类风湿因子一抗核抗体检测课件

实验诊断学课件教学牡丹江医学院检验系实验诊断学教研室实验诊断学课件教学第八章临床常用免疫学检查第一节血清免疫球蛋白检测第二节血清补体检测第三节细胞免疫检测第四节肿瘤标志物检检测第五节自身抗体检测第六节感染免疫检测第八章临床常用免疫学检查第一节血清免疫球蛋白检测第二节

第一节血清免疫球蛋白检测

免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是指一组具有抗体活性的球蛋白，由浆细胞合成与分泌；存在于机体的血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上。Ig因其功能和理化性质分IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五大类第一节血清免疫球蛋白检测免疫球蛋白(immunogl第一节血清免疫球蛋白检测本节重点及习题一、免疫球蛋白G检测二、免疫球蛋白A检测三．免疫球蛋白M检测四、免疫球蛋白E检测五、血清M蛋白检测第一节血清免疫球蛋白检测本节重点及习题一、免疫球蛋白G检测一、免疫球蛋白检测免疫球蛋白G(IgG)为人体含量最多和最主要的Ig占总免疫球蛋白的70％-80％对病毒、细菌和寄生虫等都有抗体活性是唯一能够通过胎盘的Ig，通过自然被动免疫使新生儿获得免疫抗体。一、免疫球蛋白检测[临床意义]1生理性变化：孕期22～28周间胎儿血IgG浓度与母体血浓度相等，出生后母体IgG逐渐减少，随后逐渐增加，到16岁前达成人水平2病理性变化⑴IgG增高是再次免疫应答的标志。常见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、感染以及自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎等[参考值]7.0～16.6g/L[临床意义][参考值]7.0～16.6g/L单纯性IgG增高:主要见于免疫增殖性疾病,如分泌型多发性骨髓瘤(MM),可见到IgG、lgA、lgD或IgE增高⑵IgG降低2.IgG降低见于各种先天性和获得性体液免疫缺陷病、联合免疫缺陷病也见于重链病、轻链病、肾病综合征、病毒感染和免疫抑制剂患者。儿童较成年人低，女性稍高于男性单纯性IgG增高:主要见于免疫增殖性疾病,如分泌型多发性骨髓

二、免疫球蛋白A检测免疫球蛋白A(IgA)分为血清型以与分泌型IgA(SIgA)两种。前者占血清总Ig的10％－15％,后者在外分泌系统中有更重要的免疫功能呼吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴样组织合成大量的SIgASIgA与这些部位的局部感染、炎症或肿瘤等病变密切相关。二、免疫球蛋白A检测

[参考值]

成人血清IgA为0.7～3.5g/L

SIgA

唾液平均为0.3g/L

泪液为30～80g/L

初乳平均为5.06g/L

粪便平均为1.3g/L[参考值]

成人血清IgA为0.7～3.5g/L

[临床意义]1生理性变化随年龄增加而增加，到16岁前达成人水平⒉病理性变化⑴IgA增高:见于IgA型MM、SLE、类风湿性关节炎、肝硬化、湿疹和肾脏疾病等2.IgA降低:见于反复呼吸道感染、非IgA型MM、重链病、轻链病、原发性和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病等。[临床意义]1生理性变化随年龄增加而增加，到16岁前达成三．免疫球蛋白M检测免疫球蛋白M(IgM)是分子质量最大的Ig,约占血清总Ig的5％～10％IgM是有效的凝聚和溶解细胞的因子天然同族凝聚素(抗A、抗B)、冷凝集素及伤寒沙门菌的抗体均属此类[参考值]成人血清IgM0.5～2.6g/L三．免疫球蛋白M检测[临床意义]⒈生理性变化从孕20周起，胎儿自身合成大量IgM，胎儿和新生儿IgM浓度是成人水平的10％，8-16岁前达成人水平⒉病理性变化⑴IgM增高:见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等单纯IgM增高提示为病原体引起的原发性感染，若脐血中IgM＞0.2g/L时，提示宫内感染此外,在原发性巨球蛋白血症时,IgM呈单克隆性明显增高2.IgM降低:见于IgG型重链病、IgA型MM、先天性免疫缺陷症、免疫抑制疗法后、淋巴系统肿瘤和肾病综合征等[临床意义]四、免疫球蛋白E检测免疫球蛋白E为血清中最少的一种Ig,约占血清总Ig的0.002％它是一种亲细胞性抗体与变态反应、寄生虫感染及皮肤过敏等有关[参考值]ELISA法为0.1～0.9mg/L四、免疫球蛋白E检测[临床意义]⒈生理性变化婴儿脐血IgE水平很低，12岁时达成人水平⒉病理性变化⑴IgE增高:见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类风湿关节炎，以及各种过敏性疾病如异位性皮炎、过敏性哮喘、过敏性鼻炎、间质性肺炎、荨麻疹、嗜酸性粒细胞增多症、疱疹样皮炎、寄生虫感染等[临床意义]⑵IgE降低见于先天性或获得性丙种球蛋白缺乏症恶性肿瘤长期用免疫抑制剂共济失调性毛细血管扩张症等⑵IgE降低五、血清M蛋白检测M蛋白(Mprotein)或称单克隆免疫球蛋白它是一种单克隆B细胞增殖产生的、具有相同结构和电泳迁移率的、免疫球蛋白分子及其分子片段[参考值]蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法:正常人为阴性五、血清M蛋白检测[临床意义]

检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病见于

①多发性骨髓瘤：以IgG型最常见，其次为IgA型，IgD和IgE罕见，也有IgM型的报道

②巨球蛋白血症(Waldenstrom症):存在大量单克隆IgM[临床意义]

检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病见于

③重链病：出现Ig重链(γ、α和μ重链)④轻链病：出现单克隆游离轻链⑤半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段⑥7SIgG病：为恶性M蛋白病等。③重链病：出现Ig重链(γ、α和μ重链)第二节血清补体检测补体(complement,C)是一组具有酶原活性的糖蛋白它由传统途径的九种成分C1(Clq、C1r、C1s)～C9；旁路途径的三种成分及其衍生物,B、D、P、H、I等因子组成第二节血清补体检测补体(complement,C)是一组补体、体液因子或免疫细胞共同参与灭活病原体的免疫反应也参与破坏自身组织或自身细胞而造成的免疫损伤补体的检测可了解补体功能以及体内免疫反应、免疫损伤等状态。补体、体液因子或免疫细胞共同参与灭活病原体的免疫反应第二节血清补体检测本节重点及习题一、总补体溶血活性检测二、补体C1q检测三、补体C3检测四、补体C4检测五、补体旁路B因子检测第二节血清补体检测本节重点一、总补体溶血活性检测二、补体

一、总补体溶血活性检测总补体溶血活性(totalhemilyticcomplementactivity,CH50)以溶血素(抗体)致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)激活待测血清中的C1引起补体活化的连锁反应,在绵羊红细胞上形成多分子的聚合物,影响其膜表面的结构与功能一、总补体溶血活性检测最终导致绵羊红细胞溶解。溶血程度与补体量呈正相关一般以50％溶血作为检测终点(CH50),较为灵敏、准确[参考值]试管法为50～100kU/L最终导致绵羊红细胞溶解。溶血程度与补体量呈正相关[临床意义]主要反映补体传统途(C1～C9)活化的活性程度。①CH50增高见于急性炎症组织损伤某些恶性肿瘤.[临床意义]主要反映补体传统途(C1～C9)活化的活性程度。②CH50减低:更有意义见于各种免疫复合物性疾病如肾小球肾炎自身免疫性疾病(如SLE)感染性心内膜炎、病毒性肝炎和慢性肝病重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等②CH50减低:更有意义

二、补体C1q检测补体﹙comlement）C1q是构成补体C1的重要组分C1是:一个C1q分子、2个C1r分子和2个C1s分子构成的钙离子依赖性复合物目前常规检测Clq[参考值]ELISA法为0.18－0.19g/L二、补体C1q检测[临床意义]①Clq增加:见于骨髓炎、类风湿关节炎、痛风、过敏性紫癜等②Clq降低见于SLE和混合型结缔组织疾病重度营养不良、肾病综合征、重症联合免疫缺陷等[临床意义]

三、补体C3检测补体C3是一种由肝脏合成的β2-球蛋白由α和β两条多肽链组成C3在补体系统各成分中含量最多是传统途径和旁路途径被激活的关键物质[参考值]成人0.8～1.5g/L三、补体C3检测[临床意义]1生理性变化随年龄的增长而增长⒉病理性增高①增高:见于急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应等②减低:见于大多数急性肾小球肾炎、链球菌感染后肾炎、狼疮性肾炎患者。还见于活动性SLE和类风湿关节炎活动期、慢性活动性肝炎、肝硬化、肝坏死等因此检测C3对这些疾病诊断有价值[临床意义]

四、补体C4检测补体C4是一种多功能β1-球蛋白在补体传统途径活化中，C4被C1s水解为C4a、C4bC4a、C4b在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和毒素等方面发挥作用[参考值]0.20～0.6g/L四、补体C4检测[临床意义]①升高:见于各种传染病、急性风湿热、结节性动脉周围炎、皮肌炎、关节炎和组织损伤等②降低:见于自身免疫性肝炎、狼疮性肾炎、SLE、I型糖尿病、胰腺癌、多发性硬化症、类风湿关节炎、IgA性肾病、遗传性IgA缺乏症[临床意义]

五．补体旁路B因子检测补体旁路﹙factor﹚B因子是一种不耐热的β球蛋白,50℃30分钟即可失活。它可被D因子裂解为Ba、Bb两个片段Bb与C3b结合构成旁路途径的C3转化酶B因子是补体旁路活化途径中的一个重要成分,又称C3激活剂前体五．补体旁路B因子检测[参考值]0.10～0.4g／L[临床意义]同补体旁路途径溶血活性检测增高见于某些自身免疫性疾病、肾病综合征。慢性肾炎、恶性肿瘤减低见于肝病、急性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性贫血[参考值]0.10～0.4g／L第三节细胞免疫检测一T细胞亚群的检测﹙一﹚T细胞花结实验﹙二﹚T细胞转化实验﹙三﹚T细胞分化抗原测定二B细胞分化抗原检测三自然杀伤细胞免疫检测四细胞因子检测第三节细胞免疫检测一T细胞亚群类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件

﹙一﹚T细胞花结形成试验T细胞表面有特意性绵羊红细胞﹙E﹚受体和T细胞识别受体﹙TCR﹚其中E受体曾广泛被用做鉴定和计数T细胞的标志。T细胞表面的E受体，可与绵羊红细胞结合成花结样细胞，称E玫瑰花形成实验﹙ERFT﹚此实验花结形成实验因其操作简便易行曾被广泛使用，但影响因素较多，因此逐渐被检测CD抗原方法所取代﹙一﹚T细胞花结形成试验﹙二﹚T细胞分化抗原测定T细胞表面有多种特意性抗原。WHO﹙1986年﹚统称其为白细胞分化抗原﹙clusterdifferentiation，CD﹚CD3＋代表总T细胞，CD3＋/CD4＋代表T辅助细胞﹙Th﹚，CD3＋/CD8＋代表T抑制细胞﹙Ts﹚等。应用这些细胞的单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后，再与荧光标记二抗﹙兔或羊抗鼠IgG﹚反应，在荧光显微镜下或流式细胞仪中计数CD阳性细胞的百分率﹙二﹚T细胞分化抗原测定[参考值]免疫荧光法﹙IFA﹚CD3＋为63.1％±10.8％CD3＋/CD4＋（Th﹚为42.8％±9.5％CD3＋/CD8＋（Ts﹚为19.6％±5.9％CD4CD8﹙Th/Ts﹚为2.2％±0.7％：流式细胞术CD3＋为61％～85％；CD3＋/CD4＋（Th﹚28％～58％；CD3＋/CD8＋（Ts﹚为19％～48％；CD4CD8﹙Th/Ts﹚为0.9％～2.0％；

[参考值][临床意义]①CD3＋降低：见于自身免疫性疾病。SLE类风湿关节炎②CD3＋/CD4＋（Th﹚降低：恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、爱滋病③CD3＋/CD8＋（Ts﹚降低见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病。④CD4/CD8CD8﹙Th/Ts﹚比值降低：见于爱滋病⑤监测器官移植排斥反应CD4/CD8﹙Th/Ts﹚比值增高⑥CD3＋CD4＋CD8＋较高且有CD1＋CD2＋CD5＋CD7＋增高则可能为T细胞型急性淋巴细胞性白血病[临床意义]二、B细胞分化抗原检测B细胞是在鸟类法氏囊﹙bursaofFabricius﹚或其同功器官﹙骨髓bonemarrow﹚内发育成熟的细胞，因此称为法氏囊或骨髓依赖的淋巴细胞，简称B细胞。B细胞受抗原刺激后可分化为产生抗体的浆细胞，B细胞是体内唯一能产生抗体﹙免疫球蛋白分子﹚的细胞二、B细胞分化抗原检测[参考值]流式细胞术：CD19+﹙11.74±3.37﹚％[临床意义]①升高：见于急性淋巴细胞白血病﹙B细胞型，且有SmIg、HLA-D表达﹚、慢性淋巴细胞白血病等②降低：见于无丙种球蛋白血症、使用化疗或免疫抑制剂后。[参考值]流式细胞术：CD19+﹙11.74±3.37﹚％第四节肿瘤标志物检测

肿瘤标志物(tumormarker)是由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。这类物质可反映细胞恶变各个阶段的表型及基因特征性。主要包括蛋白质类。糖类物质和酶类肿瘤标志物。附图第四节肿瘤标志物检测肿瘤标志物(tumormarke第三节肿瘤标志物检测一、蛋白质肿瘤标志物的检测(一)甲种胎儿球蛋白测定(二)癌胚抗原测定(三)组织多肽抗原测定(四)前列腺特异抗原测定第三节肿瘤标志物检测一、蛋白质肿瘤标志物的检测(一)甲种胎第四节肿瘤标志物检测一、蛋白质肿瘤标志物的检测二、糖脂肿瘤标志物检测本节重点及习题(五)鳞状上皮细胞癌抗原测定(三)糖链抗原19－9测定(四)癌抗原125测定第四节肿瘤标志物检测一、蛋白质肿瘤标志物的检测本节重点及习

一、蛋白质肿瘤标志物的检测(一)甲种胎儿球蛋白测定甲种胎儿球蛋白(alphafetoprotein,AFP)是在胎儿早期由肝脏合成的一种糖蛋白出生后合成受到抑制一、蛋白质肿瘤标志物的检测当干细胞或生殖腺胚胎组织发生恶性病变时，有关基因重新被激活使原来已丧失合成AFP能力的细胞重新开始合成,以致血中AFP含量明显升高因此血中AFP浓度检测对诊断干细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值当干细胞或生殖腺胚胎组织发生恶性病变时，有关基因重新被激活[参考价值]RIA或ELISA法为低于25μg/L[临床意义]1.原发性肝细胞性肝癌患者血清AFP增高，诊断阈值为超过300μg/L，增高率约为75％-80％；约有10％的原发性肝癌患者其AFP为阴性。[参考价值]2.生殖腺胚胎癌(睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤等)、胃癌或胰腺癌时，血中AFP含量也可升高。3.病毒性肝炎、肝硬化时AFP也有不同程度的升高(20-200μg/L)4.妊娠3-4个月、孕妇AFP开始升高；7-8个月达高峰，以后下降；但多低于300μg/L。2.生殖腺胚胎癌(睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤等)、胃癌或胰腺癌时(二)癌胚抗原测定癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)是一种富含多糖的蛋白复合物胎儿早期的消化管及某些组织均有合成CEA的能力，但孕六个月以后含量逐渐减少，出生后含量极低检测它对肿瘤的诊断、预后、复发判断有意义(二)癌胚抗原测定[参考值]ELISA法和RIA法为＜15μg/L[临床意义]1.CEA明显增高见于、胰腺癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等患者。[参考值]ELISA法和RIA法为＜15μg/L2.动态观察一般病情好转时，CEA浓度下降，病情加重时可升高3.结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病、肺气肿及支气管哮喘等也常见CEA轻度升高4.96％～97％非吸烟健康人血清CEA浓度＜2.5μg/L，大量吸烟者中有20％～40％的人CEA＞2.5μg/L，少数人大于5.0μg/L。2.动态观察一般病情好转时，CEA浓度下降，病情加重时可升高(三)组织多肽抗原测定组织多肽抗原(tissuepolypeptideantigen,TPA)是存在于胎盘和大部分肿瘤组织细胞膜和细胞质中的一种单链多肽。在恶性肿瘤患者血清中的检出率高达70％以上但它的增高与肿瘤发生部位和组织类型无相关性在观察疗效上则有较高的敏感性[参考值]ELISA法为＜130U/L(三)组织多肽抗原测定[临床意义]1.恶性肿瘤患者血清TPA水平可显著升高。2.经治疗好转后，TPA水平降低；若TPA再次升高，提示有肿瘤复发。3.TPA和CEA同时检测可有利于恶性与非恶性乳腺病的鉴别诊断。4.急性肝炎、胰腺炎、肺炎、妊娠后3个月都可升高。[临床意义]

(四)前列腺特异抗原测定前列腺特异抗原(prostatespecificantigen,PSA)是一种由前列腺分泌的单链糖蛋白,它存在于前列腺管道的上皮细胞中。在前列腺癌时可见PSA血清水平明显升高(四)前列腺特异抗原测定今年发现血清总PSA(T-PSA)80％以结合形式存在,称复合PSA(c-PSA)20％的以游离PSA形式存在(F-PSA)其比值对诊断更有特异和准确性今年发现血清总PSA(T-PSA)[参考值]RIA法和（酶联免疫印迹技术）CLIA法：T-PSA＜4.0μg/L，F-PSA<0.8μg/LF/T比值＞0.25[临床意义]1.前列腺癌时60％－90％患者血清PSA水平明显升高；当行外科切除术后，90％患者血清PSA水平明显降低[参考值]RIA法和（酶联免疫印迹技术）CLIA法：2.若见PSA水平升高，即有转移或复发的可能3.良性前列腺瘤、前列腺肥大或急性前列腺炎时，约有14％的患者血清PSA水平升高，此时应注意鉴别2.若见PSA水平升高，即有转移或复发的可能(五)鳞状上皮细胞癌抗原测定鳞状上皮细胞抗原(squamuscellcarcinomaantigen,SCC)是肿瘤相关抗原TA-4的亚型，是一种糖蛋白[参考值]RIA和CLIA法为≤1.5μg/L。(五)鳞状上皮细胞癌抗原测定[临床意义]1.血清中SCC水平升高，可见于83％的宫颈癌、25％-75％的肺鳞状细胞癌、30％Ⅰ期食管癌、89％的Ⅲ期食管癌；2.也见于卵巢癌、子宫癌和颈部鳞状上皮细胞癌。3.临床上用于检测上述恶性肿瘤的治疗效果、复发、转移或评价预后。[临床意义]二、糖脂肿瘤标志物检测(三)糖链抗原19－9测定糖链抗原19－9(carbohydrateantigen19-9,CA19-9)是一种糖蛋白。胚胎期分布于胎儿的胰腺。肝胆和肠等组织；在成人的胰、胆等部位也有少量存在。[参考值]固相放射免疫分析(IRMA)法和ELISA法：健康人血清CA19-93.7万U/L二、糖脂肿瘤标志物检测[临床意义]1.胰腺癌、肝胆和胃肠道疾病时血中CA19-9的水平可明显升高。其阳性率胰腺癌为85％－95％胆囊癌和胆管癌为85％左右胃癌、结肠癌为40％直肠癌为30％－50％但无早期诊断价值,对早期病人的敏感度仅为30％[临床意义]2.连续检测对病情进展、手术疗效、预后估计及复发诊断有重要价值。3.急性胰腺炎、胆汁淤积型胆管炎、胆石症、急性肝炎、肝硬化等，血清CA19-9也可出现不同程度的升高。4.结合CEA检测,对胃癌诊断符合率可达85％2.连续检测对病情进展、手术疗效、预后估计及复发诊断有重要价

(四)癌抗原125测定癌抗原125(cancerantigen125,CA125)为一种糖蛋白性肿瘤相关抗原,存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内。当患有上皮性卵巢癌和子宫内膜癌时,病人血清CA125水平可明显升高。[参考值]＜3.5万U/L(四)癌抗原125测定[临床意义]1.卵巢癌病人血清CA125水平明显升高,其阳性率高达60％-90％,故对诊断卵巢癌有较大临床价值,尤其对观察治疗效果和判断复发较为灵敏。[临床意义]2.宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌、胆道癌、肝癌、胃癌、结肠癌、肺癌等也有一定的阳性反应。3.3％～6％的良性卵巢瘤、子宫肌瘤病人血清CA125有时也会明显升高,但多数不超过10万U/L。4.肝硬化失代偿期血清CA125明显升高。2.宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌、胆道癌、肝癌、胃癌、结肠癌、肺癌第四节自身抗体检测

某些原因削弱或破坏健康人的自身免疫耐受(autoimmunetolerance)，免疫系统就会对自身组织或成分产生免疫应答，称为自身免疫(autoimmunity)。由于自身免疫而产生的疾病称为自身免疫病(autoimmunedisease,AID)。按自身抗原分布的范围可分器官特异性和非器官特异性。诊断自身免疫病的重要方法是作自身抗体免疫检测。第四节自身抗体检测某些原因削弱或破坏健康人的自身免疫耐第四节自身抗体检测二、抗核抗体检测本节重点及习题一、类风湿因子(一)抗核抗体检测(二)抗DNA抗体测定第四节自身抗体检测本节重点及习题一、类风湿因子(一)抗核抗一、类风湿因子类风湿因子(rheumatoidfactor,RF)是变性lgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。它有IgM型，也有IgG、IgA、lgD和IgE型。用乳胶凝集法测出的主要是IgM型；速率法敏感但不能分类型。[参考值]乳胶凝集法、血清稀释度低于1:10速率比值法＜30U/L。一、类风湿因子[临床意义]类风湿性疾病时，RF的阳性率可高达70％－90％，类风湿关节炎的阳性率为70％。IgG型:与患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状有关IgM型与IgA型的效价与病情、骨质破坏有关[临床意义]其他自身免疫性疾病，如多发性肌炎、硬皮病、干燥综合征、SLE、自身免疫性溶血、慢性活动性肝炎等也见RF阳性。某些感染性疾病，如传染性单核细胞增多症、结节病、感染性心内膜炎等也多呈现阳性反应。故本试验的特异性不高，应予鉴别。其他自身免疫性疾病，如多发性肌炎、硬皮病、干燥综合征、SLE

二、抗核抗体检测

(一)抗核抗体检测

抗核抗体检测(antinuclearantibody,ANA)是指抗细胞核成分［脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA等］的自身抗体的总称

ANA的性质主要是IgG,也有IgM、IgA。这种抗体无器官和种族的特异性二、抗核抗体检测◎免疫荧光法以鼠肝细胞核作抗原时,该抗体可与之结合,再加入荧光标记抗人Ig后,胞核区发出黄绿色荧光而胞浆区不发荧光。根据细胞核染荧光的图像可分析为均质型、边缘型、颗粒型和核仁型等四型。◎[参考值](间接荧光抗体试验)IFA法为阴性,血清滴度＞1:40为阳性。◎免疫荧光法以鼠肝细胞核作抗原时,该抗体可与之结合,再加入荧[临床意义]1.ANA阳性⑴最多见于未治疗的SLE,阳性率达80％～100％;活动期SLE几乎100％阳性。经皮质激素治疗后,阳性率可降低⑵药物性狼疮(100％)⑶混合性结缔组织病(10％)⑷全身性硬皮病(85％-95％)[临床意义]⑸多发性肌炎(3％-90％)⑹狼疮性肾炎(95％-100％)⑺原发性胆汁性肝硬化(95％-100％)⑻其他还见于干燥综合征、类风湿关节炎,桥本甲状腺炎等。2.荧光核型:细胞核荧光有四种核型，其形状和意义见表。⑸多发性肌炎(3％-90％)(三)抗DNA抗体测定抗DNA抗体（anti-DNAantibody,抗-DNA)分为抗单链DNA(singlestranded-DNA,ss－DNA)抗体和抗双链抗ds-DNA抗体和抗Z－DNA抗体。抗ds-DNA抗体的靶抗原是细胞核中DNA的双螺旋结构，它的检测有临床重要性。目前最敏感和特异的方法是用马疫锥虫或绿蝇短膜虫作为抗原基质进行间接免疫荧光测定[结果判定]。短膜虫动基体均匀质性着色，核浆成弱均质性为阳性。(三)抗DNA抗体测定[临床意义]1.抗ds-DNA抗体阳性：见于活动期的SLE,阳性率70%-90%。本试验特异性较高,但敏感性较低。目前认为,能结合补体的抗ds-DNA抗体,在SLE特别是并发狼疮性肾炎患者的发病机制中起重要作用。其他风湿病中抗ds-DNA抗体也可阳性[临床意义]2.抗ss－DNA抗体阳性:见于SLE(阳性率70％－95％)，尤其是合并有狼疮性肾炎。还可见于一些重叠结缔组织病、药物诱导的狼疮和慢性活动性肝炎等，但不具特异性。2.抗ss－DNA抗体阳性:见于SLE(阳性率70％－95％抗线粒体抗体测定；抗线粒体抗体是一种针对细胞质中线粒体内膜和外膜蛋白成分的自身抗体，无器官和属特异性，该抗体主要是IgG。许多肝脏疾病时可检出AMA。其阳性率在原发性胆汁性肝硬化为90.5肝外胆管阻塞为阴性。AMA可作为原发性胆汁性肝硬化和肝外胆道阻塞性肝硬化症的鉴别诊断。抗线粒体抗体测定；抗线粒体抗体是一种针对细胞质中线粒体内膜和抗甲状腺抗体测定甲状腺功能亢进慢性甲状腺炎甲状腺功能低下具有自身免疫病的特征，常可测出甲状腺抗体。抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺微粒体抗体。抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺微粒体抗体在临床实验中应用最广，诊断价值也较大1.抗甲状腺球蛋白抗体甲状腺球蛋白是由甲状腺滤泡细胞合成的一种糖蛋白，主要是IgG。90%-95%桥本甲状腺炎，52%-58%甲亢和35%甲状腺癌患者可出现抗TG阳性。重症肌无力、肝脏病、风湿性血管病、糖尿病也可出现阳性抗甲状腺抗体测定甲状腺功能亢进慢性甲状腺炎甲状腺功能低下具有抗甲状腺微粒体抗体是针对甲状腺微粒体的一种抗体。抗TM阳性检出率；桥本甲状腺炎为50%-100%，甲减为88.9%；甲状腺肿瘤为13.1%，单纯甲状腺肿为8.6%；亚急性甲状腺炎为17.2%-25%；SLE为15.4%-44.7%；其他风湿病为30%，抗TG与抗TM同时检测，可以提高阳性检出率。抗甲状腺微粒体抗体是针对甲状腺微粒体的一种抗体。抗心肌抗体测定；抗心肌抗体的自身抗原包括线粒体内膜上的腺苷酸转移蛋白、心肌肌质蛋白、原肌球蛋白和热休克蛋白。心肌炎、心肌衰竭、风湿热、重症肌无力、心疾病和心脏手术后患者均可检测到抗心肌抗体。抗心肌抗体测定；抗心肌抗体的自身抗原包括线粒体内膜上的腺苷酸抗心磷脂抗体测定；抗心磷脂抗体测定是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体。抗磷脂抗体与内皮细胞或血小板膜上的磷脂结合，破坏细胞的功能。造成血液的高凝状态；与红细胞结合，在补体的参与下，造成溶血性贫血。ACA是抗磷脂抗体中的一种，特异性较强，能干扰磷脂依赖的凝血过程，与各种疾病关系的研究较多，与自身免疫性疾病和磷脂综合征的关系较为密切。抗心磷脂抗体测定；抗心磷脂抗体测定是一组针对各种带负电荷磷脂ACA在SACA在S

第六节感染免疫检测一、细菌感染免疫检测人感染病原体后经过一段时间产生的特异性抗体一般可持续数月或更长时间，因而检测抗体不仅可用于现症诊断，还是疾病追溯性调查的一种方法。(一)血清抗链球菌溶血素“O”试验溶血素“O”是A群溶血性链球菌产生的具有溶血活性的代谢产物，相应抗体称抗链球菌溶血素“O”(抗O或ASO)。第六节感染免疫检测一、细菌感染免疫检测[临床意义]阳性表示病人近期内有A群溶血性链球菌感染，常见于活动性风湿热、风湿性关节炎、风湿性心肌炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤和软组织的感染等临床意义]阳性表示病人近期内有A群[溶血性链球菌感染，常见于活动性风湿热、风湿性关节炎、风湿性心肌炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤和软组织的感染等。[临床意义]阳性表示病人近期内有A群溶血性链球菌感染，常见于2.伤寒和副伤寒沙门菌抗体IgM测定[参考值]ELISA法阴性或滴度＜1:20[临床意义]IgM抗体于发病后一周即出现升高，有早期诊断价值。3.伤寒和副伤寒沙门菌可溶性抗原测定[参考值]乳胶凝集法为阴性。[临床意义]对确诊伤寒沙门菌感染有重要意义。2.伤寒和副伤寒沙门菌抗体IgM测定(五)结核分枝杆菌抗体和DNA测定[参考值]胶体金或ELISA法检测抗体阴性；PCR法检测DNA阴性。[临床意义]抗体阳性表示有结核分枝杆菌感染；DNA检测特异性更强，灵敏度更高。(五)结核分枝杆菌抗体和DNA测定二、病毒感染免疫检测(一)流行性乙型脑炎病毒抗体IgM测定流行性乙型脑炎病毒是我国夏秋季流行的主要传染病之一。[参考值]ELISA和微量间接免疫荧光法阴性[临床意义]当恢复期血清抗体滴度比急性期≥4倍时，有辅助诊断意义，可用于临床回顾性诊断二、病毒感染免疫检测（一）TORCH试验为妇产科产前的常规检查项目TORCH包括：弓形虫，风疹病毒，巨细胞病毒，单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的病原抗体检测⒈风疹病毒检测若在早孕时发生胎儿先天性风疹感染，新生儿致残致畸率可达80％，主要损害五官神经系统和智力，有流行性【参考值】IgM、IgG抗体均为阴性。【临床意义】（一）TORCH试验为妇产科产前的常规检查项目TORCH包括如果被检者2种抗体均无，应视为易感者，可注射疫苗保护。有IgM抗体出现均应做妇产科咨询后决定是否治疗性流产或继续妊娠。仅有IgG抗体应注意其滴度变化，如果滴度低且无变化为既往感染，若测定患者急性期和恢复期双份血清，抗体滴度明显升高4倍以上，则具有诊断近期风疹感染的意义。如果被检者2种抗体均无，应视为易感者，可注射疫苗⒉单纯疱疹病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）检测单纯疱疹病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）均有一定的致畸性、先天感染后影响新生儿神经系统发育，孕早期感染影响胎儿发育，故也作为早孕临床筛检项目，抗原检测应用不广泛。抗体检测可分别进行Ⅰ型和Ⅱ型的IgM和IgG抗体的检测，IgM型为近期感染，IgG型多为既往感染。⒉单纯疱疹病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）检测⒊巨细胞病毒﹙CMV﹚检测巨细胞病毒属疱疹类病毒，其先天感染的致畸性仅次于风疹病毒，主要也是造成神经系统及智力的障碍。实验室可用EIA法测CMV-IgM以了解近期感染，抗CMV-IgG可以用流行病学调查。⒋弓形虫检测先天性弓型虫感染可引起神经系统，特别是生后原期智力障碍。抗体检测可测特意性IgM和IgG型抗体。IgM型抗体提示现症感染，IgG型抗体一般提示既往感染。⒊巨细胞病毒﹙CMV﹚检测巨细胞病毒属疱疹类病毒，其先天感染二、病毒感染免疫检测(二)流行性乙型脑炎病毒抗体IgM测定流行性乙型脑炎病毒是我国夏秋季流行的主要传染病之一。[参考值]ELISA和微量间接免疫荧光法阴性[临床意义]当恢复期血清抗体滴度比急性期≥4倍时，有辅助诊断意义，可用于临床回顾性诊断二、病毒感染免疫检测(三)嗜异性凝集试验及吸收试验传染性单核细胞增多症由EB病毒感染所致。[参考值]阴性或凝集效价<1:7(红细胞凝集法)[临床意义]EB病毒感染后2周抗体效价达高峰，常＞1：56；以后下降；3个月后消失；若第一次检测效价增高不明显；而追踪检查时效价上升4倍以上；更有诊断价值。(三)嗜异性凝集试验及吸收试验(七)严重急性呼吸综合征病毒抗体及RNA测定严重急性呼吸综合征(SARS)是由SARS冠状病毒(SARS－CoV)引起的21世纪的新传染病。SARS－CoV是具有包膜的单链正义RNA病毒是导致SARS(俗称非典型肺炎”)的病原体。[参考值]ELISA和IFAte检测抗体阴性；RT－PCR检测RNA阴性[临床意义]抗体阳性结果表明曾感染过SARS－CoV，由阴性到阳性的血清转化，或者，急性期到恢复期抗体效价增高4倍以上，表明有近期感染；PCR阳性可表示标本中有SARS－CoV的遗传物质（RNA）。(七)严重急性呼吸综合征病毒抗体及RNA测定三、寄生虫感染免疫检测(一)弓形虫抗体和DNA测定弓形虫感染为人畜共患性疾病，可引起中枢神经系统和眼的病变，也可引起流产和先天畸形等。[参考值]IgG和IgM均阴性(间接血凝试验、IFA法和ELISA法)；DNA阴性(PCR法和DNA杂交技术)[临床意义]IgM升高是近期感染的指标；IgG增高是既往感染的指标；双份血清IgG抗体滴度4倍以上增高或单份血清IgG滴度≥1：512，提示近期感染可能性大。三、寄生虫感染免疫检测二)囊虫抗体测定囊虫病是一种人和猪共患的寄生虫病。[参考值]①ELISA法：血清低于1：64为阴性；脑脊液低于1：8为阴性②间接血凝法：血清低于1：128为阴性；脑脊液低于1：8为阴性。[临床意义]IgG阳性见于囊虫病，可用作流行病学调查。

细菌寄生虫形态及检测二)囊虫抗体测定四、性传播疾病免疫检测性传播疾病近年在我国的发病率呈上升趋势，多由衣原体、支原体、梅毒螺旋体、淋球菌、人获得性免疫缺陷病毒引起。(一)衣原休抗体测定衣原体包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体三种，其中沙眼衣原体(CT)是引起性传播疾病常见的病原体之一。[参考值]IFA法IGM效价<l：32，IgG效价＜1:512。[临床意义]①IgM阳性提示近期有CT感染，有利于早期诊断；②IgG在发病后6－8周出现，持续时间较长；提示曾有过CT感染四、性传播疾病免疫检测(二)支原体的血清学检测对人致病的主要有肺炎支原体、解脲人原体、人型支原体和生殖道支原体。[参考值]补体结合试验：效价＜1：64；间接血凝试验：阴性[临床意义]单份血清效价＞1：64－128者或双份血清有4倍以上增长者，有诊断意义。间接血凝试验的敏感性高于补体结合试验，感染发病后7天出现阳性。(二)支原体的血清学检测(三)梅毒螺旋体抗体测定梅毒螺旋体侵入人体后，在血清中除可出现特异性抗体外，还可出现非特异性抗体(反应素)。[参考值]检测非特异性抗体的定性试验：快速血浆反应素试验(RPR)阴性；不加热血清反应素试验(USR)阴性；性病研究实验室试验(VDRL)阴性；检测梅毒螺旋体的特异性抗体的确诊试验：梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)和荧光螺旋体抗体吸收试验(FTA－ABS)均阴性。(三)梅毒螺旋体抗体测定[临床意义]梅毒螺旋体反应素试验敏感性高；定性试验阳性的情况下，必须进行确诊试验，若阳性可确诊梅毒。(四)淋球菌血清学测定及DNA测定[参考值]协同凝集试验阴性；PCR定量试验阴性[临床意义]协同凝集试验特异性强、敏感性高且操作简便；PCR可做确诊试验。hhug[临床意义]梅毒螺旋体反应素试验敏感性高；定性试验阳性的情况(五)人获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定人获得性免疫缺陷病毒(HIV)是艾滋病(AIDS)的病原体。[参考值]①筛选试验：ELISA法和快速蛋白印迹法(RWB)均为阴性；②确诊试验：蛋白印迹试验(WB)和RT－PCR法RNA均阴性。[临床意义]筛选试验灵敏度高，但特异性不高，故有假阳性；所以筛选试验阳性时应用确诊试验证实。确诊试验阳性，特别是RT－PCR法检测HIV－RNA阳性，对肯定诊断和早期诊断颇有价值。

(五)人获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定第七节其他免疫检测

一、循环免疫复合物检验二、冷球蛋白检测三、C-反应蛋白检测四、特异性IgE检测第七节其他免疫检测一、循环免疫复合物检验三C-反应蛋白检测C-反应蛋白﹙C-reactiveprotein，CRP﹚是一种由肝脏合成的，能与肺炎双球菌细胞壁C-多糖起反应的急性时相反应蛋白。CRP不仅能结合多种细菌、真菌及原虫等体内的多糖物质，在钙离子存在的情况下，还可以结合卵磷脂和核酸等，有激活补体、促进吞噬和调节免疫作用。广泛存在于血清和其他体液中。三C-反应蛋白检测C-反应蛋白﹙【原理】抗原抗体结合形成复合物，在一定介质条件下产生浊度，当光通过时发生散射，根据散射强度判定待测物质含量。【参考值】＜2.87mg/L﹙速率散射比浊法﹚【临床意义】CRP是急性时相反应极灵敏的指标①CRP升高：见于化脓性感染、组织坏死（心机梗死、严重创伤、大手术、烧伤）、恶性肿瘤、结羝组织病、器官移植、急性排斥。②鉴别细菌性和非细菌性感染；前者CRP升高，后者不升高【原理】抗原抗体结合形成复合物，在一定介质条件下产生浊度，类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件Ig的基本结构(单体)抗体的酶解片段Ig的基本结构(单体)抗体的酶解片段类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件图3SIgA二聚体图3SIgA二聚体类风湿因子一抗核抗体检测课件IgM五聚体

IgM五聚体类风湿因子一抗核抗体检测课件粉螨粉螨类风湿因子一抗核抗体检测课件抗体的生物学活性抗体的生物学活性类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件着丝点型胞浆型着丝点型胞浆型均质型斑点型均质型斑点型核仁型核仁型风湿病患者血中的抗核抗体风湿病患者血中的抗核抗体抗核抗体抗双链DNA荧光染色抗核抗体抗双链DNA荧光染色类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件在补体的作用下红细胞溶解在补体的作用下红细胞溶解荧光核型的形态和意义核型荧光特点抗原类型ANA效价和疾病低(1:10-1:20)中(1:40-1:80)高>1:100均质型边缘型颗粒型核仁型全细胞核均匀一致荧光细胞核边缘荧光明亮散在明亮荧光颗粒核内呈块状荧光DNA核蛋白DNAENARNAPSS,SjS,RA,肝硬化SLE,SjS,PSSSLE(缓解型,非肾型)和RA型等SLE,SjS,RASLE,SjS,PSS,MCTDSLE(活动期)SjSPSS,Crest征SLE(活动期)SLE(活动期,肾型)荧光核型的形态和意义ANA效价和疾病低(1:10-1:20)实验诊断学课件教学牡丹江医学院检验系实验诊断学教研室实验诊断学课件教学第八章临床常用免疫学检查第一节血清免疫球蛋白检测第二节血清补体检测第三节细胞免疫检测第四节肿瘤标志物检检测第五节自身抗体检测第六节感染免疫检测第八章临床常用免疫学检查第一节血清免疫球蛋白检测第二节

第一节血清免疫球蛋白检测

免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是指一组具有抗体活性的球蛋白，由浆细胞合成与分泌；存在于机体的血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上。Ig因其功能和理化性质分IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五大类第一节血清免疫球蛋白检测免疫球蛋白(immunogl第一节血清免疫球蛋白检测本节重点及习题一、免疫球蛋白G检测二、免疫球蛋白A检测三．免疫球蛋白M检测四、免疫球蛋白E检测五、血清M蛋白检测第一节血清免疫球蛋白检测本节重点及习题一、免疫球蛋白G检测一、免疫球蛋白检测免疫球蛋白G(IgG)为人体含量最多和最主要的Ig占总免疫球蛋白的70％-80％对病毒、细菌和寄生虫等都有抗体活性是唯一能够通过胎盘的Ig，通过自然被动免疫使新生儿获得免疫抗体。一、免疫球蛋白检测[临床意义]1生理性变化：孕期22～28周间胎儿血IgG浓度与母体血浓度相等，出生后母体IgG逐渐减少，随后逐渐增加，到16岁前达成人水平2病理性变化⑴IgG增高是再次免疫应答的标志。常见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、感染以及自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎等[参考值]7.0～16.6g/L[临床意义][参考值]7.0～16.6g/L单纯性IgG增高:主要见于免疫增殖性疾病,如分泌型多发性骨髓瘤(MM),可见到IgG、lgA、lgD或IgE增高⑵IgG降低2.IgG降低见于各种先天性和获得性体液免疫缺陷病、联合免疫缺陷病也见于重链病、轻链病、肾病综合征、病毒感染和免疫抑制剂患者。儿童较成年人低，女性稍高于男性单纯性IgG增高:主要见于免疫增殖性疾病,如分泌型多发性骨髓

二、免疫球蛋白A检测免疫球蛋白A(IgA)分为血清型以与分泌型IgA(SIgA)两种。前者占血清总Ig的10％－15％,后者在外分泌系统中有更重要的免疫功能呼吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴样组织合成大量的SIgASIgA与这些部位的局部感染、炎症或肿瘤等病变密切相关。二、免疫球蛋白A检测

[参考值]

成人血清IgA为0.7～3.5g/L

SIgA

唾液平均为0.3g/L

泪液为30～80g/L

初乳平均为5.06g/L

粪便平均为1.3g/L[参考值]

成人血清IgA为0.7～3.5g/L

[临床意义]1生理性变化随年龄增加而增加，到16岁前达成人水平⒉病理性变化⑴IgA增高:见于IgA型MM、SLE、类风湿性关节炎、肝硬化、湿疹和肾脏疾病等2.IgA降低:见于反复呼吸道感染、非IgA型MM、重链病、轻链病、原发性和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病等。[临床意义]1生理性变化随年龄增加而增加，到16岁前达成三．免疫球蛋白M检测免疫球蛋白M(IgM)是分子质量最大的Ig,约占血清总Ig的5％～10％IgM是有效的凝聚和溶解细胞的因子天然同族凝聚素(抗A、抗B)、冷凝集素及伤寒沙门菌的抗体均属此类[参考值]成人血清IgM0.5～2.6g/L三．免疫球蛋白M检测[临床意义]⒈生理性变化从孕20周起，胎儿自身合成大量IgM，胎儿和新生儿IgM浓度是成人水平的10％，8-16岁前达成人水平⒉病理性变化⑴IgM增高:见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等单纯IgM增高提示为病原体引起的原发性感染，若脐血中IgM＞0.2g/L时，提示宫内感染此外,在原发性巨球蛋白血症时,IgM呈单克隆性明显增高2.IgM降低:见于IgG型重链病、IgA型MM、先天性免疫缺陷症、免疫抑制疗法后、淋巴系统肿瘤和肾病综合征等[临床意义]四、免疫球蛋白E检测免疫球蛋白E为血清中最少的一种Ig,约占血清总Ig的0.002％它是一种亲细胞性抗体与变态反应、寄生虫感染及皮肤过敏等有关[参考值]ELISA法为0.1～0.9mg/L四、免疫球蛋白E检测[临床意义]⒈生理性变化婴儿脐血IgE水平很低，12岁时达成人水平⒉病理性变化⑴IgE增高:见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类风湿关节炎，以及各种过敏性疾病如异位性皮炎、过敏性哮喘、过敏性鼻炎、间质性肺炎、荨麻疹、嗜酸性粒细胞增多症、疱疹样皮炎、寄生虫感染等[临床意义]⑵IgE降低见于先天性或获得性丙种球蛋白缺乏症恶性肿瘤长期用免疫抑制剂共济失调性毛细血管扩张症等⑵IgE降低五、血清M蛋白检测M蛋白(Mprotein)或称单克隆免疫球蛋白它是一种单克隆B细胞增殖产生的、具有相同结构和电泳迁移率的、免疫球蛋白分子及其分子片段[参考值]蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法:正常人为阴性五、血清M蛋白检测[临床意义]

检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病见于

①多发性骨髓瘤：以IgG型最常见，其次为IgA型，IgD和IgE罕见，也有IgM型的报道

②巨球蛋白血症(Waldenstrom症):存在大量单克隆IgM[临床意义]

检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病见于

③重链病：出现Ig重链(γ、α和μ重链)④轻链病：出现单克隆游离轻链⑤半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段⑥7SIgG病：为恶性M蛋白病等。③重链病：出现Ig重链(γ、α和μ重链)第二节血清补体检测补体(complement,C)是一组具有酶原活性的糖蛋白它由传统途径的九种成分C1(Clq、C1r、C1s)～C9；旁路途径的三种成分及其衍生物,B、D、P、H、I等因子组成第二节血清补体检测补体(complement,C)是一组补体、体液因子或免疫细胞共同参与灭活病原体的免疫反应也参与破坏自身组织或自身细胞而造成的免疫损伤补体的检测可了解补体功能以及体内免疫反应、免疫损伤等状态。补体、体液因子或免疫细胞共同参与灭活病原体的免疫反应第二节血清补体检测本节重点及习题一、总补体溶血活性检测二、补体C1q检测三、补体C3检测四、补体C4检测五、补体旁路B因子检测第二节血清补体检测本节重点一、总补体溶血活性检测二、补体

一、总补体溶血活性检测总补体溶血活性(totalhemilyticcomplementactivity,CH50)以溶血素(抗体)致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)激活待测血清中的C1引起补体活化的连锁反应,在绵羊红细胞上形成多分子的聚合物,影响其膜表面的结构与功能一、总补体溶血活性检测最终导致绵羊红细胞溶解。溶血程度与补体量呈正相关一般以50％溶血作为检测终点(CH50),较为灵敏、准确[参考值]试管法为50～100kU/L最终导致绵羊红细胞溶解。溶血程度与补体量呈正相关[临床意义]主要反映补体传统途(C1～C9)活化的活性程度。①CH50增高见于急性炎症组织损伤某些恶性肿瘤.[临床意义]主要反映补体传统途(C1～C9)活化的活性程度。②CH50减低:更有意义见于各种免疫复合物性疾病如肾小球肾炎自身免疫性疾病(如SLE)感染性心内膜炎、病毒性肝炎和慢性肝病重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等②CH50减低:更有意义

二、补体C1q检测补体﹙comlement）C1q是构成补体C1的重要组分C1是:一个C1q分子、2个C1r分子和2个C1s分子构成的钙离子依赖性复合物目前常规检测Clq[参考值]ELISA法为0.18－0.19g/L二、补体C1q检测[临床意义]①Clq增加:见于骨髓炎、类风湿关节炎、痛风、过敏性紫癜等②Clq降低见于SLE和混合型结缔组织疾病重度营养不良、肾病综合征、重症联合免疫缺陷等[临床意义]

三、补体C3检测补体C3是一种由肝脏合成的β2-球蛋白由α和β两条多肽链组成C3在补体系统各成分中含量最多是传统途径和旁路途径被激活的关键物质[参考值]成人0.8～1.5g/L三、补体C3检测[临床意义]1生理性变化随年龄的增长而增长⒉病理性增高①增高:见于急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应等②减低:见于大多数急性肾小球肾炎、链球菌感染后肾炎、狼疮性肾炎患者。还见于活动性SLE和类风湿关节炎活动期、慢性活动性肝炎、肝硬化、肝坏死等因此检测C3对这些疾病诊断有价值[临床意义]

四、补体C4检测补体C4是一种多功能β1-球蛋白在补体传统途径活化中，C4被C1s水解为C4a、C4bC4a、C4b在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和毒素等方面发挥作用[参考值]0.20～0.6g/L四、补体C4检测[临床意义]①升高:见于各种传染病、急性风湿热、结节性动脉周围炎、皮肌炎、关节炎和组织损伤等②降低:见于自身免疫性肝炎、狼疮性肾炎、SLE、I型糖尿病、胰腺癌、多发性硬化症、类风湿关节炎、IgA性肾病、遗传性IgA缺乏症[临床意义]

五．补体旁路B因子检测补体旁路﹙factor﹚B因子是一种不耐热的β球蛋白,50℃30分钟即可失活。它可被D因子裂解为Ba、Bb两个片段Bb与C3b结合构成旁路途径的C3转化酶B因子是补体旁路活化途径中的一个重要成分,又称C3激活剂前体五．补体旁路B因子检测[参考值]0.10～0.4g／L[临床意义]同补体旁路途径溶血活性检测增高见于某些自身免疫性疾病、肾病综合征。慢性肾炎、恶性肿瘤减低见于肝病、急性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性贫血[参考值]0.10～0.4g／L第三节细胞免疫检测一T细胞亚群的检测﹙一﹚T细胞花结实验﹙二﹚T细胞转化实验﹙三﹚T细胞分化抗原测定二B细胞分化抗原检测三自然杀伤细胞免疫检测四细胞因子检测第三节细胞免疫检测一T细胞亚群类风湿因子一抗核抗体检测课件类风湿因子一抗核抗体检测课件

﹙一﹚T细胞花结形成试验T细胞表面有特意性绵羊红细胞﹙E﹚受体和T细胞识别受体﹙TCR﹚其中E受体曾广泛被用做鉴定和计数T细胞的标志。T细胞表面的E受体，可与绵羊红细胞结合成花结样细胞，称E玫瑰花形成实验﹙ERFT﹚此实验花结形成实验因其操作简便易行曾被广泛使用，但影响因素较多，因此逐渐被检测CD抗原方法所取代﹙一﹚T细胞花结形成试验﹙二﹚T细胞分化抗原测定T细胞表面有多种特意性抗原。WHO﹙1986年﹚统称其为白细胞分化抗原﹙clusterdifferentiation，CD﹚CD3＋代表总T细胞，CD3＋/CD4＋代表T辅助细胞﹙Th﹚，CD3＋/CD8＋代表T抑制细胞﹙Ts﹚等。应用这些细胞的单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后，再与荧光标记二抗﹙兔或羊抗鼠IgG﹚反应，在荧光显微镜下或流式细胞仪中计数CD阳性细胞的百分率﹙二﹚T细胞分化抗原测定[参考值]免疫荧光法﹙IFA﹚CD3＋为63.1％±10.8％CD3＋/CD4＋（Th﹚为42.8％±9.5％CD3＋/CD8＋（Ts﹚为19.6％±5.9％CD4CD8﹙Th/Ts﹚为2.2％±0.7％：流式细胞术CD3＋为61％～85％；CD3＋/CD4＋（Th﹚28％～58％；CD3＋/CD8＋（Ts﹚为19％～48％；CD4CD8﹙Th/Ts﹚为0.9％～2.0％；

[参考值][临床意义]①CD3＋降低：见于自身免疫性疾病。SLE类风湿关节炎②CD3＋/CD4＋（Th﹚降低：恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、爱滋病③CD3＋/CD8＋（Ts﹚降低见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病。④CD4/CD8CD8﹙Th/Ts﹚比值降低：见于爱滋病⑤监测器官移植排斥反应CD4/CD8﹙Th/Ts﹚比值增高⑥CD3＋CD4＋CD8＋较高且有CD1＋CD2＋CD5＋CD7＋增高则可能为T细胞型急性淋巴细胞性白血病[临床意义]二、B细胞分化抗原检测B细胞是在鸟类法氏囊﹙bursaofFabricius﹚或其同功器官﹙骨髓bonemarrow﹚内发育成熟的细胞，因此称为法氏囊或骨髓依赖的淋巴细胞，简称B细胞。B细胞受抗原刺激后可分化为产生抗体的浆细胞，B细胞是体内唯一能产生抗体﹙免疫球蛋白分子﹚的细胞二、B细胞分化抗原检测[参考值]流式细胞术：CD19+﹙11.74±3.37﹚％[临床意义]①升高：见于急性淋巴细胞白血病﹙B细胞型，且有SmIg、HLA-D表达﹚、慢性淋巴细胞白血病等②降低：见于无丙种球蛋白血症、使用化疗或免疫抑制剂后。[参考值]流式细胞术：CD19+﹙11.74±3.37﹚％第四节肿瘤标志物检测

肿瘤标志物(tumormarker)是由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。这类物质可反映细胞恶变各个阶段的表型及基因特征性。主要包括蛋白质类。糖类物质和酶类肿瘤标志物。附图第四节肿瘤标志物检测肿瘤标志物(tumormarke第三节肿瘤标志物检测一、蛋白质肿瘤标志物的检测(一)甲种胎儿球蛋白测定(二)癌胚抗原测定(三)组织多肽抗原测定(四)前列腺特异抗原测定第三节肿瘤标志物检测一、蛋白质肿瘤标志物的检测(一)甲种胎第四节肿瘤标志物检测一、蛋白质肿瘤标志物的检测二、糖脂肿瘤标志物检测本节重点及习题(五)鳞状上皮细胞癌抗原测定(三)糖链抗原19－9测定(四)癌抗原125测定第四节肿瘤标志物检测一、蛋白质肿瘤标志物的检测本节重点及习

一、蛋白质肿瘤标志物的检测(一)甲种胎儿球蛋白测定甲种胎儿球蛋白(alphafetoprotein,AFP)是在胎儿早期由肝脏合成的一种糖蛋白出生后合成受到抑制一、蛋白质肿瘤标志物的检测当干细胞或生殖腺胚胎组织发生恶性病变时，有关基因重新被激活使原来已丧失合成AFP能力的细胞重新开始合成,以致血中AFP含量明显升高因此血中AFP浓度检测对诊断干细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值当干细胞或生殖腺胚胎组织发生恶性病变时，有关基因重新被激活[参考价值]RIA或ELISA法为低于25μg/L[临床意义]1.原发性肝细胞性肝癌患者血清AFP增高，诊断阈值为超过300μg/L，增高率约为75％-80％；约有10％的原发性肝癌患者其AFP为阴性。[参考价值]2.生殖腺胚胎癌(睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤等)、胃癌或胰腺癌时，血中AFP含量也可升高。3.病毒性肝炎、肝硬化时AFP也有不同程度的升高(20-200μg/L)4.妊娠3-4个月、孕妇AFP开始升高；7-8个月达高峰，以后下降；但多低于300μg/L。2.生殖腺胚胎癌(睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤等)、胃癌或胰腺癌时(二)癌胚抗原测定癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)是一种富含多糖的蛋白复合物胎儿早期的消化管及某些组织均有合成CEA的能力，但孕六个月以后含量逐渐减少，出生后含量极低检测它对肿瘤的诊断、预后、复发判断有意义(二)癌胚抗原测定[参考值]ELISA法和RIA法为＜15μg/L[临床意义]1.CEA明显增高见于、胰腺癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等患者。[参考值]ELISA法和RIA法为＜15μg/L2.动态观察一般病情好转时，CEA浓度下降，病情加重时可升高3.结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病、肺气肿及支气管哮喘等也常见CEA轻度升高4.96％～97％非吸烟健康人血清CEA浓度＜2.5μg/L，大量吸烟者中有20％～40％的人CEA＞2.5μg/L，少数人大于5.0μg/L。2.动态观察一般病情好转时，CEA浓度下降，病情加重时可升高(三)组织多肽抗原测定组织多肽抗原(tissuepolypeptideantigen,TPA)是存在于胎盘和大部分肿瘤组织细胞膜和细胞质中的一种单链多肽。在恶性肿瘤患者血清中的检出率高达70％以上但它的增高与肿瘤发生部位和组织类型无相关性在观察疗效上则有较高的敏感性[参考值]ELISA法为＜130U/L(三)组织多肽抗原测定[临床意义]1.恶性肿瘤患者血清TPA水平可显著升高。2.经治疗好转后，TPA水平降低；若TPA再次升高，提示有肿瘤复发。3.TPA和CEA同时检测可有利于恶性与非恶性乳腺病的鉴别诊断。4.急性肝炎、胰腺炎、肺炎、妊娠后3个月都可升高。[临床意义]

(四)前列腺特异抗原测定前列腺特异抗原(prostatespecificantigen,PSA)是一种由前列腺分泌的单链糖蛋白,它存在于前列腺管道的上皮细胞中。在前列腺癌时可见PSA血清水平明显升高(四)前列腺特异抗原测定今年发现血清总PSA(T-PSA)80％以结合形式存在,称复合PSA(c-PSA)20％的以游离PSA形式存在(F-PSA)其比值对诊断更有特异和准确性今年发现血清总PSA(T-PSA)[参考值]RIA法和（酶联免疫印迹技术）CLIA法：T-PSA＜4.0μg/L，F-PSA<0.8μg/LF/T比值＞0.25[临床意义]1.前列腺癌时60％－90％患者血清PSA水平明显升高；当行外科切除术后，90％患者血清PSA水平明显降低[参考值]RIA法和（酶联免疫印迹技术）CLIA法：2.若见PSA水平升高，即有转移或复发的可能3.良性前列腺瘤、前列腺肥大或急性前列腺炎时，约有14％的患者血清PSA水平升高，此时应注意鉴别2.若见PSA水平升高，即有转移或复发的可能(五)鳞状上皮细胞癌抗原测定鳞状上皮细胞抗原(squamuscellcarcinomaantigen,SCC)是肿瘤相关抗原TA-4的亚型，是一种糖蛋白[参考值]RIA和CLIA法为≤1.5μg/L。(五)鳞状上皮细胞癌抗原测定[临床意义]1.血清中SCC水平升高，可见于83％的宫颈癌、25％-75％的肺鳞状细胞癌、30％Ⅰ期食管癌、89％的Ⅲ期食管癌；2.也见于卵巢癌、子宫癌和颈部鳞状上皮细胞癌。3.临床上用于检测上述恶性肿瘤的治疗效果、复发、转移或评价预后。[临床意义]二、糖脂肿瘤标志物检测(三)糖链抗原19－9测定糖链抗原19－9(carbohydrateantigen19-9,CA19-9)是一种糖蛋白。胚胎期分布于胎儿的胰腺。肝胆和肠等组织；在成人的胰、胆等部位也有少量存在。[参考值]固相放射免疫分析(IRMA)法和ELISA法：健康人血清CA19-93.7万U/L二、糖脂肿瘤标志物检测[临床意义]1.胰腺癌、肝胆和胃肠道疾病时血中CA19-9的水平可明显升高。其阳性率胰腺癌为85％－95％胆囊癌和胆管癌为85％左右胃癌、结肠癌为40％直肠癌为30％－50％但无早期诊断价值,对早期病人的敏感度仅为30％[临床意义]2.连续检测对病情进展、手术疗效、预后估计及复发诊断有重要价值。3.急性胰腺炎、胆汁淤积型胆管炎、胆石症、急性肝炎、肝硬化等，血清CA19-9也可出现不同程度的升高。4.结合CEA检测,对胃癌诊断符合率可达85％2.连续检测对病情进展、手术疗效、预后估计及复发诊断有重要价

(四)癌抗原125测定癌抗原125(cancerantigen125,CA125)为一种糖蛋白性肿瘤相关抗原,存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内。当患有上皮性卵巢癌和子宫内膜癌时,病人血清CA125水平可明显升高。[参考值]＜3.5万U/L(四)癌抗原125测定[临床意义]1.卵巢癌病人血清CA125水平明显升高,其阳性率高达60％-90％,故对诊断卵巢癌有较大临床价值,尤其对观察治疗效果和判断复发较为灵敏。[临床意义]2.宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌、胆道癌、肝癌、胃癌、结肠癌、肺癌等也有一定的阳性反应。3.3％～6％的良性卵巢瘤、子宫肌瘤病人血清CA125有时也会明显升高,但多数不超过10万U/L。4.肝硬化失代偿期血清CA125明显升高。2.宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌、胆道癌、肝癌、胃癌、结肠癌、肺癌第四节自身抗体检测

某些原因削弱或破坏健康人的自身免疫耐受(autoimmunetolerance)，免疫系统就会对自身组织或成分产生免疫应答，称为自身免疫(autoimmunity)。由于自身免疫而产生的疾病称为自身免疫病(autoimmunedisease,AID)。按自身抗原分布的范围可分器官特异性和非器官特异性。诊断自身免疫病的重要方法是作自身抗体免疫检测。第四节自身抗体检测某些原因削弱或破坏健康人的自身免疫耐第四节自身抗体检测二、抗核抗体检测本节重点及习题一、类风湿因子(一)抗核抗体检测(二)抗DNA抗体测定第四节自身抗体检测本节重点及习题一、类风湿因子(一)抗核抗一、类风湿因子类风湿因子(rheumatoidfactor,RF)是变性lgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。它有IgM型，也有IgG、IgA、lgD和IgE型。用乳胶凝集法测出的主要是IgM型；速率法敏感但不能分类型。[参考值]乳胶凝集法、血清稀释度低于1:10速率比值法＜30U/L。一、类风湿因子[临床意义]类风湿性疾病时，RF的阳性率可高达70％－90％，类风湿关节炎的阳性率为70％。IgG型:与患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状有关IgM型与IgA型的效价与病情、骨质破坏有关[临床意义]其他自身免疫性疾病，如多发性肌炎、硬皮病、干燥综合征、SLE、自身免疫性溶血、慢性活动性肝炎等也见RF阳性。某些感染性疾病，如传染性单核细胞增多症、结节病、感染性心内膜炎等也多呈现阳性反应。故本试验的特异性不高，应予鉴别。其他自身免疫性疾病，如多发性肌炎、硬皮病、干燥综合征、SLE

二、抗核抗体检测

(一)抗核抗体检测

抗核抗体检测(antinuclearantibody,ANA)是指抗细胞核成分［脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA等］的自身抗体的总称

ANA的性质主要是IgG,也有IgM、IgA。这种抗体无器官和种族的特异性二、抗核抗体检测◎免疫荧光法以鼠肝细胞核作抗原时,该抗体可与之结合,再加入荧光标记抗人Ig后,胞核区发出黄绿色荧光而胞浆区不发荧光。根据细胞核染荧光的图像可分析为均质型、边缘型、颗粒型和核仁型等四型。◎[参考值](间接荧光抗体试验)IFA法为阴性,血清滴度＞1:40为阳性。◎免疫荧光法以鼠肝细胞核作抗原时,该抗体可与之结合,再加入荧[临床意义]1.ANA阳性⑴最多见于未治疗的SLE,阳性率达80％～100％;活动期SLE几乎100％阳性。经皮质激素治疗后,阳性率可降低⑵药物性狼疮(100％)⑶混合性结缔组织病(10％)⑷全身性硬皮病(85％-95％)[临床意义]⑸多发性肌炎(3％-