SN∕T 4544.2-2022 商品化试剂盒检测方法 菌落总数 方法二

. S700SC3. 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准T2商品化试剂盒检测方菌落总数 方法二Ⅱ4发布 1实施中华人民共和国海关总署 发布T2前 言本文件按照标准化工作导则 第1部分标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件是商品化试剂盒检测方法 菌落总数的第2部分T4已经发布了以下部分:—商品化试剂盒检测方法 菌落总数 方法一;—商品化试剂盒检测方法 菌落总数 方法二。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位中华人民共和国福州海关。本文件主要起草人郑晶林杰郭菁肖颖陈彬董健柯璐徐珊张温玲戴晓丽。ⅠT2商品化试剂盒检测方菌落总数 方法二范围本文件规定了食品中两种M菌落总数测试片MMe和M-Md的检测方法。本文件适用于食品中菌落总数的测定。该方法不适于米粉等0倍稀释后流动性不强的食品不适于0倍稀释后色度较深的食品。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定9实验室生物安全通用要求5实验室质量控制规范 食品微生物检5商品化食品检测试剂盒评价方法6食品微生物检验方法确认技术规范术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。生物安全措施为了保护实验室人员的安全和防止污染应由具备资格的工作人员检测菌落总数。所有培养物和废弃物应按照9和5中的有关规定执行。技术概要菌落总数测试片MM是一种预先制备好的培养基系统其培养基为标准的平板计数琼脂培养基并且含菌落指示剂菌落在测试片上呈红色这样可增强菌落计数效果。菌落总数测试片MMd是一种预先制备好的培养基系统包含营养成分冷水可溶性凝胶及双联指示剂技术菌落在测试片上呈红色和蓝色h即可对食品基质进行菌落计数。1T2仪器和设备除微生物实验室常规灭菌和培养设备外其他设备和材料如下:1恒温培养箱61℃01℃。2冰箱2℃5℃。3恒温水浴箱61℃天平感量为。均质器。振荡器。: (

( ) 。无菌吸管1L具1L刻度0L具L刻度

或微量移液器及吸头无菌锥形瓶容量为00。无菌培养皿直径为0。计或比色管或精密试纸。放大镜或和菌落计数器。压板。试剂和材料菌落总数测试片本文件使用的测试片MMce和MMde由M有限公司生产参考5和按商品化食品检测试剂盒评价程序进行评价评价结果参见附录A和附录。磷酸盐缓冲液按附录C中。无菌生理盐水按附录C中。1L氢氧化钠称取gH溶于0L蒸馏水中。1L盐酸移取0L浓盐酸用蒸馏水稀释至0。检测程序菌落总数测试片检测程序见图。2T2图1菌落总数测试片检测方法程序操作步骤样品制备和稀释按照2的方法制备0样品匀液。无菌操作调节该样品匀液的H为,酸性样液用1L氢氧化钠调节碱性样液用1L盐酸调节或根据产品标准规定的酸碱溶液来调节值。按照2方法吸取0样品匀液接种

制备0倍系列稀释样品匀液。根据对样品污染情况的估计选择2个个适宜稀释度样品匀液进行检验根据需要选择Me测试片或MMde测试片。将菌落总数测试片置于平坦表面处揭开上层膜吸取某一稀释度的1样品匀液垂直滴加在测试片的中央处然后将上层膜轻轻放下将压板放置在上层膜中央处轻轻的压下使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上切勿扭转压板。拿起压板静置至少1n以使培养基凝固。每个稀释度接种两张测试片。同时分别吸取1空白稀释液加入两张测试片内作空白对照。3T2培养MM培养将测试片的透明面朝上水平置于培养箱内可堆叠至0片。在6℃1℃条件下培养8±h水产品01℃培养。MMd培养在61℃条件下培养如有产品标准等特殊要求则按相应的标准或要求进行。菌落计数MM计数到培养时间应立即计数选取菌落数在00U之间的测试片计数菌落总数记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位表示。计数所有红色菌落。如果无法确定红点是菌落还是红色食品基质可以延长培养h后观察。如果红点变大则确定是菌落如果红点未变大则确定是基质。当细菌浓度很高时整个测试片会变成红色将结果记录为多不可计o。MMe有0个等分格当菌落数量过多计数困难时可选择几个有代表性菌落的小方格计算平均菌落数再乘以相应倍数即可得到整个测试片上的估算菌落数。一些微生物会液化凝胶造成局部扩散或菌落模糊的现象。如果液化现象干扰计数可以计数未液化的面积来估算菌落浓度。MMd计数到培养时间应立即计数选取菌落数在00U之间的测试片计数菌落总数记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位s表示。计数所有蓝色和红色菌落。如果无法确定红点是菌落还是红色食品基质可以延长培养h后观察。如果红点变大则确定是菌落如果红点未变大则确定是基质。当细菌浓度很高时整个测试片会变成红色或蓝色将结果记录为多不可计s。MMde有0个等分格当菌落数量过多计数困难时可选择几个有代表性菌落的小方格计算平均菌落数再乘以相应倍数即可得到整个测试片上的估算菌落数。一些微生物会液化凝胶造成局部扩散或菌落模糊的现象。如果液化现象干扰计数可以计数未液化的面积来估算菌落浓度。结果和报告菌落总数的计算方法和菌落总数报告的规则按照。4T2附 录A资料性)菌落总数测试片MM评价结果线性和准确度见表1和表。表1测试片方法和参考方法的线性关系食品种类食品基质线性方程相关系数2)T检验值肉类冻鸡肉847熟鸡肉852鱼类和海产品丁香鱼592旗鱼松960冻带鱼354水果和蔬菜制品萝卜丝901沙拉739青豆892乳制品纯牛奶702婴儿奶粉478全脂奶粉186杂品馅饼192面条523咖喱粉405绿茶42051表25类食品的线性关系食品种类g值范围线性方程相关系数2)肉类696鱼类和海产品582水果和蔬菜制品644乳制品071杂品625所有食品54注y为测试片法菌落数的对数值x为参考法菌落数的对数值。5T2耐变性选用两个污染水平的奶粉样品对培养温度和培养时间两个变量进行耐变性试验经验证培养温度选择5℃和7℃培养时间选择h和对检测结果的标准偏差与在重复性条件下得到的标准偏差没有明显差别表明说明书中对培养温度为61℃和培养时间为h的耐变性范围不影响检测结果。见表。表3耐变性试验结果实验条件菌株添加水平测试结果平均值Sr123457℃h高浓度6063039低浓度00000437℃h高浓度9249974低浓度00622255℃h高浓度6564658低浓度04826275℃h高浓度0494654低浓度4446651批间变异取3个不同批号的测试片对两个污染浓度奶粉样品进行批间变异实验3个不同批号测试片测试结果的标准偏差与在重复性条件下得到的标准偏差没有明显差别说明不同批号产品无明显差异。见表。表4批间变异试验结果菌株浓度批号测定结果nSrRSD12345高浓度U08888810B48260639G64266523总平均值7总Sr2低浓度U18666358B28925931G35594953总平均值1总Sr46实验室间验证试验

T28家实验室对高中低3个接种水平样品的5个平行测试结果室间重复性和再现性分析表明方法稳定可靠。见表。表5实验室间验证试验结果添加水平实验室数参考法测试片法rRrR高85831中82832低830997T2附 录B资料性)菌落总数测试片MMd评价结果线性和准确度见表1和表。表1测试片方法和参考方法的线性关系食品种类食品基质线性方程相关系数2)T检验值肉类糟鸭855冻猪肉080卤牛肉628鱼类和海产品鱿鱼丝994明虾084鲳鱼611水果和蔬菜制品开心果671葡萄汁796沙拉083乳制品纯牛奶761奶粉276圣代261杂品茶叶018五谷粉630鸡精95851表25类食品的线性关系食品种类g值范围线性方程相关系数2)肉制品036鱼类和海产品874杂品586乳制品895家禽类984所有样品74注y为测试片方法菌落数的对数值x为参考方法菌落数的对数值。8耐变性

T2选用两个污染水平的纯牛奶样品对培养温度和培养时间两个变量进行耐变性试验。经验证培养温度选择5℃和7℃培养时间选择h和h对检测结果的标准偏差r与在重复性条件下得到的标准偏差r无显著差异表明说明书中对培养温度61℃和培养时间h的耐变性范围不影响检测结果。见表。表3耐变性试验结果实验条件菌株添加水平测试结果值平均值SrRSD123457℃h高水平27016701低水平908490547℃h高水平12530678低水平319951825℃h高水平96013280低水平435254335℃h高水平29395003低水平39409126批间变异取3个不同批号测试片对两个污染浓度奶粉样品进行批间变异实验3个不同批号测试片测试结果的标准偏差与在重复性条件下得到的标准偏差没有明显差别说明不同批号产品无明显差异。见表。表4批间变异试验结果菌株浓度批号测定结果值平均值SrRSD12345高水平1A251032086A688693148A43368519总平均值4总Sr8低水平1A501555376A185185108A88158686总平均值5总Sr99T2实验室间验证试验8家实验室对高中低3个接种水平样品的5个平行测试结果室间重复性和再现性分析表明方法稳定可靠。见表。表5实验室间验证试验结果添加水平实验室数rR参考法测试片法参考法测试片法高86161中82424低817170T2附 录C规范性)培养基和试剂磷酸盐缓冲液成分磷酸二氢钾4) g蒸馏水 0LH值 2制法贮存液称取g的磷酸二氢钾溶于0L蒸馏水中用大约5L的1L氢氧化钠溶液调节用蒸馏水稀释至0L后贮存于冰箱。稀释液取贮存液5用蒸馏水稀释至0分装于适宜容器中于1℃高压下灭菌5。