临床标本细菌检验课件

六原则避免杂菌污染不同期不同标本用抗生素以前采集病变明显部位运送注意保存标本必须新鲜一、临床标本的采集和送检第一节概述六原则避免杂菌污染不同期不同标本用抗生素以前采集病变明显部位认真核对：了解诊断：联系临床：（一）临床标本的采集：肠道、痰、口咽含涑液、血液、脑脊液、骨髓、粪便、尿液、胸腹水等、认真核对：（一）临床标本的采集：肠道、痰、口咽含涑液、血液、√1.细菌学检验单√1.细菌学检验单√√2.标本容器：无菌容器3.采集时间、部位：4.无菌操作：对无菌或有菌标本不同处理（二）临床标本的送检1.送检时间、方法：及时送检、低温或保温保存2.常规性细菌培养标本：应保存4摄氏度3.厌氧菌培养的标本：厌氧保存4.低温敏感的细菌（奈瑟菌，流感嗜血杆菌）应立即处理5.任何临床标本。应专人运送、注意防护6.了解标本的来源和临床信息2.标本容器：无菌容器（三）临床标本的处理原则：立即接种、适宜培养1.组织：切碎2.体液：离心3.棉拭子：取多个标本4.粪便：先观察，再取材5.痰：先观察，再取材6.厌氧培养标本：早接种，厌氧培养7.血液：立即接种（三）临床标本的处理原则：立即接种、适宜培养二、细菌学检验的基本程序（一）培养基的选择原则（二）细菌检验的基本流程（三）诊断试验的选择二、细菌学检验的基本程序（一）培养基的选择原则选择合适的培基养和培养方法选择合适的培基养和培养方法临床标本的检验程序标本直接检查分离培养：选择培养基BA，SS，MAC可疑菌落药物敏感试验鉴定生化，血清学鉴定，补充试验临床标本的检验程序标本直接检查分离培养：选择培养基BA，S诊断试验选择原则1.选择最有鉴定价值的试验2.选择简易、快速、方便的试验3.综合考虑试验的敏感性和特异性诊断试验选择原则1.选择最有鉴定价值的试验三、细菌学鉴定的方法1.细菌的形态学检验2.生物化学试验3.血清学试验4.抑菌试验5.分子生物学检测6.噬菌体分型试验7.动物实验三、细菌学鉴定的方法1.细菌的形态学检验四、细菌学检验报告原则1.初步报告2.细菌鉴定3.药敏试验四、细菌学检验报告原则1.初步报告（一）血液中常见病原体确诊菌血症和败血症金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎铜绿、金葡引起烧伤后败血症（一）血液中常见病原体确诊菌血症和败血症第二节临床常见标本的细菌学检验（一）血液中常见病原体（见表18-2）确诊菌血症和败血症金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎铜绿、金葡引起烧伤后败血症一、血液及骨髓标本的细菌学检验第二节临床常见标本的细菌学检验（一）血液中常见病原体（见（三）细菌学检验1.检验程序：（三）细菌学检验1.检验程序：2.检验方法普通培养：分别做厌氧和需氧培养阳性表现：均匀浑浊，革兰阴性菌浑浊有绿色，肺炎链球菌表面有菌膜有绿色荧光，铜绿假单胞菌下面沉淀，链球菌溶血，溶血性链球菌浑浊有胶胨，葡萄球菌灰白色菌膜，枯草芽孢杆菌涂片革兰染色镜检，直接药敏、分离培养报告临床阴性结果7天报告

2.检验方法普通培养：分别做厌氧和需氧培养特殊培养脑膜炎奈瑟菌培养：37℃加5-10%CO2

伤寒或其它沙门菌：接种葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤草绿色链球菌：胰酶酪蛋白大豆肉汤，同时做需要、CO2和厌氧培养L型细菌：高渗液体培养基，“油煎蛋”菌落厌氧培养：真菌培养：特殊培养二、脑脊液标本的细菌学检验（二）标本采集医师以最严格的无菌技术做腰椎穿刺。气温较低时，应保温送检或床边接种后，立即孵育（一）脑脊液中常见病原体（表18-3）二、脑脊液标本的细菌学检验（二）标本采集（一）脑脊液中常见病（三）细菌学检验2.检验方法

-脑脊液外观：结核性膜炎常为毛玻璃样。其它细菌引起化脓性脑膜炎，脑脊液都明显浑浊。

-涂片镜检：混浊或脓样脑脊液可直接涂片,革兰染色，镜检。无色透明的脑脊液,应以3000r/min离心10-15分钟,取沉淀物涂片,革兰染色镜检，根据染色反应及形态特征，可初步提出感染细菌的种类。1.检验程序：见表18-3注意增菌培养（三）细菌学检验2.检验方法1.检验程序：见表18-3注意增（3）分离培养用接种环挑取混浊脑脊液或离心沉淀物，分别接种于BA或CA平皿上，置35℃5%CO2环境中培养18-24小时，检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色后镜检的特征，初步判断细菌种类，并进一步做生化鉴定及血清学检查加以鉴定，并作出报告。（3）分离培养用接种环挑取混浊脑脊液或离心沉淀物，分别接种于3.结果报告细菌性脑膜炎的病原学诊断鉴别诊断病毒性脑膜炎3.结果报告细菌性脑膜炎的病原学诊断（一）尿液标本中常见的细菌革兰阳性细菌金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、酿脓链球菌、肠球菌、厌氧链球菌、结核分支杆菌革兰阴性细菌

淋病奈瑟菌大肠埃希菌、变形杆菌、伤寒及副伤寒沙门菌、肺炎克雷白菌、产气肠杆菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、沙雷菌、厌氧菌其它支原体、衣原体、念珠菌三、尿液的标本的细菌学检验（一）尿液标本中常见的细菌革兰阳性细菌三、尿液的标本的细菌（二）标本采集标本采集：一般培养采用清洁中段尿。采样前，用肥皂水或清水清洗外阴，排出尿液前段需丢弃，中段和后段尿液10-20ml盛装于无菌的容器。肾盂尿采集法膀胱穿刺尿采集法结核菌涂片或培养用24小时尿取沉淀。

（二）标本采集标本采集：(三）细菌学检验1.检验程序：见图18-4(三）细菌学检验1.检验程序：见图18-42.检验方法：直接镜检

-离心沉淀涂片革兰染色

-淋球菌镜检假丝酵母镜检结核分枝杆菌镜检2.检验方法：直接镜检检测方法和报告分离培养

-普通培养：

-淋球菌培养：

-厌氧菌培养：

-真菌培养：检测方法和报告分离培养检测方法和报告菌落计数倾注平皿法：尿液稀释成1：10、1：100、1：1000，取此液1ml放入直径9cm灭菌平皿内，同时加入已熔化并冷至50℃的培养基与尿混合，待凝固后置35℃培养。定量接种环涂抹法：使用1ul的定量接种环沾满尿液，在分离培养基分离培养。生长的菌落数乘以1000，等于每毫升尿中的菌数。报告：革兰阴性菌>105cfu/ml，

革兰阳性菌>104cfu/ml有临床意义阴性报告为“48h培养无菌生长”检测方法和报告菌落计数四粪便标本的细菌学检验（一）粪便中常见病原体正常人的肠道内存在大量正常菌群粪便中常见病原体见表18-5四粪便标本的细菌学检验（一）粪便中常见病原体（二）标本的采集自然排便法：挑取脓血、黏液的粪便2-3g于无菌的纸盒中，或放置于增菌液中送检直肠肛拭子法：直接送检或放入运送培养基中送检（二）标本的采集自然排便法：挑取脓血、黏液的粪便2-3g于无（三）细菌学检验1.检验程序（三）细菌学检验1.检验程序2.检验方法针对特殊细菌，如霍乱弧菌、结核、真菌等

-霍乱弧菌：鱼群样排列的革兰阴性菌，动力阳性

-葡萄球菌：金葡菌引起的假膜性肠炎

-结核分枝杆菌：

-艰难梭菌：革兰阳性粗大杆菌，无荚膜、有芽孢

-空肠弯曲杆菌：细小、弧形、S形或螺旋形革兰阴性（1）直接镜检2.检验方法针对特殊细菌，如霍乱弧菌、结核、真菌等（1）直接

（2）分离培养

-沙门菌及志贺菌：增菌培养或直接接种于SS和MAC、CB，37℃18-24h培养，挑取可疑菌落接种KIA/MIU，进一步做生化和血清凝集试验

-霍乱弧菌：碱性蛋白胨水37℃增菌6h，挑取菌膜接种TCBS平板，37℃培养16-20h，挑选可疑菌落氧化酶阳性，多价“O”诊断血清凝集试验

-大肠杆菌培养：挑取脓血、黏液的粪便接种于MAC或EMB，37℃培养18-24h，挑取可疑菌落接种KIA/MIU，进一步做生化和血清凝集试验

-金黄色葡萄球菌培养：接种于高盐甘露醇琼脂，37℃培养18-24小时

-副溶血弧菌培养：增菌后接种与弧菌选择性培养基与SS培养基。

（2）分离培养-沙门菌及志贺菌：增菌培养或直接接种于S3.结果报告（1）涂片镜检（2）分离培养检测引起腹泻、食物中毒的肠道菌致病菌检测肠道正常菌群，预防菌群失调（3）阴性结果：未检出**菌3.结果报告（1）涂片镜检五、（痰）呼吸道标本（一）痰液中常见病原体（见表18-6）呼吸道标本有正常菌群用于检测呼吸系统，鼻咽部的感染。与临床联系，找到病原菌五、（痰）呼吸道标本（一）痰液中常见病原体（见表18-6）（二）标本采集：咽拭子采集法：自然咯痰法：小儿取痰法：气管镜采集法：胃内采痰法：气管穿刺法：（二）标本采集：（三）细菌学检验1.检验程序（三）细菌学检验1.检验程序2.检验方法

显微镜检查直接镜检：观察痰液质量染色镜检：观察细菌或分枝杆菌2.检验方法显微镜检查分离培养培养前处理：均质化：净化：普通培养：接种于BA，10%CO237℃培养18-24小时，挑取可疑菌落涂片、染色，进一步做生化鉴定。结核杆菌培养：分离培养培养前处理：分离培养厌氧菌培养：接种两个BA，同时做厌氧与需氧培养真菌培养：接种SA，37℃或22℃培养48小时白喉棒状杆菌：接种亚碲酸盐培养基上，37℃培养48小时，典型菌落做生化、毒力试验百日咳鲍特菌：接种BG培养基，37℃培养2-5天，挑取可疑菌落涂片、血清学试验分离培养厌氧菌培养：接种两个BA，同时做厌氧与需氧培养六、脓液及创伤分泌物（二）标本采集封闭性脓肿：注射器抽取开放性脓肿：烧伤创面：（一）脓液中常见病原体见表18-7六、脓液及创伤分泌物（二）标本采集（一）脓液中常见病原体见表（三）细菌学检验2.检验方法（1）涂片镜检：革兰染色镜检放线菌挑取硫磺颗粒镜检1.检验程序（见表18-7）（三）细菌学检验2.检验方法1.检验程序（见表18-7）（2）分离培养-普通细菌培养：分别接种于BA或EMB平皿上，置37℃培养18-24小时，检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色镜检特征，初步判断细菌种类，并进一步做生化鉴定-厌氧培养：疑似炭疽芽孢杆菌：接种BA，或增菌后80℃20分钟加热后移种BA，37℃培养18-24小时，挑取可疑菌落染色镜检，并进一步做生化试验、动物试验。（2）分离培养-普通细菌培养：分别接种于BA或EMB3.结果报告（1）初步报告（2）分离培养鉴定（3）48小时无细菌生长3.结果报告（1）初步报告谢谢！

谢谢！谢谢！谢谢！六原则避免杂菌污染不同期不同标本用抗生素以前采集病变明显部位运送注意保存标本必须新鲜一、临床标本的采集和送检第一节概述六原则避免杂菌污染不同期不同标本用抗生素以前采集病变明显部位认真核对：了解诊断：联系临床：（一）临床标本的采集：肠道、痰、口咽含涑液、血液、脑脊液、骨髓、粪便、尿液、胸腹水等、认真核对：（一）临床标本的采集：肠道、痰、口咽含涑液、血液、√1.细菌学检验单√1.细菌学检验单√√2.标本容器：无菌容器3.采集时间、部位：4.无菌操作：对无菌或有菌标本不同处理（二）临床标本的送检1.送检时间、方法：及时送检、低温或保温保存2.常规性细菌培养标本：应保存4摄氏度3.厌氧菌培养的标本：厌氧保存4.低温敏感的细菌（奈瑟菌，流感嗜血杆菌）应立即处理5.任何临床标本。应专人运送、注意防护6.了解标本的来源和临床信息2.标本容器：无菌容器（三）临床标本的处理原则：立即接种、适宜培养1.组织：切碎2.体液：离心3.棉拭子：取多个标本4.粪便：先观察，再取材5.痰：先观察，再取材6.厌氧培养标本：早接种，厌氧培养7.血液：立即接种（三）临床标本的处理原则：立即接种、适宜培养二、细菌学检验的基本程序（一）培养基的选择原则（二）细菌检验的基本流程（三）诊断试验的选择二、细菌学检验的基本程序（一）培养基的选择原则选择合适的培基养和培养方法选择合适的培基养和培养方法临床标本的检验程序标本直接检查分离培养：选择培养基BA，SS，MAC可疑菌落药物敏感试验鉴定生化，血清学鉴定，补充试验临床标本的检验程序标本直接检查分离培养：选择培养基BA，S诊断试验选择原则1.选择最有鉴定价值的试验2.选择简易、快速、方便的试验3.综合考虑试验的敏感性和特异性诊断试验选择原则1.选择最有鉴定价值的试验三、细菌学鉴定的方法1.细菌的形态学检验2.生物化学试验3.血清学试验4.抑菌试验5.分子生物学检测6.噬菌体分型试验7.动物实验三、细菌学鉴定的方法1.细菌的形态学检验四、细菌学检验报告原则1.初步报告2.细菌鉴定3.药敏试验四、细菌学检验报告原则1.初步报告（一）血液中常见病原体确诊菌血症和败血症金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎铜绿、金葡引起烧伤后败血症（一）血液中常见病原体确诊菌血症和败血症第二节临床常见标本的细菌学检验（一）血液中常见病原体（见表18-2）确诊菌血症和败血症金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎铜绿、金葡引起烧伤后败血症一、血液及骨髓标本的细菌学检验第二节临床常见标本的细菌学检验（一）血液中常见病原体（见（三）细菌学检验1.检验程序：（三）细菌学检验1.检验程序：2.检验方法普通培养：分别做厌氧和需氧培养阳性表现：均匀浑浊，革兰阴性菌浑浊有绿色，肺炎链球菌表面有菌膜有绿色荧光，铜绿假单胞菌下面沉淀，链球菌溶血，溶血性链球菌浑浊有胶胨，葡萄球菌灰白色菌膜，枯草芽孢杆菌涂片革兰染色镜检，直接药敏、分离培养报告临床阴性结果7天报告

2.检验方法普通培养：分别做厌氧和需氧培养特殊培养脑膜炎奈瑟菌培养：37℃加5-10%CO2

伤寒或其它沙门菌：接种葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤草绿色链球菌：胰酶酪蛋白大豆肉汤，同时做需要、CO2和厌氧培养L型细菌：高渗液体培养基，“油煎蛋”菌落厌氧培养：真菌培养：特殊培养二、脑脊液标本的细菌学检验（二）标本采集医师以最严格的无菌技术做腰椎穿刺。气温较低时，应保温送检或床边接种后，立即孵育（一）脑脊液中常见病原体（表18-3）二、脑脊液标本的细菌学检验（二）标本采集（一）脑脊液中常见病（三）细菌学检验2.检验方法

-脑脊液外观：结核性膜炎常为毛玻璃样。其它细菌引起化脓性脑膜炎，脑脊液都明显浑浊。

-涂片镜检：混浊或脓样脑脊液可直接涂片,革兰染色，镜检。无色透明的脑脊液,应以3000r/min离心10-15分钟,取沉淀物涂片,革兰染色镜检，根据染色反应及形态特征，可初步提出感染细菌的种类。1.检验程序：见表18-3注意增菌培养（三）细菌学检验2.检验方法1.检验程序：见表18-3注意增（3）分离培养用接种环挑取混浊脑脊液或离心沉淀物，分别接种于BA或CA平皿上，置35℃5%CO2环境中培养18-24小时，检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色后镜检的特征，初步判断细菌种类，并进一步做生化鉴定及血清学检查加以鉴定，并作出报告。（3）分离培养用接种环挑取混浊脑脊液或离心沉淀物，分别接种于3.结果报告细菌性脑膜炎的病原学诊断鉴别诊断病毒性脑膜炎3.结果报告细菌性脑膜炎的病原学诊断（一）尿液标本中常见的细菌革兰阳性细菌金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、酿脓链球菌、肠球菌、厌氧链球菌、结核分支杆菌革兰阴性细菌

淋病奈瑟菌大肠埃希菌、变形杆菌、伤寒及副伤寒沙门菌、肺炎克雷白菌、产气肠杆菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、沙雷菌、厌氧菌其它支原体、衣原体、念珠菌三、尿液的标本的细菌学检验（一）尿液标本中常见的细菌革兰阳性细菌三、尿液的标本的细菌（二）标本采集标本采集：一般培养采用清洁中段尿。采样前，用肥皂水或清水清洗外阴，排出尿液前段需丢弃，中段和后段尿液10-20ml盛装于无菌的容器。肾盂尿采集法膀胱穿刺尿采集法结核菌涂片或培养用24小时尿取沉淀。

（二）标本采集标本采集：(三）细菌学检验1.检验程序：见图18-4(三）细菌学检验1.检验程序：见图18-42.检验方法：直接镜检

-离心沉淀涂片革兰染色

-淋球菌镜检假丝酵母镜检结核分枝杆菌镜检2.检验方法：直接镜检检测方法和报告分离培养

-普通培养：

-淋球菌培养：

-厌氧菌培养：

-真菌培养：检测方法和报告分离培养检测方法和报告菌落计数倾注平皿法：尿液稀释成1：10、1：100、1：1000，取此液1ml放入直径9cm灭菌平皿内，同时加入已熔化并冷至50℃的培养基与尿混合，待凝固后置35℃培养。定量接种环涂抹法：使用1ul的定量接种环沾满尿液，在分离培养基分离培养。生长的菌落数乘以1000，等于每毫升尿中的菌数。报告：革兰阴性菌>105cfu/ml，

革兰阳性菌>104cfu/ml有临床意义阴性报告为“48h培养无菌生长”检测方法和报告菌落计数四粪便标本的细菌学检验（一）粪便中常见病原体正常人的肠道内存在大量正常菌群粪便中常见病原体见表18-5四粪便标本的细菌学检验（一）粪便中常见病原体（二）标本的采集自然排便法：挑取脓血、黏液的粪便2-3g于无菌的纸盒中，或放置于增菌液中送检直肠肛拭子法：直接送检或放入运送培养基中送检（二）标本的采集自然排便法：挑取脓血、黏液的粪便2-3g于无（三）细菌学检验1.检验程序（三）细菌学检验1.检验程序2.检验方法针对特殊细菌，如霍乱弧菌、结核、真菌等

-霍乱弧菌：鱼群样排列的革兰阴性菌，动力阳性

-葡萄球菌：金葡菌引起的假膜性肠炎

-结核分枝杆菌：

-艰难梭菌：革兰阳性粗大杆菌，无荚膜、有芽孢

-空肠弯曲杆菌：细小、弧形、S形或螺旋形革兰阴性（1）直接镜检2.检验方法针对特殊细菌，如霍乱弧菌、结核、真菌等（1）直接

（2）分离培养

-沙门菌及志贺菌：增菌培养或直接接种于SS和MAC、CB，37℃18-24h培养，挑取可疑菌落接种KIA/MIU，进一步做生化和血清凝集试验

-霍乱弧菌：碱性蛋白胨水37℃增菌6h，挑取菌膜接种TCBS平板，37℃培养16-20h，挑选可疑菌落氧化酶阳性，多价“O”诊断血清凝集试验

-大肠杆菌培养：挑取脓血、黏液的粪便接种于MAC或EMB，37℃培养18-24h，挑取可疑菌落接种KIA/MIU，进一步做生化和血清凝集试验

-金黄色葡萄球菌培养：接种于高盐甘露醇琼脂，37℃培养18-24小时

-副溶血弧菌培养：增菌后接种与弧菌选择性培养基与SS培养基。

（2）分离培养-沙门菌及志贺菌：增菌培养或直接接种于S3.结果报告（1）涂片镜检（2）分离培养检测引起腹泻、食物中毒的肠道菌致病菌检测肠道正常菌群，预防菌群失调（3）阴性结果：未检出**菌3.结果报告（1）涂片镜检五、（痰）呼吸道标本（一）痰液中常见病原体（见表18-6）呼吸道标本有正常菌群用于检测呼吸系统，鼻咽部的感染。与临床联系，找到病原菌五、（痰）呼吸道标本（一）痰液中常见病原体（见表18-6