山梨醇脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书-可见分光光度法UPLC-MS-4247

电话：400-998-2324邮箱：service_uplc_ms@163.com网址：本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司第第页山梨醇脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法UPLC-MS-424750T/48S试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×5瓶2-8℃保存试剂二液体12mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体12mL×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×5支-20℃保存试剂五液体55mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂一：取10mL试剂五加入1瓶试剂一粉剂中溶解，再加入一支试剂四，现用现配，24h变质；2、标准品：临用前加入1.4mL蒸馏水，即10μmol/mLNADH标准品。-20℃保存4周，避免反复冻融。SDH（EC4）SDHNAD+NADHNADHNBTSDHSorbitol+NAD+

SDH

NADH+H++FructoseH++PMS+NBT Formazan（570nm）2-3可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声破碎仪，1mL玻璃比色皿、研钵/一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1（104个（为50~1001建议01L2031030次；00×g102gL为5~100.1g1L，80004℃10min3、血清（浆）样本：直接检测。二、测定步骤1、可见分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。2、标准管的测定：将10μmol/mLNADH标准品用水稀释至1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3μmol/mL的标准溶液序号稀释前浓度（µmol/mL）标准液体积（µL）蒸馏水体积（µL）（µmol/mL）110100900121180200.931160400.841140600.751120800.6611001000.571801200.481601400.3实验中每个标准管需100µL标准溶液。试剂名称(μL)标准管空白管标准溶液100-蒸馏水-100试剂二150150试剂三150150试剂一600600混匀后室温避光放置20min，之后分别测定标准管和空白管在570nm下的吸光度，记为A标准管、A空白管，计算ΔA标准=A标准管-A空白管。标准曲线只需做1-2次。3、样本的测定：试剂名称(μL)测定管样本100试剂二150试剂三150试剂一6001mL103570nm310A2ΔA=A2-A1（）三、SDH活性计算1、标准曲线的绘制：ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。2、SDH活性计算：（）SDH单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟生成1nmolNADH定义为一个酶活力单位。SDH（U/mL）=1000×x×V样÷V样÷T=333×xSDH1）按样本蛋白浓度计算单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmolNADH定义为一个酶活力单位。SDH（U/mg样样2）单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmolNADH定义为一个酶活力单位。SDH（U/g样样样总单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmolNADH定义为一个酶活力单位。SDH（U/104cell）=1000×x×V样÷(500×V样÷V样总)÷T=0.666×xV样：加入样本体积，0.1mL；V样总：提取液体积，1mL；T：反应时间，3min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL