动物病毒学实验技术课件

动物病毒学试验技术杨润德动物病毒学试验技术1通过病毒学的学习,我们了解到病毒没有完整的酶系统,体内无核糖体等细胞器,因此不能在任何无生命的培养液中生长。所以要想增殖病毒必须在有生命的组织细胞内接种让其增殖,如:动物、鸡胚、细胞、器官。通过病毒学的学习,我们了解到病毒没2实验一、鸡胚接种发育中的鸡胚是病毒生长良好的环境,被广泛用于病毒(特别是禽病毒)的分离培养和疫苗生产等。病毒在鸡胚中的生长可以通过几种方法加以测定,如:采集尿囊液、羊水、绒尿膜、鸡胚作定量检定;采集以上样品作血凝滴定、血清学试验等;检査各部的病理学变化,如:鸡胚死亡、矮小、出血、羽毛发育不良、内脏坏死灶、绒尿膜水肿或增厚、坏死性痘斑、出血。实验一、鸡胚接种3除鸡胚外,根据病毒特点可以选用其他禽胚,如小鹅瘟病毒宜接种鹅胚,鸭瘟宜接种鸭胚等。影响病毒在鸡胚中生长的因素,包括鸡胚的日龄、接种途径、接种剂量、接种浓度培养时间、培养温度。培养温度一般为35.5-37℃,有些病毒所需的温度更低。但很多哺乳动物病毒不适合在鸡胚中生长。除鸡胚外,根据病毒特点可以选用其他4、受精卵的质量和孵化1选取SPF鸡群所产的蛋;2受精卵在10℃左右保存不超过10d3最好选择白色卵壳的受精卵;4.卵壳无污染,孵化前在0.1%的新洁尔灭中浸泡约15mn,最后用冷水冲洗,放卵架,或将卵放卵架用甲醛(1m2用13m甲醛、6.5gKMnO4熏蒸,而且在熏蒸时维持箱内温度为37℃20min后驱散甲醛蒸汽5孵化温度保持39-40℃,相对湿度60-65%,有风扇维持空气流通,每天翻蛋3-4次、受精卵的质量和孵化5接种途径根据不同病毒的嗜性,选择适宜的接种途径。最常用的途径有卵黄囊、尿囊腔尿囊膜3种途径,偶尔接种于羊膜腔、静脉、胚体等。在分离一种未知病毒时,最好3种途经均用,如果没有足够的受精卵,首选绒尿膜接种途径,因为大多数病毒都能适应。接种材料的处理:将组织置研钵磨碎加5-10倍盐水并加入双抗混均,20003000r/min离心20-30min。取上清待用。接种途径6()卵黄囊卵黄是胚胎的营养物质,卵黄囊膜是由内胚层发育而来的,内层覆有一层绒毛病毒可在绒毛细胞内生长,并且可以由此扩散到胚胎的其他部位()卵黄囊7动物病毒学实验技术课件8○尿囊腔接种尿囊是鸡胚的排泄器官。腔内充满排泄物尿囊液。液体的容量因卵的大小而异,一般6日龄鸡胚时约1m,11日龄时约6m,13日龄可高达10ml,以后逐渐减少直到消失。13日龄时的尿囊液是无色透明的,14日龄后逐渐变浑浊,呈乳白色,有时淡黄色。○尿囊腔接种9接种方法1.取9-10日龄鸡胚,照卵,画出气室,离气室边缘0.3-05cm用铅笔作一记号;2.在气室做记号处用碘酊消毒,打孔;3用注射器取毒液自接种孔斜刺入约1cm,注入毒液0.1-0.2ml;4.封孔继续孵化,定时照蛋。接种方法10动物病毒学实验技术课件11动物病毒学实验技术课件12动物病毒学实验技术课件13动物病毒学实验技术课件14动物病毒学实验技术课件15动物病毒学实验技术课件16动物病毒学实验技术课件17动物病毒学实验技术课件18动物病毒学实验技术课件19动物病毒学实验技术课件20动物病毒学实验技术课件21动物病毒学实验技术课件22动物病毒学实验技术课件23动物病毒学实验技术课件24动物病毒学实验技术课件25动物病毒学实验技术课件26动物病毒学实验技术课件27动物病毒学实验技术课件28动物病毒学实验技术课件29动物病毒学实验技术课件30动物病毒学实验技术课件31动物病毒学实验技术课件32动物病毒学实验技术课件33动物病毒学实验技术课件34动物病毒学实验技术课件35动物病毒学实验技术课件36动物病毒学实验技术课件37动物病毒学实验技术课件38动物病毒学实验技术课件39动物病毒学实验技术课件40动物病毒学实验技术课件41动物病毒学实验技术课件42动物病毒学实验技术课件43动物病毒学实验技术课件44动物病毒学实验技术课件45动物病毒学实验技术课件46动物病毒学实验技术课件47动物病毒学实验技术课件48动物病毒学实验技术课件49动物病毒学实验技术课件50动物病毒学实验技术课件51动物病毒学实验技术课件52动物病毒学实验技术课件53动物病毒学实验技术课件54动物病毒学实验技术课件55动物病毒学实验技术课件56动物病毒学实验技术课件57动物病毒学实验技术课件58动物病毒学实验技术课件59动物病毒学实验技术课件60动物病毒学实验技术课件61动物病毒学实验技术课件62动物病毒学实验技术课件63动物病毒学实验技术课件64动物病毒学实验技术课件65动物病毒学实验技术课件66动物病毒学实验技术课件67动物病毒学实验技术课件68动物病毒学实验技术课件69动物病毒学实验技术课件70动物病毒学试验技术杨润德动物病毒学试验技术71通过病毒学的学习,我们了解到病毒没有完整的酶系统,体内无核糖体等细胞器,因此不能在任何无生命的培养液中生长。所以要想增殖病毒必须在有生命的组织细胞内接种让其增殖,如:动物、鸡胚、细胞、器官。通过病毒学的学习,我们了解到病毒没72实验一、鸡胚接种发育中的鸡胚是病毒生长良好的环境,被广泛用于病毒(特别是禽病毒)的分离培养和疫苗生产等。病毒在鸡胚中的生长可以通过几种方法加以测定,如:采集尿囊液、羊水、绒尿膜、鸡胚作定量检定;采集以上样品作血凝滴定、血清学试验等;检査各部的病理学变化,如:鸡胚死亡、矮小、出血、羽毛发育不良、内脏坏死灶、绒尿膜水肿或增厚、坏死性痘斑、出血。实验一、鸡胚接种73除鸡胚外,根据病毒特点可以选用其他禽胚,如小鹅瘟病毒宜接种鹅胚,鸭瘟宜接种鸭胚等。影响病毒在鸡胚中生长的因素,包括鸡胚的日龄、接种途径、接种剂量、接种浓度培养时间、培养温度。培养温度一般为35.5-37℃,有些病毒所需的温度更低。但很多哺乳动物病毒不适合在鸡胚中生长。除鸡胚外,根据病毒特点可以选用其他74、受精卵的质量和孵化1选取SPF鸡群所产的蛋;2受精卵在10℃左右保存不超过10d3最好选择白色卵壳的受精卵;4.卵壳无污染,孵化前在0.1%的新洁尔灭中浸泡约15mn,最后用冷水冲洗,放卵架,或将卵放卵架用甲醛(1m2用13m甲醛、6.5gKMnO4熏蒸,而且在熏蒸时维持箱内温度为37℃20min后驱散甲醛蒸汽5孵化温度保持39-40℃,相对湿度60-65%,有风扇维持空气流通,每天翻蛋3-4次、受精卵的质量和孵化75接种途径根据不同病毒的嗜性,选择适宜的接种途径。最常用的途径有卵黄囊、尿囊腔尿囊膜3种途径,偶尔接种于羊膜腔、静脉、胚体等。在分离一种未知病毒时,最好3种途经均用,如果没有足够的受精卵,首选绒尿膜接种途径,因为大多数病毒都能适应。接种材料的处理:将组织置研钵磨碎加5-10倍盐水并加入双抗混均,20003000r/min离心20-30min。取上清待用。接种途径76()卵黄囊卵黄是胚胎的营养物质,卵黄囊膜是由内胚层发育而来的,内层覆有一层绒毛病毒可在绒毛细胞内生长,并且可以由此扩散到胚胎的其他部位()卵黄囊77动物病毒学实验技术课件78○尿囊腔接种尿囊是鸡胚的排泄器官。腔内充满排泄物尿囊液。液体的容量因卵的大小而异,一般6日龄鸡胚时约1m,11日龄时约6m,13日龄可高达10ml,以后逐渐减少直到消失。13日龄时的尿囊液是无色透明的,14日龄后逐渐变浑浊,呈乳白色,有时淡黄色。○尿囊腔接种79接种方法1.取9-10日龄鸡胚,照卵,画出气室,离气室边缘0.3-05cm用铅笔作一记号;2.在气室做记号处用碘酊消毒,打孔;3用注射器取毒液自接种孔斜刺入约1cm,注入毒液0.1-0.2ml;4.封孔继续孵化,定时照蛋。接种方法80动物病毒学实验技术课件81动物病毒学实验技术课件82动物病毒学实验技术课件83动物病毒学实验技术课件84动物病毒学实验技术课件85动物病毒学实验技术课件86动物病毒学实验技术课件87动物病毒学实验技术课件88动物病毒学实验技术课件89动物病毒学实验技术课件90动物病毒学实验技术课件91动物病毒学实验技术课件92动物病毒学实验技术课件93动物病毒学实验技术课件94动物病毒学实验技术课件95动物病毒学实验技术课件96动物病毒学实验技术课件97动物病毒学实验技术课件98动物病毒学实验技术课件99动物病毒学实验技术课件100动物病毒学实验技术课件101动物病毒学实验技术课件102动物病毒学实验技术课件103动物病毒学实验技术课件104动物病毒学实验技术课件105动物病毒学实验技术课件106动物病毒学实验技术课件107动物病毒学实验技术课件108动物病毒学实验技术课件109动物病毒学实验技术课件110动物病毒学实验技术课件111动物病毒学实验技术课件112动物病毒学实验技术课件113动物病毒学实验技术课件114动物病毒学实验技术课件115动物病毒学实验技术课件116动物病毒学实验技术课件117动物病毒学实验技术课件118动物病毒学实验技术课件119动物病毒学实验技术课件120动物病毒学实验技术课件121动物病毒学实验技术课件122动物病毒学实验技术课件123动物病毒学实验技术课件124动物病毒学实验技术课件125动物病毒学实验技术课件126动物病毒