CTC循环肿瘤细胞

1、1会计学CTC循环肿瘤细胞循环肿瘤细胞肿瘤循环细胞的特性肿瘤循环细胞的特性 稀有性稀有性：每ml血液约107个白细胞中仅有1个CTC 非典型形态非典型形态：比血液细胞、正常组织细胞的体积大、细胞核大，不规则，核质比高、不容易发生形变 异质性异质性：细胞表面抗原标志物表达差异、携带不同的分子信息、转移潜力差异 易聚集成团易聚集成团CTM：成瘤迁移能力是CTC的23-50倍外周血细胞的遮蔽阻碍了它们的分离与分子鉴定，因此的检测是制约其临床应用的关键循环肿瘤细胞循环肿瘤细胞的概念与特性的概念与特性循环肿瘤细胞的特性循环肿瘤细胞的特性CTCs可以是间质型、上皮型、上皮间质混合型、成团的CTCs(CTM

2、)CTCs检测的临床可行性检测的临床可行性健康状态癌前病变恶性肿瘤肿瘤转移CTC检测临床意义临床意义CTC监测分析耐药性检测耐药性检测动态跟踪CTC数目，判断是否产生耐药性肿瘤复发检测肿瘤复发检测CTC数目增多是肿瘤复发的前兆肿瘤新药物的开发肿瘤新药物的开发配合研制新的抗肿瘤药物体外早期诊断体外早期诊断肿瘤在1mm时，血液中可检测出CTC预后判断预后判断根据治疗前后CTC个数判断预后及存活时间化疗药物的疗效评判化疗药物的疗效评判根据化疗前后CTC数目变化，确定药物是否有效循环肿瘤细胞的检测循环肿瘤细胞的检测循环肿瘤细胞的循环肿瘤细胞的分析鉴定分析鉴定循环肿瘤细胞的分离富集循环肿瘤细胞的分离富集

3、CTCs分离分离、分型、分析、分型、分析原 理技术产品免疫捕获法(根据细胞表面标志物)阳性富集法：CellsearchTM系统CTC芯片（CTC-chip）MACSCell Separation阴性筛选法：Easy SepCyttel过滤法(根据细胞大小)ISET膜过滤 密度梯度离心（根据细胞密度）OncoQuick分离体系CTCs的检测方法及代表技术产品的检测方法及代表技术产品magnet Anti-EpCAM Coated ferrofluids7.5mlAnti-CK (epithelial cells)Anti-CD45 (WBCs)DAPI (viable cells )Automa

4、ted fluorescence detection systemmagnet使用抗EpCAM抗体抗体包被磁微粒，使其与肿瘤细胞结合，在特定磁场作用下达到分离CTC的目的。阳性富集阳性富集-CellsearchTMCTCWBCCellsearchTM CTCs鉴定鉴定上皮来源的CTCs的判定：DAPI（细胞核）阳性、角蛋白CKs阳性、CD45阴性芯片的表层排布了78 000个包被抗 EpCAM抗体的微位点血液样本流经芯片时，抗体与肿瘤细胞结合粘附在芯片上制造相对困难，成本昂贵，显微位点周围的血流通畅性限制了与抗体覆盖位点接触的CTC数量阳性富集阳性富集- CTCs-Chip 原理原理：联合上皮

5、细胞标志及肿瘤特异性标志通过免疫磁珠分选特异性肿瘤的CTCs联合抗MUC1和EpCAM抗体检测乳腺癌和直肠癌通过RT-PCR扩增肿瘤标志物来鉴定CTCs特点特点：较单一使用EpCAM抗体更特异不适用于EpCAM和CK阴性或弱化的CTCsPCR鉴定敏感性高，但易造成假阳性阳性富集- Adna Test 检测系统 Cyttel/Cytelligen 检测系统 原理原理: 利用CD45磁珠抗体吸附白细胞，在磁场作用 下去除白细胞，CTCs被富集沉淀 特点：特点： 可检出EpCAM、CK阴性的间质型CTCs 样本处理步骤多，CTCs易丢失步骤较多，CTCs容易丢失鉴定不稳定 判定标准：DAPI阳性、C

6、D45阴性，8号染色体扩增；特异性不足HepG2 cells stained with anti-KL1滤膜法滤膜法 原理： 根据肿瘤细胞与白细胞密度不同，通过梯度离心分离CTCs OncoQuick分离体系 方法： 密度梯度离心后，白细胞通过多孔滤膜被滤除，而CTCs被富集在介 质层中，洗脱后得到CTCs. 特点：可分离CK阳性和阴性细胞 局限性：CTCs迁移可能至血浆层、红细胞层和粒细胞层而丢失；CTCs微栓子可能沉入红细胞层而丢失；与肿瘤细胞特性、离心时间和温度等有关；用血量多15-30ml技术技术优势优势局限性局限性阳性率阳性率样本量样本量CellsearchTM特异性好、重复性好、可

7、自动化不能分型、漏检转移侵袭能力较强的间质型CTCs及CTM71%（MBC）47%（MCRC）78%（AIPC）7.5mLCTCs-chip(HB-chip)特异性好、灵敏度高、HB芯片可富集到CTM不能分型、漏检转移侵袭能力较强的间质型CTCs93%(MPC )0.9-5mlCyttel可检测出EpCAM、CK阴性的CTC、未对CTC进行任何标记不能分型、鉴定不稳定、鉴定时易发生CTCs丢失64.5%(NSCLC)5mLISET膜过滤CTC丢失少、适用于CK阴性肿瘤、适用于形态学、免疫学和基因特异性分析不适合小神经内分泌肿瘤细胞、特异性低、残留大的白细胞80%（BC）1-15ml肿瘤循环细胞

8、的特性肿瘤循环细胞的特性 稀有性稀有性：每ml血液约107个白细胞中仅有1个CTC 非典型形态非典型形态：比血液细胞、正常组织细胞的体积大、细胞核大，不规则，核质比高、不容易发生形变 异质性异质性：细胞表面抗原标志物表达差异、携带不同的分子信息、转移潜力差异 易聚集成团易聚集成团CTM：成瘤迁移能力是CTC的23-50倍外周血细胞的遮蔽阻碍了它们的分离与分子鉴定，因此的检测是制约其临床应用的关键循环肿瘤细胞循环肿瘤细胞的概念与特性的概念与特性magnet Anti-EpCAM Coated ferrofluids7.5mlAnti-CK (epithelial cells)Anti-CD45 (WBCs)DAPI (viable cells )Automated fluorescence detection systemmagnet使用抗EpCAM抗体抗体包被磁微粒，使其与肿瘤细胞结合，在特定磁场作用下达到分离CTC的目的。阳性富集阳性富集-CellsearchTMCTCWBC芯片的表层排布了78 000个包被抗 EpCAM抗体的微位点血液样本流经芯片时，抗体与肿瘤细胞结合粘附在芯片上制造相对困难，成本昂贵，显微位点周围的血流通畅性限制了与抗体覆盖位点接触的CTC数量阳性富集阳性富集- CTCs-Chip 原理原理：联合上皮细胞标志及肿瘤特异性标志通过