HPLC的实际应用课件

周茜2014.10.31高效液相色谱（HPLC）在实际样品分析中的应用复杂基质中抗生素残留分析

环境水样中全氟羧酸类化合物分析4123完整的HPLC方法建立3复杂基质中抗生素残留分析研究背景研究思路研究结果1滥用抗生素后果江苏省范围内145个集约化养殖场81个鸡粪样品中，金霉素检出率为42.2%，最大浓度达71.17mgkg-1；土霉素的检出率为15.6%，最大浓度为16.64mgkg-1；强力霉素的检出率为23.4%，最大浓度为26.05mgkg-1；上海黄浦江养猪场的养殖污水及污水贮流池连通的农田灌溉渠中均检出抗生素，2种四环素抗生素总量为294.0~376.1μgL-1；

长期施用动物排泄物的表层土壤中，土霉素和四环素的最大残留量高达32.3和26.4mg/kg。我国养殖业抗生素年排放3-4万吨，再利用后导致水体、农田、土壤和植物富集建立高效、准确的抗生素分析方法我国畜牧养殖业年消耗抗生素9.7万吨

四环素类66％，大环内酯类12％，青霉素类9％，其余抗生素为12％常用的四环素类有土霉素（OTC）、四环素（TC）、金霉素（CTC）、强力霉素（DC）R1R2R3pKa1pKa2pKa3OTCHOHOH3.37.39.1CTCClOHH3.37.89.6TCHOHH3.37.69.3DCHHOH3.17.79.3含四环素样品测定存在的两大难题1、基体干扰严重四环素和蛋白质键合模式Z.X.Chietal./Biomacromolecules12(2011)203–209U.Anandetal./J.Phys.Chem.B115(2011)6312–6320四环素对蛋白质荧光的影响2、某些基质中四环素浓度低MRLs：肌肉组织100ug

L-1；肝脏300ug

L-1；鸡蛋200ug

L-1研究思路1、消除样品中蛋白质干扰2、找寻样品富集净化技术检测痕量组分复杂的体系将待测组分与母体或基体分离浓缩痕量的被测组分一个完整的固相萃取步骤包括固相萃取柱的预处理、上样、洗去干扰物质、分析物洗脱四个步骤。超声酶解处理后，不同浓度蛋白质溶液中TCs回收率超声酶解法能快速破坏蛋白质与四环素类抗生素的作用力，实现样品中四环素类抗生素的准确测定On-lineSPE：萃取和分离检测是同时进行的两个过程，人工操作减少，有机试剂消耗量少。Off-lineSPE：萃取和分离检测是分开进行的两个过程，需要经过富集、洗脱、浓缩、定容等多个步骤才能完成，有耗时、溶剂消耗量大等缺点。Off-lineSPEvsOn-lineSPE在线固相萃取（On-lineSPE）

常规液相四元梯度泵双三元液相二个并联的三元梯度泵在线固相萃取步骤样品基质的完全馏出时间：tM分析物开始馏出时间：tG分析物的洗脱时间：tA阀切换上样溶剂洗脱溶剂

环境水样中全氟羧酸类化合物分析2研究背景研究思路研究结果PFCs(perfluorinatedcarboxylicacids)主要性质

分子中与碳相连的氢被氟取代的一类有机化合物

通式为F-(CF2)n-COOH

用途：泡沫灭火剂的添加剂、电子元件助焊剂、纺织品服装防水、金属酸洗缓蚀剂和防腐抑制剂耐热性、耐化学品性、紫外稳定性，是目前最难降解的有机污染物之一环境残留PFCs暴露水平

环境水中最主要PFCs类污染物为PFOA和PFOS海水中浓度一般在pg

L-1-ngL-1地表水中浓度一般在ngL-1-mgL-1地下水中的浓度则为μgL-1在污水处理厂污水的浓度范围一般在ngL-1-mgL-1eg.某氟化工厂未经过处理的污水中PFOA含量可高达559-1449mgL-1HoriHetal.EnvironmentalScience&Technology,2004,38(22):6118PFCs检测方法测定方法检测器优点缺点HPLCMS（四级杆/飞行时间）定性能力强，灵敏度高仪器昂贵，基质效应严重电导检测器检出限低线性范围广不能梯度洗脱，不适于复杂基质荧光检测器灵敏度高干扰多，需衍生GC电子捕获检测器选择性强灵敏度高需衍生氢火焰离子化检测器选择性好需衍生，检出限较高MS定性能力强，灵敏度高需衍生CAD工作原理定量原则：A=aMbA：峰面积；M：化合物质量分数，a，b:数值取决于分析物和色谱条件取对数后：logA=blogM+loga①HPLC洗脱液入口②氮气入口③雾化室④废液管⑤干燥管⑥Corona电极⑦碰撞室⑧离子阱⑨采集器⑩静电计3.1了解目标物性质化学结构存在形式理化性质耐受