袭能力明显下降［7］。动物实验也同样证明，Inc-MyD88过度表达明显促进肿瘤生长及远处转移［7］。进一步研究发现，Inc-Myd88通过表观遗传调控MyD88的表达，继而激活核因子KB(nuclearfactor-KB,NF-KB)和磷酸酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(serine/threonrinekinase,Akt)信号通路，促进肿瘤细胞的侵袭、转移过程［5］。另一方面，本研究结果还提示，Inc-MyD88的表达与卵巢癌患者化疗耐药有关，分析其原因可能与Inc-MyD88通过调控MyD88mRNA的表达从而激活化疗耐药相关信号通路有关。综上，本课题组将进一步从分子'细胞、组织以及动物水平探索Inc-MyD88调控MyD88表达介导卵巢癌转移'增殖、化疗耐药的分子机制。三、Inc-MyD88与卵巢癌患者预后的关系卵巢癌细胞紫杉醇耐药需要完整TLR4/MyD88信号通路的参与，阻断TLR4/MyD88信号通路的任何一个环节即可能消除其介导的紫杉醇耐药，从而改善卵巢癌患者的预后［8-9,14 本课题组的前期研究，将中药提取物6-姜烯酚装载到靶向MyD88阳性卵巢癌细胞的相变型纳米粒递药系统，在超声控释下成功实现对靶肿瘤细胞定向释药，显著增强紫杉醇对MyD88阳性卵巢癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用，并延长裸鼠的生存时间［15］o本研究结果表明，lnc-MyD88高表达的卵巢癌患者的PFS和OS均较短，而Inc-MyD88低表达的卵巢癌患者呈现出较好的预后;Inc-MyD88高表达是影响卵巢癌患者PFS和OS的独立因素。目前，已进入根据卵巢癌特征性分子如MyD88表达进行分型并开展深入研究'监测和管理的新时代，应充分重视卵巢癌分子分型、选择靶向治疗方案、优化并规避化疗耐药。lnc-MyD88可能是影响MyD88表达的重要调控因子，其在卵巢癌组织中的表达与患者预后的关系密切，因此，有望成为新的肿瘤标志物和治疗靶点。综上所述，Inc-MyD88与邻近的卵巢癌紫杉耐药基因MyD88的表达呈正相关。Inc-MyD88高表达与卵巢癌侵袭、转移和患者预后差密切相关,将其纳入卵巢癌紫杉醇耐药、