毒理学-第七章

第七章外源化学物的致突变作用

李蕾

2011年3月目的要求掌握外源化合物的致突变作用熟悉致突变作用的评价方法了解致突变作用的遗传学基础

第一节概述

突变作用的研究史HermannJosephMuller

(1890～1967)1946年获诺贝尔生理学医学奖。美国遗传学家。1911～1916年，Muller是摩尔根果蝇小组的一个重要成员，他的主要工作是研究果蝇的遗传交换。这是染色体遗传学说的重要基础，其内容已概括在果蝇小组成员合写的《孟德尔式遗传的机制》(1923)一书中。1927年，他发现了X射线的诱变作用。这项研究结果不但有助于研究基因的本质和基因如何控制代谢及个体发育，有利于通过突变基因进行染色体结构分析，而且在诱变育种、发展农业生产方面也有重要意义。20世纪50年代，Watson

和Crick阐明了DNA的结构，为研究突变机理开辟了一条新的途径。根据Franklin的新X光照片,Watson和Crick提出了双螺旋结构的设想，1962年获诺贝尔生理学医学奖。•1969年，Hollaender主持下在美国成立了环境诱变剂协会(Environmentalmutagensociety,EMS)。•

遗传毒理学形成为独立学科。•

国际癌症研究中心(IARC)证明人类癌症约有90%与化学物(包括药物)有关，并明确指出致癌剂中90%也是致突变剂。•

Ames方法的建立和应用，在环境致突变物和致癌物的筛选方面取得了很大进展。中国遗传毒理学的发展70年代末至1983年：启动阶段，建立了一系列遗传毒性检测方法，培训了大量专业人员，成立了中国环境诱变剂学会。1983年至1993年：深入发展的关键阶段，遗传毒性检测方法标准化、规范化，开展了遗传毒性的机制研究，遗传毒性试验列入了药品、食品等安全评价准则中，成立了中国毒理学会遗传毒理专业委员会。1993年至今：进入分子时代。建立了分子致突变测试系统，转基因动物致突变测试系统等。为什么他们非常相象？一、基本概念1、遗传：保持物种特性的根本；稳定性是相对的。2、变异(Variation)：亲子之间或子代个体之间的差异；物种推陈出新的来源。3、突变(Mutation)：遗传物质的一种可遗传变异；自发突变诱发突变4、遗传毒理学

(Genetictoxicology)

研究化学性和放射性物质的致突变作用以及人体接触致突变物可能引起的健康效应。主要研究致突变的作用机制，应用检测系统发现和探究致突变物，提出评价致突变物健康危害的方法。5、致突变作用

(Mutagenesis)概念：外来因素，特别是化学物引起细胞核中的遗传物质发生改变的能力，而且此种改变可随细胞分裂过程而传递。结果：基因突变一个或几个DNA碱基对的改变。染色体畸变染色体结构和数目改变。6、遗传毒性(Genetictoxicity)：对基因组的损害能力，包括对基因组的毒作用引起的致突变性及其他各种不同效应。7、致突变性(Mutagenicity)：引起遗传物质发生突变的能力，突变率可定量检测。

区别与联系：遗传毒性的概念更为广泛，包括致突变性；其效应可以固定为突变，也可能被修复；致突变性指的是引起突变的能力。1．DNA与基因（1）基因(Gene)：是DNA分子中最小的完整功能单位。

分子角度：是指编码蛋白质或RNA分子遗传信息的基本遗传单位。编码蛋白基因包括结构基因和调控基因。化学角度：一段具有特定功能和结构的连续脱氧核糖核苷酸序列，是构成染色体的重要组成部分，是染色体上的遗传功能单位。（2）基因组(Genosome)：细胞或生物体携带遗传信息的遗传物质总和。

二、遗传学基础2．染色质与染色体染色质(chromatin):在间期细胞的细胞核中，通过光镜可见一种能被碱性染料着色的物质，即染色质。它由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量的RNA组成，形似串珠状的复合体。染色体(chromosome):在间期细胞核中，一般没有染色体结构，只有在细胞分裂时，染色质才螺旋化并折叠成染色体。

3．体细胞和生殖细胞

体细胞：多是二倍体细胞，含有两组完全相同的染色体，其遗传损伤不会遗传给下一代。生殖细胞：是单倍体，其染色体改变及突变可传给下一代。4．基因型与表型基因型是性状发育的内因，是表型形成的根据。表型指在发育过程中基因所控制的生物性状的具体表现。

5．细胞周期、有丝分裂与减数分裂

亲子鉴定方法：1、血型测试

2、染色体多态性鉴定

3、DNA亲子鉴定

原理：在没有基因突变，分型错误的前提下,孩子的一对等位基因必定是一个来自父亲，一个来自母亲；孩子不可能带有双亲均没有的等位基因。目前运用短串联重复序列（shorttandemrepeatSTR)作为遗传标记系统。

DNA亲子鉴定组织：血液、毛发、唾液、口腔细胞及骨头等

应用：非婚生子女的抚养纠纷财产继承纠纷医院产房调错新生儿导致的亲生子认定被拐骗和失散子女的认领等第二节化学毒物致突变的类型遗传学损伤：基因突变染色体畸变染色体数目改变区别：受损程度基因突变：光学显微镜观察不到，须通过生长发育、生化、形态等表型改变来判断。染色体畸变：可用光学显微镜观察。一、基因突变概念：基因中DNA序列的变化。因突变限制在一特定部位，又称点突变。

分型：

1、碱基置换：某一碱基对性能改变或脱落所致的突变。错误配对：当DNA链上某一碱基由于致突变物作用而脱落或其配对性能发生改变，在DNA复制过程中该DNA互补链上的相应位点配上一个错误的碱基。碱基置换：错误配对的碱基在下一次DNA复制时，仍按正常规律配对，于是原来的碱基对被错误碱基对所置换，称碱基置换。转换：嘌呤置换另一嘌呤，或者嘧啶置换另一嘧啶，称为转换。颠换：嘧啶换成嘌呤，或者嘌呤换成嘧啶，称为颠换。影响：密码子发生改变，从一种氨基酸变成另外一种氨基酸，突变可能产生无活性的基因产物，对其功能的影响取决于替代的特定氨基酸及其在蛋白质一级结构中所处的位置。2、移码突变概念：发生一对或几对（3对除外）的碱基减少或增加，以致从受损点开始碱基序列完全改变，形成错误的密码，并转译成为不正常的氨基酸。影响：突变点之后，信使RNA的每个三联体均已改变，基因产物有明显改变。较易成为致死性突变。若减少或增加的碱基对刚好为3对，称为密码子的缺失或插入，则基因产物的肽链中仅减少或增加一个氨基酸，其后果与碱基置换相似，但与移码突变不一样，故不包括在移码突变范畴。二、染色体畸变概念：染色体的结构改变，它是指遗传物质大的改变，一般可用光学显微镜检查适当细胞有丝分裂中期的染色体来发现。细胞学检测可发现染色体断裂及由断裂所致的各种重排。染色单体畸变：畸变涉及在染色复制体中两条染色单体中的一条。染色体型畸变：畸变涉及在两条染色单体。染色体结构异常染色体或染色单体断裂所致。当断端不发生重接或虽重接而不在原处，即可出现染色体结构异常。（1）缺失：染色体上丢失了一个片段。（2）重复：在一套染色体里，一个染色体片段出现不止一次。染色体缺失及环状染色体的形成图染色体插入和重复示意图（3）倒位：一个染色体片段被颠倒了。如颠倒的片段包括着丝点，称为臂间倒位。如不包括着丝点则称为臂内倒位。（4）易位：一个染色体片段的位置改变了。最常见的是相互易位，涉及两个非同染色体片段的交换。臂间倒位相互易位臂内倒位5号染色体短臂缺失症候群稳定畸变：可通过重复细胞分裂传给子代。如缺失、倒位、重复及平衡易位。不稳定畸变：无中心粒片段、双中心粒片段、环状染色体及各种其他不对称重排。三、非整倍体和多倍体基因组突变：非整倍体和多倍体细胞的染色体数目不同于正常的细胞染色体数目，称为基因组突变，即基因组中染色体数目的改变。非整倍体：增加或减少一条或几条染色体。多倍体：以染色体组为单位的增加。唐氏综合症患儿第三节外源化学物致突变作用的机制及后果特异性：化学毒物作用细胞靶部位不同基因突变和染色体畸变靶分子为DNA非整倍体和多倍体靶部位常是有丝分裂和减数分裂的成分，如纺锤丝。一、引起突变的DNA变化（一）碱基损伤

1、碱基错配：烷化剂

错配：烷化的碱基根据烷化的位置不同可表现出同样配对特性或者是不同的配对特性鸟嘌呤N-7上的烷化有正常配对特性鸟嘌呤O-6上的的烷化很易与胸苷错配。DNA二级结构的改变AP位点：在N-7烷化鸟嘌呤上的烷基造成碱基与脱氧核糖连接的键不稳定，致使碱基丧失。丧失碱基的DNA留下了一个无嘌呤或无嘧啶的位点，通常称为AP位点。不正确的碱基插入AP位点，可引起突变，大部分是颠换。2、平面大分子嵌入DAN链：化学物插入DNA的碱基对，在DNA复制时，由于吖啶分子较为扁平，能够结合到DNA分子上，插入邻近的碱基对，使它们分开，此时DNA链出现歪斜，造成排列参差，往往导致不等交换的出现，产生两个重组子，一个碱基对增多，一个碱基对减少。即造成碱基对的缺失或者额外碱基对的插入。3、碱基类似物取代概念：碱基类似物在细胞周期的DNA合成期中，能与正常的碱基竞争，取代其位置。取代后碱基类似物常造成错误配对，即发生碱基置换。如：5-溴脱氧尿嘧啶取代胸腺嘧啶

2-氨基嘌呤取代鸟嘌呤4、碱基化学结构改变或破坏化学物质对碱基产生氧化作用，从而破坏或改变碱基的结构，有时还引起链断裂。它们主要改变核酸中核苷酸的化学组成，其作用与DNA复制无关。化学物还可在机体内形成过氧化物或自由基来破坏嘌呤碱，最终导致DNA链的断裂。如甲醛。羟胺使胞嘧啶C-6位的氨基变为羟氨基

（二）DNA链受损

1、二聚体的形成：当细胞或机体受到紫外线刺激，会使DNA发生化学变化，其主要产生环丁烷嘧啶二聚体和（4-6）光产物。这些较大的损伤可阻止DNA的复制，并引起细胞死亡。涉及已改变碱基的配对特异性，还涉及与复制和修复有关的细胞机制相互作用。2、DNA加合物形成活性化学物与细胞大分子之间通过共价键形成的稳定复合物，通常很难用一般的化学或生物学方法使其解离。

DNA加合物的形成可活化癌基因，影响调节基因和抑癌基因的表达。如：烷化的DNA加合物O6-甲基脱氧鸟苷，可引起碱基置换。3、DNA-蛋白质交联物

DNA与核蛋白交联，形成稳定的共价结合物，核蛋白是维持DAN构象的重要成分，并参与DNA复制与转录的调控，导致突变的发生。苯丙芘、砷化合物、醛类化合物二、引起突变的细胞分裂过程的改变完全阻止纺锤体的形成-多倍体部分阻止纺锤体的形成-非整倍体非整倍体与多倍体产生的机制：

1、与微管蛋白二聚体结合：秋水仙碱

2、与微管上的巯基结合：苯基汞-着丝粒微管甲基汞-极间微管

3、已经组装好的微管的破坏（1）与微管结合蛋白结合：长春碱，秋水仙碱（2）非特异性地作用于微管，使其蛋白质变性：毛地黄皂苷（3）使微管失去定向能力：异丙基-N-氨基甲酸苯酯

4、中心粒移动受阻：秋水仙碱

5、其他作用：N2O三、其他的改变

1、DNA复制的高保真性：多种酶类基因调控过程

2、修复：修复过程中的各种酶类四、突变的后果(一)生殖细胞突变•基因库（Genepool）某物种在特定时期中能将遗传信息传递给下一代的处于生育年龄的群体所含基因总和。•遗传负荷（Geneticload）是指在一种物种群体中每一个携带的可遗传给下一代的有害基因的平均水平。突变负荷：是指由于基因的致死突变或有害基因突变产生，降低了适合度，给群体带来的负荷。分离负荷：是指由于杂合子（Aa）和杂合子（Aa）之间的婚配，后代中必将分离而产生一部分适合度降低的纯合子（aa），因而导致群体的适合度降低。(二)体细胞突变•后果有肿瘤、衰老、动脉粥样硬化及畸形等，最受关注的是肿瘤。•突变在癌症发生过程中作用的重要证据来自于癌基因和抑癌基因的分子生物学研究。癌基因的形成

研究人员分析了乳腺癌肿瘤和结肠癌肿瘤中的18000个基因，包括5000个之前未在图谱上出现的基因，发现在乳腺癌和结肠癌肿瘤中存在大量遗传差异，从而能帮助研究人员根据个体肿瘤差异靶向遗传靶标.Science,2007,10.11遗传物质在所有物种中能世代相传的原因：(1)DNA执行高度保真的复制，对复制中的错误能及时纠正，即通过修复而达到高度保真；(2)机体已进化有多种机制修复DNA损伤以保护亲代DNA链，使其免受化学毒物的作用而发生改变。机体修复DNA损伤的机制分为两大类：损伤耐受机制和修复机制第四节机体对致突变作用的影响一、DNA损伤的修复1.直接修复存在于多数生物体内，主要依赖酶作用。(1)光复活（光裂合酶）(2)“适应性”反应鸟嘌呤O-6位被烷化，易造成碱基错配。将鸟嘌呤O-6位甲基转给O-6甲基鸟嘌呤-DNA甲基化转移酶，鸟嘌呤恢复正常。2.切除修复负责较大范围损伤的修复机制，它是一个多步骤的修复过程。是一种比较普遍的修复机制。其过程是：切→补→切→缝由专一性核酸内切酶催化，在离损伤处附近切断；由DNA聚合酶在断口处进行DNA合成；由5′核酸外切酶将损伤部位切掉；由连接酶将新合成的DNA链与原来的链连接。切除修复有核苷酸切除修复和碱基切除修复两种。3.错配修复(mismatchrepair)它可以识别并除去错配的碱基对。4.双链断裂修复是一种耐受过程。5.交联修复1）无误交联修复2）易误交联修复化学致突变作用的模式损伤-〉修复-〉突变二、遗传因素对致突变作用的影响个体因素影响致突变作用有两个方面，一是先天性，即遗传因素；二是后天性，不同生活方式。(一)代谢酶遗传多态性遗传多态性(geneticpolymorphism)是一个衡量遗传变异的数据，即群体中多态基因的比例。1.氧化代谢酶细胞色素P450酶2.酯酶环氧化物水解酶3.谷胱甘肽硫转移酶(GST)

(二)修复能力的个体差异修复酶的多态性1.O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）是体内一种特异性修复酶。

MGMT多态性可解释某些个体对烷化剂作用特别敏感的现象。2.聚（二磷酸腺苷-核糖）多聚酶（PARP）是另一类参与DNA断裂的修复酶。

PARP的激活为DNA损伤后细胞的早期反应之一。3月11日下午2点日本东北部发生9.0级地震3月12日福岛核电站发生爆炸避难所里工作人员正在查核辐射1979年美国三里岛核事故（5级）1986年苏联切尔诺贝利核事故（7级）外照射：危害主要是泄漏到环境中的放射线从人体外部对人体的照射，危害来源于体外放射源，放射源不与皮肤接触。内照射：危害是放射性物质污染的空气、水、食品及其它物品通过饮食、呼吸、皮肤毛孔、皮肤伤口进入人体内，释放出放射线对人体的照射。

一些微量放射性物质产生的外照射和表面污染虽然没有多大的现实意义，但是如果进人体内，将会连续照射人体，直到放射性物质衰变或被排出为止，因而可能产生可观的剂量。危害：人体受到辐射照射后主要通过对DNA分子的作用使细胞受到损伤，导致各种健康危害。直接作用间接作用

生物分子电离和激发生物分子电离和激发产生自由基生物分子损伤突变辐射的远期效应生化变化显微损伤细胞损伤可逆的生理变化辐射对细胞的损伤：辐射的生物学效应类别

躯体效应

遗传效应随机性效应癌、白血病各种遗传性疾病必然性效应白内障、皮肤良性损伤、骨髓中血细胞减少、生育力减退、血管或结缔组织的损伤等防护方法：1、增大与辐射源间的距离2、缩短辐射照射的时间，缩短工作周期3、屏蔽4、穿戴防护衣、戴口罩等5、药物：碘、普鲁士蓝等。

第五节观察外源化学物致突变作用的基本方法一、观察项目的选择•遗传学终点（geneticendpoint）：遗传学实验观察到的现象所反应的各种事件。•遗传学终点分类：共4类

1）基因突变；2）染色体畸变；

3）染色体组畸变；4）DNA损伤•遗传学实验配套原则：遗传学终点齐全；包括真核细胞和原核细胞；生殖细胞和体细胞俱在；体内实验和体外实验相结合，体外实验要有活化系统。二、常见致突变试验（一）细菌回复突变试验•Definition:TheAmesTestisnamedafteritsdeveloper,microbiologistBruceAmes.•Itisatestthatmeasuresachemicalsmutagenicstrengthinabacterialcell.1组氨酸缺陷•原理：组氨酸缺陷型试验菌株本身不能合成组氨酸，只能在补充组氨酸的培养基上生长，而在缺乏组氨酸的培养基上，则不能生长。•鉴定方法：将测试菌株增菌液分别于含组氨酸培养基平板和无组氨酸平板上划线，于37℃下培养24h后观察结果。•结果判断：组氨酸缺陷型菌株在含组氨酸平板上生长，而在无组氨酸平板上则不能生长。2脂多糖屏障缺损•原理：具有脂多糖突变（rfa）的菌株，表面有一层脂多糖屏障缺损，因此一些大分子物质如结晶紫能穿透菌膜进入菌体，抑制其生长，而野生型菌株则不受影响。•鉴定方法：吸取待测菌株增菌液0.1mL于营养琼脂平板上划线，然后将浸湿的0.1%结晶紫溶液滤纸条与划线处交叉放置。37℃下培养24h后观察结果。•结果判断：假若待测菌在滤纸条与划线交叉处出现一透明菌带，说明该待测菌株具有rfa突变.3氨苄青霉素抗性•原理：含R因子的试验菌株对氨苄青霉素有抗性。因为R因子不太稳定，容易丢失，故用氨苄青霉素确定该质粒存在与否。•鉴定方法：吸取待测菌株增菌液0.1mL，在氨苄青霉素平板上划线，37℃下培养24h后观察结果。•结果判断:假若测试菌在氨苄青霉素平板上生长，说明该测试菌具有抗氨苄青霉素作用，表示含R因子，否则，表示测试菌不含R因子或R因子丢失。4紫外线敏感性•原理：具有△uvrB突变的菌株对紫外线敏感，当受到紫外线照射后，不能生长，而具有野生型切除修复酶的菌株，则能照常生长。•鉴定方法：吸取待测菌株增菌液0.1mL于营养琼脂平板上划线，用黑纸盖住平板的一半，置紫外灯下照射（15W，距离33cm）8秒钟。置37℃孵育24h后观察结果。•结果判断：具有△uvrB突变的菌株对紫外线敏感，经辐射后细菌不生长，而具有完整的切除修复系统的菌株，则照常生长。5四环素抗性•原理：具有pAQI的菌株对四环素有抗性。•鉴定方法：吸取待测菌株增菌液0.1mL于氨苄青霉素/四环素平板上划线，置37℃下孵育24h后观察结果。•结果判断：假若测试菌照常在氨苄青霉素/四环素平板上生长，表明该测试菌株对氨苄青霉素和四环素两者有抗性，具有pAQI质粒，否则，说明测试菌株不含pAQI质粒。Ames试验常用配套菌株菌株检出突变切除修复R因子脂多糖突变TA1535置换△uvrB无rfaTA100置换＋移码△uvrBpKM101rfaTA1537移码△uvrB无rfaTA97移码△uvrBpKM101rfaTA98移码△uvrBpKM101rfaTA102置换＋移码存在pKM101rfapAQ1（二）微核试验（micronucleustest,MNT）与染色体损伤有关微核是在细胞的有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝粒断片或环，比主核小。形成原因（1）受到染色体断裂剂作用（2）受到纺缍体毒物的作用细胞微核图片传统微核试验在骨髓嗜多染红细胞(PCE)细胞中的微核小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成骨髓细胞制备和涂片间隔24h两次染毒或连续5d，1次/天，最后一次染毒后6h取材。受试动物拉颈处死，立即取股骨，剔净肌肉及其他软组织，用纱布拭净血污，剪去骨端暴露骨髓腔。1ml注射器吸取少量小牛血清→插入骨髓腔少许→冲洗骨髓腔→冲洗下来的骨髓直接滴在载玻片上→轻轻混匀推片→自然干燥。观察结果低倍镜下观察→选择分布均匀、疏密适度、形态完整、染色良好的区域→油镜下按顺序观察PCE和微核计数。注意：PCE为刚排核的细胞，Giemsa染色呈灰蓝色，成熟的红细胞染色呈淡橘红色。每一批样本，由于各种因素的影响，染色深浅不完全一致，因此在计数时要注意区别PCE与成熟红细胞。PCE中微核的嗜色性与细胞核完全一致，呈紫红色或蓝紫色。一个PCE中微核多数为1个，有时两个以上，此时仍按一个计。。结果与评价⒈计算微核率每只动物计数1000－2000个PCE，记录有微核的PCE，计算微核细胞率，以千分率表示。每只动物为一观察单位，每组的雌、雄动物分别计算微核PCE的均值。雌、雄动物之间无明显的性别差异时可合并计算结果，否则分别计算。正常的PCE/NCE比值约为1（正常范围0.6-1.2）。例如比值＜0.1，则表示PCE形成受到严重抑制，受试化学毒物的剂量过大，试验结果不可靠。结果以多种统计学方法（Poinsson分布、二项分布、X2检验等）进行统计学分析，评价受试物的致突变性。⒉阳性标准阴性、阳性对照组的微核发生率，应与试验所用动物种属及品系的文献报道结果或是研究的历史数据一致。至少在某一剂量显示出可重复的并与对照组比较具有统计学意义的阳性反应。具有剂量反应关系。⒊阴性结果的判断阴性结果的判断要特别慎重，因为剂量不够高、取材时间不恰当、细胞计数的量不足或自发微核率增高均能导致阴性结果。只有实验设计符合标准，用了尽可能高的剂量，并证明不是因细胞毒性而造成的阴性，才能认为是阴性结果。注意事项实验所用的载玻片、推片和注射器必须刷洗干净，载玻片事先酒精浸泡15min。避免小牛血清污染。小鼠取股骨最好统一取左腿或右腿股骨。取股骨的时候，用力得当，以免剪碎骨组织。冲洗骨髓腔时一小滴小牛血清即可，小牛血清量过多，会使涂片过薄，细胞数过少，阅片困难。同时注意避免血清从骨组织上端溢出骨髓腔。骨髓腔冲洗要细致、充分，以免细胞量过少。一次推片，用力均匀，不可反向反复推片，以免细胞重叠或破碎。推片每次使用后用酒精棉球擦拭。目前对微核试验已有较大的改进：1）体外微核试验2）外周血微核试验3）双核细胞法4）免疫荧光和荧光原位杂交法（三）染色体畸变分析(chromosomeaberrationanalysis)•主要观察染色体形态结构和数目异常。•直接观察•显带观察•流式细胞仪染色体畸变分析用于观察染色体畸变和染色体分离异常（四）SCE试验(sister-chromatidexchange)

指染色体同源座位上DNA复制产物的相互交换，其频率与DNA断裂和修复有关。用于检测DNA损伤。（五）果蝇伴性隐性致死试验（sex-linkedrecessivelethal,SLRL）（六）显性致死试验（dominantlethaltest）

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检测生殖细胞遗传性损伤。

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雄性染毒一个生精周期。致突变物可引起哺乳动物生殖细胞染色体畸变，以致不能与异性生殖细胞结合或导致受精卵在着床前死亡，或导致胚胎早期死亡。雄性动物生殖细胞遗传毒性检测方法

精子畸形主要表现在头部。按Wyrobeks的分类标准，主要类型有：无钩、香蕉形、无定形、胖头、尾折叠、双头及双尾。无尾精子、头部重叠的或整个与另一个重叠的精子均不计数。判断双头、双尾精子时，要注意与两条精子的部分重叠相区别正常精子香蕉形胖头畸形

双尾畸形

（七）程序外DNA合成试验（unscheduledDNAsynthesistest）•

正常情况下，DNA在细胞分裂的S期合成，当受到外来化学物干扰时，在S期以外也会出现DNA合成。•

用3H-胸苷掺入培养细胞或受试动物。•

放射自显影或液体闪烁计数法。程序外DNA合成试验1964Setlow发现UDS1970s诱变检测3H-TdR掺入（八）正向突变试验（九）单细胞凝胶电泳试验（Singlecellgelelectrophoresis，SCGE）也称彗星试验（Cometassay）1、